(CDCl3)
phytene -1,2-diol (CDCl3)
1 65.4 65.8
2 74.8 75.1
3 148.5 148.9
31 110.3 110.6
4 32.8 33.1
5 25.3 25.7
6 36.6 36.9
7 32.6 32.8
8 37.2 37.5
9 24.2 24.5
10 37.1 37.5
11 32.5 32.9
12 37.2 37.4
13 24.6 24.8
14 39.1 39.5
15 27.7 28.0
16 22.4 22.6
17 22.5 22.7
18 19.5 19.7
19 19.5 19.8
【十】化合物Ⅹ：1,2-dihydroxypropyl hexadecanoate
化合物Ⅹ為白色針狀結晶（n-hexane/chloroform），測其熔點為 71-73℃，其 TLC 片經溶媒（chloroform：ethyl acetate＝1：1）
展開 Rf值為 0.43，噴 10 % H2SO4加熱後呈藍色。
紅外光光譜（圖 55）顯示，在 3300 cm-1附近有-OH 基的吸收帶，
2917、2856 cm-1為飽和碳氫鍵伸縮振動之吸收，1737 cm-1為 C = O 基的吸收峰，1466 cm-1為 CH 的變角運動，1181、1050 cm-1為醇類 C-O 基伸縮振動的吸收訊號。
由 EIMS 圖譜（圖 56）顯示其 m/z 331 [M+1]+為準分子離子峰，
即分子量為 330。
氫譜（CDCl3, 圖 57）顯示δ0.88（t, J = 6.8 Hz, 3H）為長鏈末端 甲基之吸收訊號，δ1.26（s, br）為長鏈 methylene（CH2）的吸收訊 號，δ2.36（t, J = 7.4 Hz, 2H）為 carbonyl group 旁 O = C-CH2質子的 吸收訊號，δ2.07（t, br, H）、2.51（d, br, H）分別為 C-3 及 C-2 上之 -OH 基的吸收訊號，δ3.63、4.19（m, 2H）為 CH2OH 質子的吸收訊 號，δ3.94（m, H）為 CHOH 質子的吸收訊號。
COSY 光譜（圖 58）顯示δ2.36 和 1.63 相互偶合，δ 3.63 和 3.94 相互偶合，δ4.19 和 3.94 相互偶合。
碳譜（CDCl3, 圖 59）顯示δ13.9 為長鏈末端甲基碳的吸收訊號，
δ22.4~33.9為長鏈 methylenes （CH2）的吸收訊號，δ174.1為 carbonyl group（C = O）的吸收訊號。
由 HMQC 光譜（圖 60）與文獻(53)的對照，決定了 2 個 CH2（δ 63.1、64.9）為 C-3、C-1，1 個 CH（δ70.0）為 C-2。
表 7. 化合物 X 之 NMR 光譜數據
ID 13C 1H COSY
1 64.9 4.19 (m, 2H) H-2 2 70.0 3.94 (m, H) H-1, H-3 3 63.1 3.63 (m, 2H) H-2
綜合上述資料，並與文獻(54,55)比對後，推定此化合物應為 1,2-dihydroxypropyl hexadecanoate，其結構如下：
OH CH2
CH OH
CH2 O CH2
O
C (CH2)13CH3
2 1
3
第三章 白鳳菜粗抽物與成分之活性
第一節 抗過敏、抗發炎之活性
一、白鳳菜各抽取物之抗過敏、抗發炎活性
將白鳳菜各粗抽物分別以 compound 48/80 和 fMLP 為引發劑
（inducing agent），測試甲醇抽取物及各分劃層對大白鼠的肥大細胞
（mast cell）釋放 ß-glucuronidase、histamine 之抗過敏活性試驗和大 白鼠的嗜中性白血球（neutrophil）釋放 ß-glucuronidase、lysozyme 之 抗發炎活性試驗，其結果分別如表 8、9。
表 8、白鳳菜之甲醇抽取物及各分劃層對肥大細胞釋放 ß-glucuronidase、histamine 之抑制活性
Drug (µg/ml) Percent Release
β-glucuronidase (% inh) Histamine (% inh)
3.Mepacrine：positive control 4.Inducer：compound 48/80 (10µg/ml)
表 9、白鳳菜之甲醇抽取物及各分劃層對嗜中性白血球釋放 ß-glucuronidase、
lysozyme 之抑制活性
Drug (µg/ml) Percent Release
Fr. Chloro(1) (3)
1.*p<0.05；**p<0.01；N = 3；----：not determined
2.Fr.Me：甲醇抽取物。Fr.Hex：正己烷抽取物。Fr.Chloro：氯仿抽取物。Fr.Ea：乙酸乙酯抽取物。Fr.Wa：水層抽取物。
3.Trifluoperazine（TFP）：positive control 4.Inducer：fMLP (1µM) / cytochalasin B (5µg/ml)
發肥大細胞釋放 ß-glucuronidase 和 histamine 有稍微的抑制活性，而 其餘分劃層並無明顯的抑制活性。
表 9 顯示 Fr.Hex (10 µg/ml)、Fr.Chloro (10 µg/ml)、Fr.Ea (30 µg/ml) 對 fMLP 所引發嗜中性白血球釋放 ß-glucuronidase和 lysozyme 有明顯 的抑制活性，顯示具有抗發炎之成分活性存在。Fr.Hex、Fr.Chloro、
Fr.Ea 抑制 fMLP 所引發嗜中性白血球釋放 ß-glucuronidase 和 lysozyme 的 IC50分別為 3.2±0.8 µg/ml 及 1.9±0.2 µg/ml、3.6±1.2 µg/ml 及 5.4±2.5 µg/ml、6.0±1.4 µg/ml 及 10.0±2.8 µg/ml。以上各分劃都與 TFP 一樣有 不錯的抑制活性，而且結果顯示抗發炎的有效成分主要在正己烷及氯 仿抽取物中。
第二節 抗細胞增殖之活性
一、白鳳菜各抽取物之抗細胞增殖活性
利用 MTT 活性測試甲醇抽取物及各分劃層對 HL-60 癌細胞的增 殖影響，其結果如表 10。
表 10、白鳳菜之甲醇抽取物及各分劃層對 HL-60 細胞的抑制活性
Compound Conc.
(µg/ml)
1. HL-60 cells ( 2 × 104 ) were incubated with different concentration in 72 hrs. Data was presented as mean ± SD from three separate experiments.
2.Fr.Me：甲醇抽取物。Fr.Hex：正己烷抽取物。Fr.Chloro：氯仿抽取物。Fr.Ea：乙酸乙酯抽取物。Fr.Wa：水層抽取物。
3. *p < 0.05 compared with control. **p < 0.01 compared with control.***p < 0.001 compared with control. ND : none do 4. RA (retinoic acid) : positive control
表 10 顯示 Fr.Hex (10 µg/ml)、Fr.Chloro (25 µg/ml)、Fr.Ea (50 µg/ml) 對於 HL-60 細胞有顯著的抑制活性，顯示其具有抗細胞增殖的作用。
其抑制 HL-60 細胞之 IC50分別為 4.8 µg/ml、23.9 µg/ml、29.5 µg/ml。
由結果顯示抑制 HL-60 增殖的活性成分為脂溶性分子有機成分，分 布在正己烷、氯仿及乙酸乙酯抽取物中。
由氯仿抽取物中，單離得到九個化合物和一個混合物，部分化合物之 抗細胞增殖試驗活性結果如表 11，其餘化合物之抗細胞增殖藥理活 性試驗因溶解度不足而失敗須重測試。
表 11、白鳳菜單離後所得化合物對 HL-60 細胞的抑制活性
Compound Conc.
(µg/ml)
1. HL-60 cells ( 2 × 104 ) were incubated with different concentration in 72 hrs. Data was presented as mean ± SD from three separate experiments.
2. *p < 0.05 compared with control. **p < 0.01 compared with control.***p < 0.001 compared with control. ND : none do 3. RA (retinoic acid) : positive control
表 11 顯示白鳳菜分離之化合物 III (100 µg/ml )、化合物 IV (50 µg/ml)、化合物 IX (50 µg/ml)對於 HL-60 細胞有顯著的抑制活性，顯 示其具有抗細胞增殖的作用。其抑制 HL-60 細胞之 IC50分別為 60.8 µg/ml、23.6 µg/ml、21.3 µg/ml。所顯示的活性均比 RA 弱。
第四章 結論
白鳳菜甲醇粗抽物以氯仿抽取的分劃層中進行分離及純化，共單 離得到九個化合物及一個混合物：docosane (I)、methyl hexadecanoate (II)、methyl oleate (III)、methyl linoleate (IV)、friedelin (V)、ß-sitosterol 及 stigmasterol 混合物 (VI)、methyl 132-hydroxy- (132-S)-pheophorbide b (VII)、methyl 132-hydroxy-(132-S)- pheophorbide a (VIII)、7,11,15 -trimethyl-3-methylene-1,2-hexadecanediol (IX)、1,2-dihydroxypropyl hexadecanoate (X)。以上九個化合物及一個混合物均為已知的，但其 中除了 friedelin (V)、ß-sitosterol 及 stigmasterol 混合物 (VI)外，其餘 都是第一次於白鳳菜中分離得到。
在白鳳菜各層抽取物之藥理實驗結果發現 Fr.Hex、Fr.Chloro、
Fr.Ea 對 fMLP 所引發嗜中性白血球釋放 ß-glucuronidase 和 lysozyme 有明顯的抗發炎活性，且對 HL-60 細胞也有明顯的抗細胞增殖活性。
但對 compound 48/80 所引發肥大細胞釋放 ß-glucuronidase 和 histamine 的抗過敏活性卻很微弱。
白鳳菜分離所得化合物中，methyl oleate (III)、methyl linoleate (IV)、7,11,15 -trimethyl-3-methylene-1,2-hexadecanediol (IX)對於 HL-60 細胞有明顯的抑制活性，顯示其具有抗細胞增殖的作用。其餘化合物 因實驗失敗須重測。其餘各分劃，尚待盡一步研究，因實際上還有許 多活性成份尚未分離出來。
白鳳菜分離所得之化合物抗過敏、抗發炎活性試驗送測中。
第一章 試藥與儀器
第一節 試藥
一、成分抽取、薄層層析及管柱層析用溶媒
n-hexane、benzene、chloroform、ethyl Acetate、n-butanol、acetone、
methanol 等購自 TEDIA (ACS 級)。
二、測紫外光光譜用溶媒
methanol 購自默克公司(Merck Taiwan, LTD, 台北)之高效液相層 析級用溶媒(HPLC grade)。
三、核磁共振光譜用
chloroform-d1 (deuteration degree 99.5%)、dimethylsulfoxide-d6 (deuteration degree 99.8%)、methanol-d4 (deuteration degree 99.5%)、pyridine-d6 (deuteration degree 99.5%)等購自默克公司 (Merck Taiwan, LTD, 台北)。
四、管柱色層分析(column chromatography)填充劑 1. silica gel
Merck Kieselgel 60 (70-230 mesh, Art. 7734)；
Merck Kieselgel 60 (230-400 mesh, Art. 9385)。
2. cellulose microcristalline (Merck , Art. 2331)。
五、薄層色層分析 (thin-layer Chromatography)
1. TLC aluminium sheets (silica gel 60 F254, 20 × 20 cm, 0.2 mm layer, Art. 5554, E. Merck)。
2. DC-Alufolien cellulose F (20 × 20 cm, 0.1 mm, Art. 5574, E.
Merck)。
六、製備色層分析 (preparative TLC)
採用 PLC plates Silica gel 60 F254 concentrating zone (20 × 20 cm, 1 mm, E. Merck)。
第二節 儀器
一、熔點測定儀 (melting point apparatus)
本實驗熔點測定儀採用 Yanaco MP-500D 熔點測定儀，測定範 圍在 40-500 ℃，溫度未經校正。
二、紫外光-可見光光譜儀 (UV-visible spectrometer)
紫外光-可見光光譜分析採用 Shimadzu UV-160A UV-visible recording spectrophotometer。
三、紅外光光譜儀 (infrared spectrometer, IR)
紅外光光譜分析採用 Nicolet Impact 400 FT-IR
spectrophotometer，以溴化鉀粉末作為打錠稀釋劑；單位為波數 (cm-1)。
四、質譜儀 (mass spectrometer, MS)
EIMS：使用 VG PLATFORM II 測定，離子化電壓為 70 ev，單 位為 m/z。
FABMS：使用 JEOL JMS-SX/SX 102A tandem mass spectrometer。（中興大學）
採用 DPX-200 及 DPX-400 FT-NMR spectrometer。以δ表示化 學位移(chemical shift)，單位為 ppm，以 TMS (tetramethylsilane ; δ= 0 ppm)為內部標準品。偶合常數(J)以 Hz 為單位，並以 s 表 單峰(single)，d 表二重峰(doublet)，t 表三重峰(triplet)，q 表四重 峰(quartet)，sept 表七重峰(septet)，m 表多重峰(multiplet)，br 表 寬峰。
六、紫外光燈(UV lamp)
CAMAG UV-Cabinet II ，wavelength 254 nm 及 366 nm。
第二章 成分抽取與分離方法
白鳳菜為民國 89 年 10 月購置於台中青草店，經由本校中國藥學 研究所邱年永技正鑑定基原，確定為菊科(Compositae)三七草屬 (Gynura)植物白鳳菜(Gynura divaricata (L.) DC. subsp. formosana (Kitam.) F. G. Davies)。
第一節 預試驗粗抽物之製備
取白鳳菜生品一部份約 150 g，陰乾後進行研究。將白鳳菜以果 汁機打碎後，用甲醇浸漬抽取至近無色，合併抽取液，經減壓濃縮得 甲醇粗抽取物 Fr. Me（6.26 g）。將甲醇抽取物懸浮於水中，再以正己 烷抽取數次至近無色，合併抽取液，經減壓濃縮得正己烷抽取物 Fr.
Hex（1.25 g）。剩餘的水層再以氯仿抽取數次至近無色，合併抽取液，
經減壓濃縮得氯仿抽取物 Fr. Chloro（0.4 g）。剩餘的水層再以乙酸乙 酯抽取數次至近無色，合併抽取液，經減壓濃縮得乙酸乙酯抽取物 Fr. Ea（0.2 g）。最後剩餘的水層經冷凍乾燥後得水層抽取物 Fr. Wa
（2.51 g）。
將此五個分劃層送往台中榮總醫院醫研部進行抗發炎、抗過敏試 驗及本所進行抗細胞增殖活性試驗。
上述五種分劃層，經由抗發炎及抗細胞增殖活性藥理測試，結果 發現低極性的正己烷抽取物與氯仿抽取物有較佳的藥理活性。於是此 次實驗決定用氯仿抽取，以一併抽出中低極性的有效成分。
取白鳳菜生品 60 公斤，陰乾後，以果汁機打碎用甲醇浸漬抽取約 20 次，合併抽取液，經減壓濃縮得甲醇粗抽取物 795 克。將甲醇抽取物 懸浮於水中，再以氯仿抽取數次至近無色，合併抽取液，經減壓濃縮 得氯仿抽取物 79 克。剩餘的水層經冷凍乾燥後得水層抽取物。
取氯仿抽取物，經矽膠管柱色層分析法（70-230 mesh），以氯仿、乙 酸乙酯、甲醇為梯度沖提液，依極性大小不同將收集液粗分成
Fr.A~Fr.F，分別進行 Fr.A~Fr.F 的成分單離，抽取及分劃流程依圖 61。
(60Kg)
白鳳菜生品 陰乾後以果汁機打碎