Concentration of apigenin (mM)

Control 0.6 6 60 150 300

Ratio of cyclin B1 mRNA

0.0 0.5 1.0 1.5

Figure 17. RT-PCR analysis of cyclin B1and beta-actin in human stomach cancer (SC-M1) cells for treatment with different doses of apigenin. (A) Gel electrophoresis. Lane 1：

DMSO；Lane 2：0.6 µM；Lane 3：6 µM；Lane 4：60 µM；Lane 5：150 µM；Lane 6：300 µM. (B) The statistic figure of cyclin B1 mRNA levels. Values are mean±

SD n= 2

β-actin (353 bp)

Cyclin B1 (720 bp)

1 2 3 4 5 6

Control 0.6 6 60 150 300

Ratio of cyclin D1 mRNA

0.0 0.5 1.0

Figure 18. RT-PCR analysis of cyclin D1and beta-actin in human stomach cancer (SC-M1) cells for treatment with different doses of apigenin. (A) Gel electrophoresis. Lane 1：DMSO；Lane 2：0.6 µM；Lane 3：6 µM；Lane 4：60 µM；Lane 5：150 µM；

Lane 6：300

µM. (B) The statistic figure of cyclin D1 mRNA levels. Values are

mean± SD n= 2

β-actin (353 bp)

Cyclin D1 (495 bp)

1 2 3 4 5 6

Concentration of apigenin (mM)

Control 0.6 6 60 150 300

Ratio of CDK2 mRNA

0.0 0.5 1.0

Figure 19. RT-PCR analysis of CDK2 and beta-actin in human stomach cancer (SC-M1) cells for treatment with different doses of apigenin. (A) Gel electrophoresis. Lane 1：DMSO；Lane 2：0.6 µM；Lane 3：6 µM；Lane 4：60 µM；Lane 5：150 µM；

Lane 6：300

µM. (B) The statistic figure of CDK2 mRNA levels. Values are

mean± SD n= 2

β-actin (353 bp)

CDK2

(330 bp)

1 2 3 4 5 6

Concentration of apigenin (mM)

Control 0.6 6 60 150 300

Ratio of p21 mRNA

0.0 0.5 1.0

Figure 20. RT-PCR analysis of p21 and beta-actin in human stomach cancer (SC-M1) cells for treatment with different doses of apigenin. (A) Gel electrophoresis. Lane 1：

DMSO；Lane 2：0.6 µM；Lane 3：6 µM；Lane 4：60 µM；Lane 5：150 µM；Lane 6：300 µM. (B) The statistic figure of p21 mRNA leve ls. Values are mean± SD

β-actin (353 bp)

p21 (380 bp)

1 2 3 4 5 6

Concentration of apigenin (mM)

Control 0.6 6 60 150 300

Ratio of p53 mRNA

0.0 0.5 1.0

Figure 21. RT-PCR analysis of p21 and beta-actin in human stomach cancer (SC-M1) cells for treatment with different doses of apigenin. (A) Gel electrophoresis. Lane 1：

DMSO；Lane 2：0.6 µM；Lane 3：6 µM；Lane 4：60 µM；Lane 5：150 µM；Lane 6：300 µM. (B) The statistic figure of p53 mRNA levels. Values are mean± SD n= 2

β-actin (353 bp)

p53 (293 bp)

(二)檢測 17

α

-estradiol 對胃癌細胞株(SC-M1)細胞生長方面的影響

由實驗結果 Figure 23.至 Figure 28.發現當 17

α

-estradiol (60、100、150

µ

M) 濃度增加，SC-M1 細胞的細胞膜漸漸產生皺折而且懸浮在細胞培養液的細胞成凋亡(apoptosis)更明顯，因此我們可以推論胃癌細胞在 17

α

-estradiol 24 和 48 小時作用之後所造成的細胞死亡是使 SC-M1 細胞 DNA 產生斷裂造成細胞的凋亡。

(4) 檢測 17

α

-estradiol 對胃癌細胞株(SC-M1)細胞週期的影響

由實驗結果 Figure 30.觀察到 17

α

-estradiol (60、150、300、600

µ

M)可使 SC-M1 細胞週期停止在 G2/M 期，隨著藥物濃度的增加停止於 G2/M 期細胞漸增，且在 24 小時作用後，SC-M1 細胞停止在 G2/M 期的最明顯，而在 6 和 12 小時細胞週期並沒有受到影響。從 18 小時作用已經可以初步看到，因為在 18 小時已經可以發現隨著17

α

-estradiol 藥物濃度增加，停在 G0/G1 期的 SC-M1 細胞已經漸漸減少，相對的 S 和 G2/M 期則是漸漸上升。

(5) 檢測 17

α

-estradiol 對胃癌細胞株(SC-M1)細胞週期素(Cyclins)的影響

由細胞週期的結果已經發現在 24 小時 17

α

-estradiol 可使 SC-M1 細胞的細

CDK1 隨著濃度增加很明顯受到抑制，而調節細胞週期由 S 期進入 G2/M 期的 cyclin E 和 CDK2 及調節 G0/G1 期的 cyclin D1、cyclin D2、cyclin D3 和 CDK6 則是沒有很大影響。

SC-M1 細胞內 p53 經 24 小時 17

α

-estradiol 作用後，隨著濃度增加並沒有很明顯受到抑制，控制組 88.40±1.08，實驗組分別為 0.6

µ

M：85.87±0.24、6

µ

M：84.43±1.00、30

µ

M：81.23±1.19、60

µ

M：80.03±1.00、100

µ

M：78.47±

0.59、150

µ

M：77.88±0.41 及 300

µ

M：71.81±0.75，此結果可由統計 Figure 32 顯示。

(6) 檢測 17

α

-estradiol 對人類胃癌細胞株(SC-M1)細胞內細胞週期素(Cyclins)基因表現的影響

經 24 小時作用後發現 SC-M1 細胞內調節細胞週期 G2/M 期的 cyclin B1 mRNA 的量並沒有隨著 17

α

-estradiol 濃度增加而受到抑制(Figure 33.)，調節細胞進入 G0/G1 期的 cyclin D1 及 CDK2 mRNA 的量也沒有受到抑制(Figure 34、

35)，但是 cyclin E 隨著濃度增加漸漸受到抑制 (Figure 36.) 。對於 cyclin- dependent kinase inhibitor 包括 p53 和 p21 方面，p53 mRNA 的量(Figure 37.) 沒有明顯受到 17

α

-estradiol 的抑制，而 p21 mRNA 的量(Figure 38.)則是漸漸增加。

Incubation time (hr)

Figure 22. Percentage of viable SC-M1 cells after cotreatment with different doses of 17α-estradiol for 6, 12, 18, 24, 36 and 48 hrs incubated. After the treatment of various concentrations of apigenin, cells were harvested PI stain solution and assayed for % viable cells by FACS analysis. Data were analyzed by one-way ANOVA.

Value= mean± SD, n=3 *P<0.05, **P<0.005, ***P<0.001

A. B.

C. D.

E. F.

Figure 23. The morphology of human stomach cancer (SC-M1) cells after exposure to 17α-estradiol for 6 hr then were examined and photographed by phase microscope (200x). A：Control, B：6 µM, C：30 µM, D：60 µM, E：100

µM, F：150 µM.

A. B.

C. D.

E. F.

Figure 24. The morphology of human stomach cancer (SC-M1) cells after exposure to 17α-estradiol for 12 hr then were examined and photographed by phase microscope (200x). A：Control, B：6 µM, C：30 µM, D：60 µM, E：100

µM, F：150 µM.

A. B.

C. D.

E. F.

Figure 25. The morphology of human stomach cancer (SC-M1) cells after exposure to 17α-estradiol for 18 hr then were examined and photographed by phase microscope (200x). A：Control, B：6 µM, C：30 µM, D：60 µM, E：100

µM, F：150 µM.

A. B.

C. D.

E. F.

Figure 26. The morphology of human stomach cancer (SC-M1) cells after exposure to 17α-estradiol for 24 hr then were examined and photographed by phase microscope (200x). A：Control, B：6 µM, C：30 µM, D：60 µM, E：100

µM, F：150 µM.

A. B.

C. D.

E. F.

Figure 27. The morphology of human stomach cancer (SC-M1) cells after exposure to 17α-estradiol for 36 hr then were examined and photographed by phase microscope (200x). A：Control, B：6 µM, C：30 µM, D：60 µM, E：100

µM, F：150 µM..

A. B.

C. D.

E. F.

Figure 28. The morphology of human stomach cancer (SC-M1) cells after exposure to 17α-estradiol for 48 hr then were examined and photographed by phase microscope (200x). A：Control, B：6 µM, C：30 µM, D：60 µM, E：100

µM, F：150 µM.

1 2 3 4 5 6 7 B.

1 2 3 4 5 6 7

Figure 29. An agarose electrophresis of DNA from human stomach cancer (SC-M1) cells after exposure to various concentrations of 17α-estradiol for A：24 hr；B：48 hr. Lane 1：Maker；Lane 2：DMSO；Lane 3：6