（c）48 小時
（d）72 小時
圖 5-3（a）12 小時 （b）24 小時 （c）48 小時（d）72
小時 MTT 細胞存活曲線
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5.4 Wortmannin 對攝入半致死濃度氧化鋅奈米粒子細胞毒性之影響
（a）20nm
（b）150nm
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（c）700nm
圖 5-4 Wortmannin MTT assay （a）20nm（b）150nm
（c）700nm 氧化鋅奈米粒子
由
Wortmannin 的 MTT 測試我們可以發現在 24 小時內，Wortmannin 對於三種尺寸的奈米粒子對細胞所造成的毒性皆有一 定的減緩作用。由圖 5-4（a）、（b）可以發現攝入 20nm 及 150nm 的奈米粒子在 72 小時的全程實驗時間中，有加入 Wortmannin 的 細胞存活率很明顯的高於只有氧化鋅奈米粒子之細胞。而圖 5-4
（c）則是在 24 小時內有較少的減緩作用，但是在 48 小時以後可 以發現加入 Wortmannin 的細胞存活率反而低於單純只加奈米粒子 的存活率，對於這種情形我們推測有可能是於 24 小時內攝入 700nm 的奈米粒子之 Wortmannin 已經被細胞吸收作用殆盡，所以
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療效減低並且由於 Wortmannin 本身亦有一定的細胞毒性，在此時 因為療效已消失且 Wortmannin 的毒性亦顯現出來，再加上奈米粒 子的毒性雙重作用下使得細胞存活率比只有攝入奈米粒子的細胞 還要低。
5. 5 Wortmannin 的 SEM
(a) (b)
(c) (d)
圖 5-5.1 24 小時之 SEM(a)正常 (b)只添加 Wortmannin(c) 、(d)分為攝 入 20nm 氧化鋅及再添加 Wortmannin 的細胞
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(a) (b)
(c) (d)
圖 5-5.2 24 小時之 SEM(a)、(c)分別攝入 150nm 及 700nm (b)Wortmannin+150nm 、(d) Wortmannin+700nm 氧化鋅的細胞
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(a) (b)
(c) (d)
圖 5-6.1 48 小時之 SEM(a)正常 (b)只添加 Wortmannin(c) 、(d)分為 攝入 20nm 氧化鋅及再添加 Wortmannin 的細胞
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(a) (b)
(c) (d)
圖 5-6.2 48 小時之 SEM(a)、(c)分別攝入 150nm 及 700nm (b)Wortmannin+150nm 、(d) Wortmannin+700nm 氧化鋅的細胞
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(a) (b)
(c) (d)
圖 5-7.1 72 小時之 SEM(a)正常 (b)只添加 Wortmannin(c) 、(d)分為 攝入 20nm 氧化鋅及再添加 Wortmannin 的細胞
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(a) (b)
(c) (d)
圖 5-7.2 72 小時之 SEM(a)、(c)分別攝入 150nm 及 700nm (b)Wortmannin+150nm 、(d) Wortmannin+700nm 氧化鋅的細胞
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藉由以上圖 5-5、圖 5-6 及圖 5-7 細胞的 SEM 圖，我們可以明顯 發現無論是 20nm、150nm 或是 700nm 的氧化鋅奈米粒子均會使得 細胞的 morphology 產生改變，尤其 48 小時的 SEM 圖 5-6.1(c)及圖 5-6.2(a)、(c)可以很明顯的看出細胞培養液中加入奈米粒子時(圖 5-8)，細胞會產生圓形的類似 Endocytosis 或是 Exocytosis 的現象。
(a) (b) 改變，亦有可能是細胞的 Endocytosis 或是 Exocytosis，但是目前我
圖 5-8（a）20nm ZnO 中細胞局部 放大（b）150nm ZnO 中細胞局部 放大（c）700nm ZnO 中細胞局部 放大
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們尚無法確認。而除了這種細胞上特殊形貌的發生之外，我們也發現 細胞周圍的延伸觸角也消失了，細胞與細胞之間幾乎毫無空隙的緊密 連接，細胞也變的較為扁平，幾乎可說是看不到細胞了，我們推測可 能是添加了奈米粒子使細胞骨架產生改變，甚至是導致了細胞凋亡 (apoptosis) ，這與我們的 MTT assay 結果是相符的。
而由圖 5-5.1(d)、5-5.2(b) 、(d) 、圖 5-6.1(d) 、圖 5-6.2(b) 、(d) 、 圖 5-7.1(d) 及圖 5-7.1(b) 、(d)均可發現當含奈米粒子的細胞培養液添 加 Wortmannin 時，可以發現原先細胞表面的圓形 morphology 消失 了，有些細胞甚至恢復了較接近原先正常的 morphology，由此我們可 知 Wortmannin 對於奈米粒子毒性有改善的效果，這個現象的原理是 以後所必須探討的，而若培養液中只有 Wortmannin 而無奈米粒子 時，也可以發現細胞的 morphology 圖 5-5.1(b) 、圖 5-6.1(b) 及圖 5-7.1(b) 也 是 有 相 當 程 度 的 改 變 ， 這 亦 可 證 實 我 們 之 前 所 說 的 Wortmannin 也是有細胞毒性的。
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