紅腺忍冬葉部之化學成分研究; Studies on the Chemical constituents of the Leaves of Lonicera hypoglauca MIQUEL
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(2) Figure 1 忍冬之本草系統圖…………………………………………6 Figure 2 紅腺忍冬(Lonicera hypoglauca MIQUEL)在臺灣分布圖….17 Figure 3 紅腺忍冬(Lonicera hypoglauca MIQUEL)寫生圖………….18 Figure 4 紅腺忍冬(Lonicera hypoglauca MIQUEL)植物外形圖…….53 Figure 5 紅腺忍冬葉部正己烷粗抽物之分離流程………………..60 Figure 6 紅腺忍冬葉部乙酸乙酯粗抽物之分離流程……………..61 Figure 7 EI-MS spectrum of compound I………………………….116 Figure 8 IR spectrum of compound I………………………………116 Figure 9 1H-NMR spectrum of compound I………………………..117 Figure 10. 13. C-NMR spectrum of compound I……………………...117. Figure 11 EI-MS spectrum of compound II………………………..118 Figure 12 IR spectrum of compound II…………………………….118 Figure 13 1H-NMR spectrum of compound II……………………..119 Figure 14. 13. C-NMR spectrum of compound II…………………….119. Figure 15 EI-MS spectrum of compound III……………………….120 Figure 16 IR spectrum of compound III……………………………120 Figure 17 1H-NMR spectrum of compound III…………………….121 Figure 18. 13. C-NMR spectrum of compound III……………………121. Figure 19 DEPT spectrum of compound III………………………..122 Figure 20 EI-MS spectrum of compound IV………………………122 Figure 21 IR spectrum of compound IV…………………………...123 Figure 22 1H-NMR spectrum of compound IV…………………….123 Figure 23. 13. C-NMR spectrum of compound IV……………………124. Figure 24 DEPT spectrum of compound IV……………………….124 Figure 25 EI-MS spectrum of compound V………………………..125.
(3) Figure 26 IR spectrum of compound V…………………………….125 Figure 27 1H-NMR spectrum of compound V……………………..126 Figure 28. 13. C-NMR spectrum of compound V…………………….126. Figure 29 DEPT spectrum of compound V………………………...127 Figure 30 HMQC spectrum of compound V……………………….127 Figure 31 HMQC spectrum of compound V……………………….128 δ1H: 0-2.2 ppm, δ13C: 7-65 ppm Figure 32 EI-MS spectrum of compound VI………………………128 Figure 33 IR spectrum of compound VI…………………………...129 Figure 34 UV spectrum of compound VI………………………….129 Figure 35 1H-NMR spectrum of compound VI……………………130 Figure 36. 13. C-NMR spectrum of compound VI…………………...130. Figure 37 DEPT spectrum of compound VI……………………….131 Figure 38 H,H-COSY spectrum of compound VI………………….131 Figure 39 H,H-COSY spectrum of compound VI………………….132 δ1H: 2-8 ppm Figure 40 HMQC spectrum of compound VI……………………...132 Figure 41 HMQC spectrum of compound VI……………………...133 δ1H: 5-7.5 ppm, δ13C: 71-138 ppm Figure 42 HMBC spectrum of compound VI……………………..133 Figure 43 HMBC spectrum of compound VI……………………..134 δ1H: 4.6-8 ppm, δ13C: 85-188 ppm Figure 44 EI-MS spectrum of compound VII……………………...134 Figure 45 IR spectrum of compound VII…………………………..135 Figure 46 1H-NMR spectrum of compound VII…………………...135.
(4) Figure 47. 13. C-NMR spectrum of compound VII…………………..136. Figure 48 DEPT spectrum of compound VII………………………136 Figure 49 HMQC spectrum of compound VII……………………..137 Figure 50 HMQC spectrum of compound VII……………………..137 δ1H: 0-2.2 ppm, δ13C: 7-65 ppm Scheme 51 3-acetyloleanolic acid 之質譜斷裂方式...........................80 Scheme 52 ursolic acid 之質譜斷裂方式...........................................87 Scheme 53 正己烷層之氣相層析圖..................................................90 Scheme 54 正己烷層之 Fraction 2 氣相層析圖…………………….92 Scheme 55 正己烷層之 Fraction 11-42 氣相層析圖……………….94 Scheme 56 正己烷層之 Fraction 55-60 氣相層析圖………………..96 Scheme 57 正己烷層之 Fraction 78 氣相層析圖………………….100 Scheme 58 正己烷層之 Fraction 96-104 氣相層析圖……………..102.
(5) 表目錄 Table 1 忍冬屬植物之化學成分考察………………………………24 Table 2 國內研究之忍冬屬植物化學成分…………………………51 Table 3 Compound V 之 NMR Data…………………………………67 Table 4 Compound VI 之 NMR Data………………………………..69 Table 5 Compound VII 之 NMR Data……………………………….71 Table 6 Rhusflavanone 及 agathisflavone 之 13C spectral Data……..85 Table 7 正己烷層之 GC-MS 分析結果……………………………..90 Table 8 正己烷層 Fraction 2 之 GC-MS 分析結果…………………93 Table 9 正己烷層 Fraction 11-42 之 GC-MS 分析結果……………95 Table 10 正己烷層 Fraction 55-60 之 GC-MS 分析結果……………97 Table 11 正己烷層 Fraction 78 之 GC-MS 分析結果……………..100 Table 12 正己烷層 Fraction 96-104 之 GC-MS 分析結果…………103.
(6) 紅腺忍冬葉部之化學成分研究 江雯怡 中國醫藥大學 中國藥學研究所 中文摘要 忍冬藥用歷史悠久，為常用的清熱解毒藥，具有抗病原，微生 物、消炎、保肝、止血、免疫調節、降血脂、中樞興奮等作用。 紅腺忍冬分佈於大陸、日本、琉球及臺灣。有關紅腺忍冬之化 學成分及藥理作用，臺灣尚未見任何報導，因此本研究進行此植物 葉部之化學成分分離及鑑定。 紅腺忍冬葉的正己烷及乙酸乙酯抽出物，利用層析法分離，共 分離出 7 個化合物，包括 4 個長鏈烷類，2 個三萜類和 1 個黃酮類， 經由各種光譜分析鑑定為： tritriacotane (I)、tetratriacontanoic acid (II)、4-decanol (III)、4-nonacosanol (IV)、3-acetyl oleanolic acid (V)、rhusflavone (VI)、ursolic acid (VII)。而 3-acetyl oleanolic acid (V)與 rhusflavone (VI)為首次從忍冬屬植物中分離得到。 關鍵語：忍冬、紅腺忍冬、長鏈烷類、三萜、黃酮.
(7) Studies on the Chemical Constituents of the Leaves of Lonicera hypoglauca MIQUEL Wen-Yi Chung Graduate Institute of Chinese Pharmaceutical Science China Medical University. Abstract Jen-Tung has a long medical history for its antipyretic and detoxicating effect. Its actions are antibiotic, anti-inflammatory, heptoprotective, anti-bleeding, immunoregulation, antilipemic, and central exciting etc. Lonicera hypoglauca MIQUEL is distributed in China, Japan, Okinawa and Taiwan. Its chemical constituents and pharmacological effects have never been studied at all in Taiwan. This study deals with the investigation of the chemical constituents of the leaves of this plant. Seven compounds were isolated from hexane and ethyl acetate extracts of the leaves of Lonicera hypoglauca, including four alkanes, two triterpenoids, and one biflavonoid. On the spectroscopic analysis, they were identified as tritriacotane (I), tetratriacontanoic acid (II), 4decanol (III), 4-nonacosanol (IV), 3-acetyl oleanolic acid (V), rhusflavone (VI)and ursolic acid (VII). Among these, 3-acetyl oleanolic acid (V) and rhusflavone (VI) were the first reported from the genus of Lonicera. Keyword: Jen-Tung, Lonicera hypoglauca, alkanes, triterpenoids, biflavonoid.
(8) 第一章. 緒論. 忍冬藥用歷史久遠，為常用的清熱解毒藥，具有消炎及解熱、 保肝、抗病原微生物、止血、降血脂、免疫調節、中樞興奮等作用 1 。 中華本草 2 及中華中藥典 3 收載金銀花為忍冬科 （Caprifoliaceae）植物忍冬（Lonicera japonica THUNBERG）、紅腺忍 冬 （ Lonicera hypoglauca MIQUEL ） 、 山 銀 花 （ Lonicera confuse (SWEET) DC.）或毛花柱忍冬（Lonicera dasystyla REHDER）的乾燥花 蕾或帶初開的花。 金銀花莖枝為上述若干植物的莖枝，又名忍冬藤 2。忍冬科植物 有 18 屬，約 300 多種，主產北半球溫帶和亞熱帶地區 4；大陸有 12 屬，200 餘種 5；臺灣則有 7 種 6-9，第二版臺灣植物誌 6 收載的品項 為川上氏忍冬(Lonicera kawakamii (HAYATA) MASAMUNE)、追分忍冬 (Lonicera oiwakensis HAYATA)、無梗忍冬(Lonicera apodantha OHWI)、 忍冬(Lonicera japonica THUNBERG) 、 裡白忍冬(Lonicera hypoglauca MIQUEL) 、 阿 里 山 忍 冬 (Lonicera acuminata WALLICH) 及 大 花 忍 冬 (Lonicera macrantha DCANDOLL)。.
(9) 第一節 研究之背景及目的 近十幾年來，政府相關單位補助的金銀花的研究計畫 10-16，包 括藥理、植物學、活性成分分離及分析、分子生物學等領域，由此 可知金銀花逐漸地受到國人重視。 2003 年 2 月，亞洲首次發現 SARS 個案。在 SARS 肆虐之下， 金銀花清熱解毒、抗菌消炎功效，使其價格水漲船高。因此開發臺 灣本地的天然藥用資源來舒緩供少於求的情形乃當務之急。 忍冬藤和金銀花均為常用的清熱解毒藥，目前主要以金銀花入 藥，且做為提取綠原酸的原料，但金銀花用量大，且價格不便宜。 隨著金銀花修剪整形技術的推廣，每年可得到大量的枝葉，而這些 枝葉卻長期未充分利用，造成很大的浪費。 根據李玉賢 17 報導的金銀花莖葉藥用價值概述中說到綠原酸為 金銀花與忍冬藤的主要有效成分，且黃酮類物質也是他們抑菌有效 成分。忍冬不同部位綠原酸及黃酮含量也不盡相同 17,18：綠原酸及 黃酮含量都為花與葉相似均大於莖，且無論莖或葉，綠原酸含量均 自下而上逐漸增高，較嫩的部位含量最高。 在金銀花莖葉抑菌防腐和抗氧化活性中發現 17,18，均為葉與花 相似均大於莖。現代研究發現忍冬莖葉，尤其是葉的有效成分及藥 理作用並不亞於金銀花，且忍冬藤葉的資源遠比金銀花豐富，採集 容易，價格便宜，應該充分利用。臺灣產的忍冬屬植物野生於後 龍、大坑、阿里山、新店、雪山、埔里、田中等處 6-7,19，資源並不 亞於大陸，且對於臺灣的環境適應良好、栽培也相當容易，若能分 析出相同或類似的有效成分，則具相當大的開發遠景。 本研究進行忍冬科植物紅腺忍冬(Lonicera hypoglauca MIQUEL)葉 部化學成分分析，探討臺灣產的中藥原植物的化學組成，並期望進 一步做藥理活性測試，進而開發有用的藥用資源。.
(10) 第二節 忍冬之本草學簡介 忍冬藥用歷史久遠，始載於梁 陶弘景名醫別錄17,20-22，書 云：”今處處皆有，似藤生，凌冬不凋，故名忍冬……，十二月 採，陰乾。可見當時僅用忍冬的莖葉入藥，並非忍冬的花，因忍冬 是在初夏開花，不可能在十二月採，且凌冬不凋，由此可知當時以 帶葉的藤入藥。唐 蘇敬唐本草首次記載忍冬花為花白蕊紫，但均未 有金銀花名稱出現；而宋代蘇軾等所著蘇沉良方裡頭才有對忍冬花 的詳細描述21，並首次提出”金銀花”這一名詞及其解釋，書 云：”……四月開花，極芬，香聞數步，初開白色，數日則變黃， 每黃白相間，故名金銀花。” 唐 陳藏器本草拾遺云17：”忍冬，主熱毒、血痢，濃煎服。北 宋嘉佑補注神農本草仍襲”忍冬”之名。南宋 王玠履鑱岩本草雖然 出現金銀花這一名詞，但其內容記述的仍是忍冬的藤。由此可見宋 代以前諸家本草所記載的忍冬，都是使用藤葉，而沒有單獨用花。 明代地方性醫藥名著滇南本草收載：金銀花，性寒味苦，清熱 解諸瘡、痈疽發背、無名腫毒、丹流瘰病。杆能寬中下氣，消疾， 去風熱，清咽喉熱痛。杆即是藤。明 李時珍本草綱目云:忍冬莖葉 及花功用皆同。昔人稱其治風、除脹、解痢為要藥..，後世稱其消 腫，散毒、治瘡為要藥。其所引附方也是莖葉花均入藥。根據上 述，可知明代醫家會依臨床所需，採用忍冬的莖葉，或用其花，屬 莖葉及花並用階段。 明代之後，由於溫病學的發展及對金銀花的效用認識更加全 面，尤其強調用花，忍冬莖葉的應用比較少。如清 汪昂本草備要 云：散熱、補虛、療風、養血止渴，並謂花葉同被，花香為佳。 張壽熙本草正義對歷代本草所載的忍冬及花的功能做一總結， 並將花與葉的療效進行比較，書中寫道17,22“忍冬……，今人多用其 花，實則花性輕揚，力量甚弱，不如枝蔓之氣味俱厚。古人只稱忍 冬，不言其花，則並不用花入藥，自可於言外得之。……壽熙已謂 不如藤葉之力厚，且不僅煎劑之必須，即外用煎湯洗滌亦大 良………”。忍冬之本草系統圖如Figure 1所示。.
(11) 名醫別錄 忍冬 (魏晉名醫集錄) 神農本草經集注 7 卷 忍冬. 新修本草 忍冬 (唐高宗顯慶 4 年 659 AD). 本草拾遺 忍冬 (唐 陳藏器). 開寶重定本草 忍冬 (宋開寶 7 年重校 974 AD). 藥性論 忍冬 (宋朝 日華子). 嘉祐補注神農本草 忍冬 (宋仁宗 6 年 1061 AD). 經史證類備急本草 忍冬 (宋唐慎微 1098). 經史證類大觀本草 忍冬 (宋孫覿刊行 1108). 重修政和經史證類備用本草 忍冬 (南宋張存惠刊 1249). 履巉岩本草 花. 鷺鷥藤、金銀. 本草綱目 忍冬、金銀花、鷺鷥 藤、老翁藤、左纒藤、金釵股 (明李時珍 1593). 本草品彙精要 忍冬、鷺鷥藤、金銀花、老翁鬚、金釵股 (明劉文泰敕撰 1505) 植物名實圖考 金銀花、忍冬、鷺鷥藤、左纒藤 (清吳其濬 1848). Figure 1 忍冬之本草系統圖. 第四節 忍冬之藥理學考察 救荒本草 忍冬、鷺鷥藤、金銀 金銀花性寒，味甘，入肺、胃、大腸經。其功能為清熱解毒， 花 植物名實圖考長編 疏散風熱，涼血止痢。具有消炎及解熱、保肝、抗病原微生物、抗 （明朱橚 1406） 金銀花、忍冬、鷺鷥藤、左纒 生育、止血、降血脂、免疫調節、抗氧化、中樞興奮、抗病毒作用 藤 及抗腫瘤等作用 1-2,21,36-40。 景岳全書 金銀花、忍冬 (清吳其濬 1848) （明張介賓 1640）. 1. 消炎及解熱作用 透過熱刺激引起的輕度燙傷炎性滲出觀察指出，木樨草素具有 減少局部燙傷炎性滲出的作用。從金銀花之揮發油成分中的丁香酚.
(12) 有消炎防腐作用，芳樟醇有平喘鎮咳和治療小兒肺炎及扁桃體炎的 藥理作用。在解熱、消炎、免疫等實驗研究結果表明，其水煮液， 口服液和注射液對角叉菜膠、三聯菌苗致熱有不同程度的退熱作 用，對蛋清、交叉菜膠、二甲苯所致水腫有不同程度的抑制作用， 另外，還能提高鼠腹腔巨噬細胞吞噬巨紅細胞的吞噬百分率和吞噬 指數，從而證明臨床作用透過調節機體免疫功能，達到清熱解毒來 治療感染性疾病。 2. 保肝利膽作用 在動物實驗當中，金銀花中的三萜皂苷對 CCl4 引起的小鼠肝損 傷有明顯的保護作用，並明顯減輕肝臟病理損傷程度。其所含綠原 酸能增進大鼠膽汁分泌；黃褐毛忍冬總皂甙對實驗性肝損傷有保護 作用，其皮下注射能顯著對抗四氯化碳，撲熱息痛及 D-半乳糖胺所 致肝中毒小鼠血清穀丙轉氨酶升高，降低肝臟甘油三酯含量，而減 輕肝臟損傷程度。而總皂苷中 α-常春藤皂苷和無患子皂苷 B 的混合 物對因乙醯氨基酸(paracetamol)所引起小鼠肝臟毒性有保護作用。 3. 抗病原微生物 金銀花所含的有機酸成分-綠原酸、異綠原酸，黃酮類成分-木 樨草素和揮發油類成分-芳樟醇等皆有抗菌作用。金銀花爲廣泛抗菌 藥物，在體外試驗中發現對痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、傷寒桿 菌、副傷寒桿菌、霍亂弧菌、大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌、α溶血鏈球菌、β-溶血鏈球菌、肺炎雙球菌和百日咳桿菌等，有較強 抗菌作用；其酒精浸劑在 1：100000 濃度下仍能抑制人型結核桿菌 生長，減輕該菌所致肺部病變。單味金銀花對小白鼠試驗結核病有 療效。 其水浸劑比煎劑作用強，葉煎劑比花煎劑作用強。金銀花對變 形鏈球菌，具有較好的抑菌和殺菌作用，金銀花與青黴素合用，能 加強青黴素對耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌作用，兩者具有協同作 用。金銀花對鐵銹色小芽孢癬菌、星形奴卡氏菌等皮膚黴菌產生綠 暈現象。金銀花對流感病毒、孤兒病毒、皰疹病毒、猴免疫缺陷病 毒(SIV) 等多種病毒均有抑制作用，金銀花注射液對綠膿桿菌內毒素 有一定的對抗作用。對傷寒桿菌內毒素有減毒作用。此外，試管試 驗表明，金銀花及其藤煎劑對鉤端螺旋體有抑制作用。 4. 抗生育 浙江産金銀花經乙醇提取後之水煎液浸膏，在臨用前用蒸餾水 配製成所需濃度，對小鼠、狗、猴等多種動物有明顯的終止妊娠作 用，尤其對小鼠、狗有顯著的抗早孕作用，並觀察了金銀花提取物 對妊娠小、大鼠不同孕期的影響，初步探討了其抗早孕作用的機.
(13) 理。 5. 止血 金銀花炭水煎液、混懸液具有顯著的止血作用，且混懸液的作 用強於水煎液。金銀花炭中鞣質的含量僅為生品的一半，但其止血 作用明顯優於生品。 6. 降血脂 金銀花能顯著降低小鼠血清膽固醇(Tc)及動脈粥樣硬化指數 (AI)， 提高高密度脂蛋白-膽固醇(HDL2c)含量，保護胰腺 β 細胞及 弱降糖作用。銀花露抑制腸道吸收膽固醇，而降低血脂，具有保護 心腦血管的作用；其有效成分能在體外與膽固醇結合，進而減少家 兔腸道膽固醇的吸收。 7. 免疫調節 金銀花具有促進白細胞的吞噬功能，促進炎性細胞吞噬功能。 8. 抗氧化 金銀花水提物在體外對於 H2O2 具有直接的消除作用，且呈線性 量效關係。而金銀花對燙傷小鼠中性粒細胞釋放過氧化氫有一定程 度的改善作用，能使燙傷小鼠中性粒細胞合成和釋放溶酶體酶的能 力相應減少，說明其具有抗氧化反應的作用。 9. 中樞興奮 綠原酸對大鼠、小鼠的中樞神經系統有興奮作用，口服可刺激 胃液分泌。 10. 抗病毒作用 金銀花腹腔注射可明顯減少綠膿桿菌內毒素所致小鼠死亡，金 銀花對上呼吸道感染致病病毒有抑制和延緩細胞病變作用。其複方 能滅活 PR8 株甲型流行性感冒病毒，防治繼發細菌感染。木樨草素 能抑制皰疹病毒。 11. 抗腫瘤 金銀花中黃酮類化合物木樨草素對 NK/LY 腹水癌細胞體外培 養有抑制生長的作用。金銀花及酒浸液對肉瘤 S180 及艾氏腹水癌有 明顯細胞毒作用。 12. 其他作用 金銀花提取液口服對大鼠實驗性胃潰瘍有輕度預防效果。此外, 綠原酸還能輕微增強腎上腺素及去甲腎上腺素對貓與鼠的升壓作 用。 13. 毒副作用 金銀花水浸液灌服對家兔、犬等無明顯毒性反應，對呼吸、血 壓、尿量均無影響，小鼠皮下注射金銀花浸膏的 LD50 為 53 g/kg。灰.
(14) 毡毛忍冬蒸曬品無溶血性，而生曬品有溶血性。實驗研究表明，綠 原酸具有致敏原作用，可引起變態反應。.
(15) 第五節 忍冬屬之化學成分考察 (一) 國外的研究現況 依據梁曉天的常用中藥基礎研究 41，將忍冬屬植物的化學成分 分為揮發油（volatile oil）、黃酮（flavonoids）、三萜及三萜皂苷類 （triterpenoids＆triterpenoidal saponin）、iridoid、苯丙素類 （penylpropanoids）、有機酸衍生物（organic acid derivatives）和其 他類（others）等七大類。 本研究將國外有關忍冬屬化學成分研究之文獻考察結果，依梁 氏之類別和藥用部位，分類如 Table 1： Table 1 忍冬屬植物之化學成分考察 學名. 部位. 化學成分. 文獻. Flavonoids Lonicera caerulea L.var. emphyllocalyx NAKAI.. fresh leaves. Lonicera confusa DC.. flower buds. Lonicera gracilipes var. glandulosa MAXIM.. fresh leaves. Lonicera implexa AITON.. leaves. quercetin (1) quercetin-3-rhamnoside (2) quercetin-3-O-β-D-glucoside (3) eriodictyol-7-glucoside (4) rutin (5) quercetin(1) luteolin-7-O-β-D-galactoside (6) lonicerin (luteolin 7-O-neohesperidoside) (7) luteolin (8) tricin-7-O-β-D-glucopyranoside (9) chrysoeirol-7-O-neohesperidoside (10) tricin-7-O-neohesperidoside (11) apigenin -7-O-( 2G-rhamnosyl )gentiobioside (12) cosmosiin (apigenin 7-O-β-D-glucopyranoside) (13) rhoifolin (14) (apigenin-7-O-neohesperidoside) apigenin-7-O-gentiobioside (15) apigenin-7-O-sophoroside (16) luteolin-7-O-glucoside (17) luteolin-7-O-neohesperidoside (7) luteolin-7-O-gentiobioside (18) implexaflavone (19)* madreselvin A (20)* madreselvin B (21)* ochnaflavone (22) rhoifolin (14) luteolin (8) luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside (23) apigenin-7-O-primeveroside (24). 42. 43 44. 45. 46.
(16) Lonicera japonica THUNB.. fresh aerial parts. flower buds. Lonicera similis HEMSL.. flower buds. apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside (13) apigenin-7-O-rutinoside (25) 3-methoxyquercetin-7-O-β-D-glucopyranoside (26) hydnocarpin (27) quercetin (1) ochnaflavone (22) ochnaflavone-4’-O-methyl ether (28) astragalin (29) isoquercetin (30) rhoiflon (14) luteolin-7-O-D-glucoside (17) luteolin-7-O-β-D-galactoside (6) quercetin-3-O-β-D-glucoside (3) hyperoside (31) luteolin (8) corymbosin (32) 5-hydroxy-7, 3’, 4’-trimethoxy flavone (33) 5-hydroxy-7, 3’-dimethoxy flavone (34) quercetin (1) lonicerin (7). luteolin (8) quercetin (1). 47. 48. 49. 50. Triterpenoids & Triterpenoidal saponins Lonicera angustifolia leaves Lonicera burnei HEMSL.. flower buds. Lonicera confusa DC.. flower buds. Lonicera fulvotomentosa HSUET S.C. CHENG Lonicera gracilipes var. glandulosa MAXIM.. flower buds fresh leaves. oleanolic acid (35) ursolic acid (36) oleanolic acid (35) bourneioside A (37) bourneioside B (38) bourneioside C (39) bourneioside D (40) bourneioside E (41) hederagenin-28-O-β-D-glucopyranosyl (6→1)O-β-D-glucopyranosyl ester (42) hederagenin-3-O-α-L-arabinopyranosyl (2→1)O-α-L-rhamnopyranoside (43) macranthoside A (44) macranthoside B (45) dipsacoside B (46) macranthoidin A (47) macranthoidin B (48) fulvotomentoside A (49)* α-hederin (50) sapindoside B (51) ferna-7, 9 (11)-diene-3α, 16α-diol (52) 3α, 16α-dihydroxyferna-7, 9 (11)-dien-12-one (53). 51 52 53 54 55 56. 57 58.
(17) Lonicera implexa AITON. Lonicera japonica THUNB.. leaves. ferna-7, 9 (11)-diene-3α, 16α, 19α-triol (54) 3α, 16α-dihydroxyfern-8-en-11-one (55) 3α, 16α-dihydroxyferna-8-ene-7,11-dione (56) hederagenin-3-O-α-L-arabinopyranoside (57). 46. saponin 1-12(58-69) 63*,66*,68*,69* loniceroside A (70)* loniceroside B (71)*. 59. fresh leaves. saponin 1-4 (72-75) 74*, 75*. 61. flower buds. 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-αL-arabinopyranosyl hederagenin 28-O-β-Dxylpyranosyl (1→6)-β-D- glucopyranosyl ester (76) 3-O-α-L-arabinopyranosyl hederagenin 28-O- αL- rhamnopyranosyl (1→2) [β-D-xylpyrano syl(1→6)]-β-D-glucopyranosyl ester (77) 3-O-α-rhamnopyranosyl (1→2)-α-L-arabino pyranosyl hederagenin 28-O-α-L- rhamno pyranosyl (1→2) [β-D- xylpyranosyl (1→6)]-βD- glucopyranosyl ester (78) 3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-α-L-arabi nopyranosyl]-28-O-[β-D-glucopyranosyl (1→ 6)-β-D-glucopyranosyl] oleanolic acid (79) dipsacoside B (46) macranthoidin A (47)* macranthoidin B (48)*. 62 63. fresh aerial parts. 60. 49. Lonicera macranthoide HAND.-MAZZ.. flowers. 64. Lonicera nigra L.. fruit (berries). monodesmosidic saponins 1-5 (80-84) bidesmosidic saponin (85-87). 65. fresh twigs leaves leaves. lonitoside (88)*. 66. xylostosidine (89) loxylostosidine A (90*) loxylostosidine B (91)*. 67 68 69. morroniside (92) kingiside (93) alpigenoside (94)* sweroside (95) 6’-O-β-apiofuranosylsweroside (96)* loganin (97) 7-ketologanin (98) epi-vogeloside (99). 70 68. Monoterpene Lonicera nitida E. H. WILSON Lonicera xylosteum L.. Iridoid Lonicera alpigena L.. fruits. Lonicera angustifolia leaves. Lonicera caerulea L.var.emphyllocalyx. fresh leaves. 52 42.
(18) NAKAI.. Lonicera coerulea L.. fresh leaves and stem bark. Lonicera gracilipes var. glandulosa MAXIM.. fresh leaves. Lonicera implexa AITON.. leaves. Lonicera japonica THUNB.. fresh aerial parts. young shoots. (6R, 9R)-3-oxo-α-ionol-β-D-glucoside (100) caeruleoside A (101)* caeruleoside B (102)* caeruleoside C (103)* sweroside (95) loganin (97) secologanin (104) secologanic acid (105) loganic acid (106) periclymenosidic acid (107)* erythritol-1-O-(6-O-trans-caffeoyl) -β-D-glucopyranoside (108) 1,2,3,4-tetrahydroxy-2-methylbutane -4-O-(6-O-trans-caffeoyl)-β-Dglucopyranoside (109) arabitiol-5-O-(6-O-trans-caffeoyl)β-D-glucopyranoside (110) sweroside (95) loganic acid (106) grandifloroside (111) vogeloside (112) epi- vogeloside (99) secologanin dimethyl acetal (113) vogeloside (112) epi- vogeloside (99) loganin (97) secologanin (104) 7-O-butylsecologanic acid (114) secologanin dibutylacetal (115) secologanic acid (105) sweroside (95) secoxyloganin (116). 71 72. 73. 74. 74. 75. 76.
(19) flower buds. Lonicera korolkovii STAPF. Lonicera morrowii A. GRAY.. loniceracetalides A (117) loniceracetalides B (118) loganin (97) secologanin (104) secologanin dimethyl acetal (113) secologanoside 7-methyl ester (119) sweroside (95) vogeloside (112) 8-epiloganin (120) kingiside (93) morroniside (92) epi-vogeloside (99) dehydromorroniside (121). 77. stems＆ leaves. L-phenylalaninosecologanin (122) 7-O-(4-β-glucopyranosyloxy-3-methoxy benzoyl) secologanic acid (123) 6’-O-(7α-hydroxyswerosyloxy)loganin (124) (E)-aldosecologanin (125) (Z)-aldosecologanin (126). 79. young plants fresh fruits. korolkoside(127)*. 80. morroniside (92) kingiside (93) loganin (97) 7-ketologanin (98) secoxyloganin (116) secologanin dimethyl acetal (113) secologanin (loniceroside) (104) sweroside (95). 81 82 68 83. stems. kinginoside﹝sweroside-6’-O-(4”-O-feruloyl)α-L-rhamnoside﹞(128). 84. stems. morroniside (92) secologanin (104) loganic acid (106) secoxyloganin (116) secologanoside (129) periclymenoside (130) loganin (97) sweroside (95). 85 68. young leaves. Lonicera periclymenum L.. 78. 83 68. 86.
(20) Lonicera quinquelocularis. roots. loganin (97) sweroside (93) 6’-O-β-apiofuranosylsweroside (96)*. 86. Lonicera tatarica L.. leaves. loganin (97) secologanin (104). 50. fresh leaves. aseculetin-6-O-β-D-apiofuranosyl-(1→6)-O-βD-glucopyranoside (131) 4,9,9’-trihydroxy-3,3’-dimethoxy-8- O-4’'neolignan-7-O-β-D-glucopyranoside (7S,8S-threo form) (132)* 4,9,9’-trihydroxy-3,3’-dimethoxy-8O-4’-neolignan-7-O-β-D-glucopyranoside (7S,8R-erythro form) (133)* 7R,8R-threo-4,7,9,9’ -tetrahydroxy-3methoxy-8-O-4’-neolignan-3’-O-β-Dglucopyranoside (134)* 7S,8R-erythro-7,9,9’-trihydroxy-3,3’- dimethoxy -8-O-4’-neolignan-4-O-β-D-glucopyranoside (135)* 4,7,9-trihydroxy-3,3’-dimethoxy-8-O-4’ -neolignan-9’'-O-β-D-glucopyranoside (7R,8R-threo form) (136) 4,7,9-trihydroxy-3,3’-dimethoxy-8-O-4’ -neolignan-9’'-O-β-D-glucopyranoside (7R,8R-erythro form) (137) (6R,7E,9R)-9-hydroxy-4,7- megastigmadien -3-one-9-O-〔α-L-arabinopyranosyl- (1→6)-βD-glucopyranoside〕(138)* (6S,7E,9R)-6,9-dihydroxy-4,7megastigmadien-3-one-9-O-〔α-L-arabino pyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside〕(139)* 4-hydroxy-2,6-di-(4'-hydroxy-3'-methoxy)phenyl-3,7-dioxabicyclo-(3,3,0)octane (140). 73 87 88. methyl-4-hydroxy benzoate(141) chlorogenic acid ethyl ester (142) bis (5-formylfurfuryl) ether (143) 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde (144). 51 52 91. fresh leaves. protocatechuic acid (145) methyl chlorogenate (146). 42. flower buds. chlorogenic acid (147) caffeic acid (148) methyl chlorogenate (146) 5-O-caffeoyl quinic acid butyl ester (149). 43 92. Penylpropanoids Lonicera gracilipes var. glandulosa MAXIM.. Lonicera hypoleuca. aerial parts. 89. 90. Organic acid derivatives Lonicera angustifolia leaves flower buds Lonicera burnei HEMSL. Lonicera caerulea L.var.emphyllocalyx NAKAI. Lonicera confusa DC..
(21) Lonicera hypoleuca. aerial parts. syringic acid (150). 90. Lonicera implexa AITON.. leaves. 74. Lonicera japonica THUNB.. flower buds. chlorogenic acid (147) macranthoin G (3,5-dicaffeoylquinic acid methyl ester) (151) chlorogenic acid (147) 3-caffeoyl-quinic acid (152) 3-caffeoyl-quinic acid methyl ester (153) 3,5-dicaffeoylquinic acid (154) 3,5-dicaffeoylquinic acid methyl ester (151) 3,5-dicaffeoylquinic acid butyl ester (155)*. Lonicera macranthoid HAND.-MAZZ.. flowers. macranthoidin F (156) macranthoidin G (157). 94. Lonicera morrowii A. GRAY.. fresh fruits. chlorogenic acid (147). 84. Lonicera similis HEMSL.. flower buds. caffeic acid (148) 3, 5-dicaffeoylquinic acid (154) chlorogenic acid (147). 95. β-sitosterol β-sitosterol. 51 52. β-sitosterol tetratriacontane β-sitosterol β- sitosterol glucoside n-nonacosanol scopeletin. 43. 93 49. Others Lonicera angustifolia leaves flower buds Lonicera burnei HEMSL. Lonicera confusa DC. Lonicera hypoleuca. flower buds. Lonicera implexa AITON. Lonicera japonica THUNB.. leaves. myoinositol. 74. fresh leaves flower buds. venoterpine daucosterol sucrose. 96 49. Lonicera quinquelocularis. aerial parts. β-sitosterol 1-inositol hexacosanol n-triacontanol nonacosane. 95. Lonicera similis HEMSL.. flower buds. β-sitosterol nonacosanol nonacosane. 95. aerial parts. 90.
(22) *. new compound.
(23) (二) 國內忍冬屬之研究現況 將國內現況分類為天然物化學研究(成分分離、結構鑑定)、品 質評估(藥材與複方)、藥理活性探討及藥品動力學探討；然而國內 對於忍冬屬之研究多以 Lonicera japonica THUNBERG 為主，本文針對 忍冬屬天然物化學成分相關研究作整理，如 Table 2 所列： Table 2 國內研究之忍冬屬植物化學成分 學名. 部位. Lonicera acuminata WALLICH (銳葉忍冬). stems. Lonicera japonica THUNB. (忍冬). flowers. 化學成分 Long chain fatty acid and ester: octacosanyl hexadecanoate Steroid: phytosterol (campesterol, stigmasterol, βsitosterol) stigmast-5-ene-3β,7α-diol stigmast-5-ene-3β,7β-diol sitosterol-3β-Dglucoside sitosterol-3-β-D-glucoside-6'-acetate sitosterol-3-β-D-glucoside Flavonoid: isorhamnetin ochnaflavone quercetin Organic acid derivative: protocatechuic acid methyl caffeate chlorogenic acid methyl chlorogenate 3, 5-di-O-caffeoylquinic acid methyl 3, 5-di-O-caffeoulquinate 3, 4-di-O-caffeoylquinic acid methyl 3, 4-di-O-caffeoylquinate Flavonoid: luteolin rutin Organic acid derivative: chlorogenic acid 3, 5-di-O-caffeoylquinic acid Flavonoid: luteolin Organic acid derivative: chlorogenic acid 4,5-di-O-caffeoyl quinic acid Cycloalkene: sweroside Flavonoid: luteolin. 來 源 97. 98. 99. 14.
(24) Lonicera japonica THUNBERG var. Sempervillosa HAYATA (毛忍冬). flowers. luteolin-7-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-β-Dglucopyranoside luteolin-4’-methyl ether-7-O-α-Lrhamnopyranosyl (1→2)-β-D-glucopyranoside apigenin-7-O-a-L-rhamnopyranosyl (1→2)-β-Dglucopyranoside Long chain fatty acid and ester: nonacosane hentriacontane octacosanyl hexadecanoate tetracosanoic acid docosanoic acid Steroid: phytosterol (campesterol, stigmasterol, βsitosterol). 100.
(25) 第二章 實 驗 部 分 第一節 實驗材料 本研究的植物由邱年永老師協助於民國 92 年 3 月委託埔里魚池 民眾在當地採集所得，經由中國醫藥大學邱年永老師鑑定，確認為 忍冬科 (Caprifoliaceae)植物忍冬屬 (Lonicera)之紅腺忍冬 (Lonicera hypoglauca MIQUEL)。. Figure 4 紅腺忍冬 (Lonicera hypoglauca MIQUEL) 植物外形圖 8. 第二節 試藥與層析材料 1. 試藥.
(26) （1）試劑： 測紅外線光譜（IR）所用的 KBr 購自默克公司；試藥級 H2S04 購自島久藥品株式會社 (H2S04 配成 10%硫酸溶液作為 TLC 呈色劑)。 （2）溶媒： 工業級溶媒，如正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇等， 經過蒸餾後，用於浸泡藥材、薄層層析之展開溶媒及矽膠 管柱層析之沖提溶媒，購自六和公司；試藥級溶媒，如正 己烷、二氯甲烷、甲醇等，用於化合物的再結晶、矽膠管 柱層析之沖提溶媒及薄層層析之展開溶媒，購自景明公 司；光譜級溶媒，如氯仿、甲醇，用於測紫外光譜及 chloroform-d1 、 pyridine-d5 、 dimethyl sulfoxide (DMSO)d6，用於測NMR光譜，均購自默克公司。 2. 層析材料 （1）薄層層析(Thin Layer Chromatography；TLC) TLC---Kiselgel 60 F254 + 366，Art. No. 5554 (E. Merck)。 （2）管柱層析(Column Chromatography；CC) Kieselgel 60 70-230 mesh ，Art. No. 7734 及 230-400 mesh Art. No. 9385 ( E. Merck)。. 第三節 實驗儀器 1. 核磁共振儀 (Nuclear magnetic resonance spectrometer；NMR).
(27) Bruker DPX-200 FT-NMR (中國醫藥大學)。 δ表示化學位移(chemical shift)，單位為 ppm，J 表示偶合常數， 單位為 Hz，s 表示單峰(singlet)，d 表示雙重峰(doublet)，t 表示三 重峰(triplet)，m 表示多重峰(multiplet)，br 表示寬峰(broad)。 2. 紅外線光譜儀(Infrared spectrometer；IR) Avatar 330FT-IR Thermo Nicolet (中國醫藥大學)。 以 KBr 粉末作為打錠稀釋劑；單位為波數(cm-1) 3. 紫外光譜儀(Ultraviolet spectrophotometer；UV) CARY 300 Conc UV-visible spectrophotometer (中國醫藥大學)。 4. 質譜儀(Mass spectrometer；MS) （1）氣相層析儀 (Gas chromatography；GC) Hitachi GC 3000，FID，毛細管柱 DB wax 30 m × 0.53 mm， 管柱溫度為 50℃-220℃，每分鐘升溫 5℃，載氣為 N2，流速 4 kgf/cm2，並用 Hitachi D-2100 積分儀記錄 GC 圖及積分各 峰面積。 （2）質譜儀（MS） VG PLAFORMⅡMass spectrometer，離子化電壓為 70 eV （中國醫藥大學）。 Finnign/Thermo Quest MAT 95XL，離子化電壓為 70 eV(中 興大學)。 （3）氣相層析/質譜儀 (GC/MS ).
(28) JEOL JMS-SX/SX 102A Tandem mass spectrometer(中興大 學)。 5. 微量熔點測定計(Melting point apparatus) Yanaco micro melting point apparatus MP-500D，溫度未校正。 6. 其它 （1）烘箱：Eyela WFO-450ND。 （2）蒸餾水製造機：Milli-Q (Millipore 公司)。 （3）減壓濃縮機：Rotary Vacuum Evaporator SN Series（Rika）。 減壓濃縮機：Rotary Vacuum Evaporator（EYELA）。 （4）電子天平：Mettler AJ100 及 Mettler Toledo PB 602。 （5）玻璃展開槽：70 mm × 120 mm 及 120 mm × 150 mm。 （6）電熱板：Frano-Geratetechnik M 21/1。 （7）紫外燈：Multiband UV-254/365 nm。 （8）粉碎機：1-Phase Induction Motor。. 第四節 植物成分抽取與分離 一、紅腺忍冬之抽取 將紅腺忍冬挑去雜質，取其葉部陰乾粉碎，共得到 2 公斤的粗 粉，分別以正己烷、乙酸乙酯及甲醇在室溫下萃取，過濾，濾液經 減壓濃縮後，各得到正己烷粗抽物 56.6 公克、乙酸乙酯粗抽物 230 公克及甲醇粗抽物 138 公克。. 二、正己烷粗抽物的分離 將紅腺忍冬葉部的正己烷粗抽物 56.6 公克，分別進行 GC, GC/MS 分析及矽膠管柱層析法；將正己烷粗抽物與矽膠(70-230 mseh).
(29) 45 公克均勻混合以乾式法充填，利用矽膠(70-230 mseh)當作固定相， 以正己烷、乙酸乙酯、甲醇梯度沖提來進行矽膠管柱層析法，正己烷 沖提者，每 500 mL 收一瓶，合併為 Fr. І (14.2 g)；正己烷/乙酸乙酯 梯度沖提者，每 500 mL 收一瓶，合併為 Fr. ІІ (10.2 g)；乙酸乙酯/甲 醇梯度沖提者，每 500 mL 收一瓶，合併為 Fr. ІІІ (2.4 g)。Fr. ІІІ 因量 少無法進一步分離，故以 Fr. І 及 Fr. ІІ 為主要分離對象。 Fr. І 依據 TLC 展開結果合併，於 Fr. 2 得白色沉澱物質，分別 進行 GC, GC/MS 分析及利用氯仿/甲醇再結晶純化，得化合物 І (989.1 mg)；Fr. 11-42 依據 TLC 展開結果得知有數個相同的斑點， 將之合併，減壓濃縮，再一步以正己烷/二氯甲烷沖洗，得白色沉澱 物質，分別進行 GC, GC/MS 分析及利用氯仿/甲醇再結晶純化，得 化合物 ІІ (1.4 g)。於 Fr. 55-60 得白色沉澱物質，進行 GC, GC/MS 分 析。Fr. 75 得白色沉澱物質，經氯仿/甲醇再結晶純化，得化合物 ІІI (38.2 mg)。 Fr. ІІ 依據 TLC 展開結果合併，於 Fr. 78 得白色沉澱物質，分別 進行 GC, GC/MS 分析及利用氯仿/甲醇再結晶純化，得化合物 IV (687.5 mg)；Fr. 83-95 依據 TLC 展開結果得知有數個相同的斑點， 將之合併，減壓濃縮，再一步以正己烷/乙酸乙酯梯度沖提，得白色 沉澱物質，經氯仿/甲醇再結晶純化，得化合物Ⅴ (487.4 mg)。於 Fr.96-104 得白色沉澱物質，進行 GC, GC/MS 分析。其分離流程圖如 Figure 5。. 三、乙酸乙酯粗抽物的分離 將紅腺忍冬葉部的乙酸乙酯粗抽物 230 公克，與矽膠(70-230 mseh) 140 公克均勻混合以亁式法充填，利用矽膠(70-230 mseh)當作 固定相，以正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水梯度沖提來進行矽膠管柱層 析法，每 500 mL 收一瓶，從正己烷：乙酸乙酯＝90：10 至正己烷： 乙酸乙酯＝60：40 沖提者，依據 TLC 展開結果得知有數個相同的斑 點，將之合併，減壓濃縮，得 Fr. I (65.5 g)；正己烷：乙酸乙酯=50： 50 至全部的乙酸乙酯，依據 TLC 展開結果得知有數個相同的斑點， 將之合併，減壓濃縮，得 Fr. II (83.6 g)；乙酸乙酯/甲醇沖提者，每 500 mL 收一瓶，合併為 Fr. ІІІ (84.8 g)；甲醇/水梯度沖提者，每 500 mL 收一瓶，合併為 Fr. IV (9.4 g)。Fr. ІV 因量少無法進一步分離，故 以 Fr. І、Fr. ІІ 及 Fr. III 為主要分離對象。 Fr. І 以二氯甲烷/甲醇梯度沖提，每 250 mL 收一瓶；之後依據 TLC 結果得知仍有數個相同的斑點，再一次合併，減壓濃縮，得 Fr. 46-54 (10 g)及 Fr.55-76 (19.8 g)。Fr. 46-54 濾液在減壓濃縮後產生黃 綠色固體顆粒，利用洗結晶方式，得化合物 VI (788.5 g)；Fr. 46-54 使用氯仿：甲醇=1：1 沖提進行矽膠管柱層析法，得綠白色沉澱物.
(30) 質，接著以氯仿：甲醇=1：1 反覆洗綠白色沉澱物質，得化合物 VII (1.1 g)。Fr. 55-76 依據 TLC 展開結果得知有數個相同的斑點，利用 氯仿：乙酸乙酯=4：1 沖提，來進行矽膠管柱層析法，得綠白色沉 澱物質，接著以氯仿：甲醇=1：1 反覆洗綠白色沉澱物質，得化合 物 VII (1.1 g)。 Fr. ІI 以氯仿：乙酸乙酯=10：1 及 1：1 固定比例沖提，分別得 到綠白色及黃綠色二個沉澱物質，這二個沉澱物質，皆利用氯仿： 甲醇=1：1 反覆洗結晶，得化合物 VII (1.8 g)和 VI (3.5 g)。 Fr. III 以氯仿：甲醇=50：1 沖提，得到綠白色沉澱物質，接著 以氯仿：甲醇=1：1 反覆洗綠白色沉澱物質，得化合物 VII (779.5 mg)。其分離流程圖如 Figure 6。.
(31) LH (leaves 2kg) n-Hex. hexane extract (56.6 g). residue EtOAc. EtOAc extract (230 g). SiO2 H/E/M. GC, GC/MS H (Fr.I) 14.2 g. Fr. 55-60. Fr. 11-42. Fr. 2. GC, GC/MS. GC, GC/MS. 白色 ppt. compound І (1.0 g). Fr. 83-95 Fr. 96-104. Fr. 78. Fr. 75. SiO2 H/CH2Cl2. 白色 ppt. 再結晶 C/M. H/E (Fr.II) 10.2 g. GC, GC/MS 白色 ppt. GC, GC/MS. 白色 ppt. 再結晶 C/M. GC, GC/MS 再結晶 C/M. SiO2 H/E 白色 ppt. compound IV (687.5 mg). H: hexane E: ethyl acetate M: methanol C: chloroform. 再結晶 C/M. Figure 5 紅腺忍冬葉部正己烷粗抽物之分離流程 LH EtOAc extract 再結晶 C/M compound ІІ (230 g) (1.4 g) compound V (487.4 mg) SiO2 H/E/M compound ІІI (38.2 mg) Fr. I (65.5 g). Fr. II (83.6 g). Fr. III (84.8 g). SiO2 C/E. SiO2 CH2Cl2/M 10/1. 綠白色 ppt. 1/1. 黃綠色 ppt. SiO2 C/M 50/1. 白綠色 ppt.
(32) H: hexane E: ethyl acetate M: methanol C: chloroform. Figure 6 紅腺忍冬葉部乙酸乙酯粗抽物的分離流程. 第五節 各化合物之物理性質 【一】 Compound I (tritriacotane) 1. 淡黃色結晶 2. m.p.：53-55 ℃ 3. TLC Rf =0.8 (hexane) 4. EI-MS m/z (%) (rel. int.)：464 [M]+ (0.4), 436 (3.3), 408 (3.0), 365 (2.4), 323 (2.3), 280 (1.3), 239 (2.2), 221 (3.0), 197 (3.4), 183 (7.8), 154 (14.1), 113 (21.8), 99 (32.6), 85 (95.3), 71 (100), 55 (74.1) (圖 7) 5. IRν max cm-1：2842, 1464, 1378, 718 (圖 8) KBr. 6. 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ0.86 (t, J=6.2), 1.23 (圖 9).
(33) 7. 13C-NMR (CDCl3, 50 MHz)：δ14.1, δ22.7, 29.4, 29.7, 31.9 (圖 10).
(34) 【二】Compound II (tetratriacontanoic acid) 1.白色結晶 2. m.p.：73-74℃ 3. TLC Rf =0.18 (hexane:CH2Cl2= 4:1) 4. EI-MS m/z (%) (rel. int.)：508[M]+ (0.5), 480 (0.3), 452 (0.5), 295 (2.1), 280 (0.6), 278 (2.7), 185 (1.1), 171 (3.3), 155 (5.8), 151 (1.7), 125 (4.2), 123 (16.5), 111 (9.7), 95 (18.1), 85 (7.8), 83 (11.3), 71 (18.4), 69 (17.4), 57 (77.2), 55 (51.7), 43 (100) (圖 11) 5. IRν. KBr max. cm-1：3394, 2844, 1705, 1466, 1419, 1374, 724 (圖 12). 6. 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ0.87 (t, J=6.1 Hz), 1.23, 2.36 (t, J=7.3 Hz) (圖 13) 7. 13C-NMR (CDCl3, 50 MHz)：δ14.1, 22.7, 23.9, 25.0, 29.3, 29.4, 29.7, 31.9, 42.8 (圖 14).
(35) 【三】Compound III (4-decanol) 1. 白色結晶 2. m.p.：79.2-80℃ 3. TLC Rf =0.24 (hexane:EtOAc= 100:1) 4. EI-MS m/z (%) (rel. int.)：158 [M]+ (0.6), 111 (4.7), 97 (48.0), 95 (7.7), 85 (14.6), 83 (84.2), 69 (46.9), 57 (69.6), 43 (100) (圖 15) 5. IRν. KBr max. cm-1：3327, 2916, 2848, 1472 (圖 16). 6. 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ0.82 (t, J=6.2 Hz), 1.23, 1.33, 1.36, 1.40, 3.56 (圖 17) 7. 13C-NMR (CDCl3, 50 MHz)：δ13.9, 22.5, 25.4, 29.1, 29.5, 31.7, 37.2, 71.8 (圖 18) 8. DEPT (圖 19).
(36) 【四】Compound IV (4-nonacosanol) 1. 白色結晶 2. m.p.：73-75℃ 3. TLC Rf =0.24 (hexane:EtOAc= 80:1) 4. EI-MS m/z (%) (rel. int.)：406[M-H2O]+ (2.8), 297 (12.4), 157 (30.1), 143 (5.6), 139 (4.9), 125 (14.5), 112 (2.7), 111 (23.6), 97 (46.3), 83 (67.6), 71 (38.0), 69 (63.0), 58 (47.2), 57 (53.2), 43 (100) (圖 20) 5. IRν max cm-1：3331, 2916, 2842, 1472 (圖 21) KBr. 6. 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ0.86 (t, J=6.1 Hz), 1.23, 1.33, 1.36, 1.40, 3.55 (圖 22) 7. 13C-NMR (CDCl3, 50 MHz)：δ14.1, 22.7, 25.7, 29.4, 29.7, 31.9, 37.5, 72.0 (圖 23) 8. DEPT (圖 24).
(37) 【五】Compound V (3-acetyl oleanolic acid) 1. 白色結晶 2. m.p.：268-269℃ 3. TLC Rf =0.29 (hexane:acetone= 8:1) 4. EI-MS m/z (%) (rel. int.): 498 [M]+ (1.0), 452 (2.0), 437 (5.1), 300 (2.1), 255 (1.7), 248 (96.1), 233 (10.1), 203 (90.6), 189 (28.2), 175 (16.6), 147 (14.6), 133 (31.8), 119 (27.5), 105 (26.6), 81 (25.0), 69 (39.0), 55 (31.2), 43 (100) (圖 25) 5.. IRν. KBr max. cm-1 ：3221, 2941, 1727, 1680, 1466, 1370, 1252, 1179,. 1159, 1127, 1027, 1009, 983, 818, 740 (圖 26) 6. 1H-NMR (CDCl3, 200 MHz) (圖 27) 7. 13C-NMR (CDCl3, 50 MHz) (圖 28) 8. DEPT (圖 29) 9. HMQC (圖 30) 10. HMQC (圖 31) δ1H: 0-2.2 ppm, δ13C: 7-65 ppm.
(38) Table 3 Compound V 之 NMR Data δ13C δ13C δ1H ＊ (ppm) (ppm) (ppm) 1 CH2 33.8 33.8 2 CH2 23.4 27.2 3 CH 80.9 79.0 4.47 (1H, t, J=8.0 Hz) 4 C 37.0 37.1 5 CH 55.2 55.2 6 CH2 18.1 22.9 7 CH2 32.4 32.4 8 C 39.2 41.0 9 CH 40.8 45.8 10 C 30.6 32.6 11 CH2 22.8 25.9 12 CH 122.5 122.6 5.24 (1H, br.s) 13 C 143.6 143.6 14 C 41.5 41.6 15 CH2 27.6 27.7 16 CH2 22.7 23.6 17 C 46.5 46.5 18 CH 47.5 47.6 2.80 (m) 19 CH2 45.8 39.2 20 C 38.0 38.7 21 CH2 32.4 30.7 22 CH2 37.7 33.1 23 CH3 28.0 28.1 0.83 16.6 15.5 0.82 24 CH3 25 CH3 15.4 15.3 0.91 26 CH3 21.3 18.3 2.02 (3H) 27 CH3 25.9 23.4 1.09 (3H, s) 28 C 184.4 183.5 29 CH3 17.1 17.1 0.71 30 CH3 23.6 23.4 0.89 CH3CO 171.1 0.87 CH3CO 33.0 ＊ ＊＊ : literature data101 : literature data102. δ1H ＊＊ (ppm). 4.47 (1H, t, J=8.1 Hz). 5.26 (1H, br.s). 2.80 (m). 0.84 0.83 0.91 2.02 (3H) 1.11 (3H, s) 0.73 0.90 0.88.
(39) 【六】Compound VI (rhusflavone) 1. 黃色粉末 2. m.p.：238-240℃ 3. TLC Rf =0.41 (CHCl3:EtOAc= 1:1) 4. EI-MS m/z (%) (rel. int.): 540 [M]+ (0.5), 394 (7.9), 364 (100), 336 (2.8), 270 (4.0), 245 (36.7), 244 (93.4), 216 (12.8), 182 (2.3), 160 (4.6), 147 (11.8), 120 (17.3), 111 (5.5), 91 (16.0), 69 (13.3), 55 (6.2) (圖 32) 5.. IRν. KBr max. cm-1 ：3483, 3178, 1650, 1621, 1578, 1511, 1430, 1359,. 1268, 1225, 1155 (圖 33) 6. UV λmax (MeOH) nm (logε)：224 (3.70), 247 (2.76), 280 (2.50) (圖 34) 7. 1H-NMR（DMSO, 200 MHz）(圖 35) 8. 13C-NMR（DMSO, 50 MHz）(圖 36) 9. DEPT (圖 37) 10. H,H-COSY (圖 38) 11. H,H-COSY (圖 39) δ1H: 2-8 ppm 12. HMQC (圖 40) 13. HMQC (圖 41) δ1H: 5-7.5 ppm, δ13C: 71-138 ppm 14. HMBC (圖 42) 15. HMBC (圖 43) δ1H: 4.6-8 ppm, δ13C: 85-188 ppm.
(40) Table 4 Compound VI 之 NMR Data C-2. CH. δ13C (ppm) 78.9. C-3. CH2. 42.2. 42.2. C-4 A-5 A-6 A-7 A-8 A-9 A-10 B-1’ B-2’ B-3’ B-4’ B-5’ B-6’ F-2 F-3 F-4 D-5 D-6 D-7 D-8 D-9 D-10 E-1’ E-2’ E-3’ E-4’ E-5’ E-6’. C C C C CH C C C CH CH C CH CH C CH C C CH C C C C C CH CH C CH CH. 198.9 160.7 100.3 ? 165.1 94.0 161.3 102.0 128.3 128.6 115.0 154.9 115.0 128.6 164.0 100.3 182.3 156.9 99.4 161.3 99.4 ? 155.4 106.4 120.4 131.5 115.3 158.0 115.3 131.5. 196.5 161.8 100.3 165.2 94.8 162.4 101.9 129.1 128.2 115.5 157.9 115.5 128.2 163.8 102.8 182.3 160.7 98.8 162.8 99.5 157.9 103.9 121.7 128.4 116.2 161.2 116.2 128.4. *. δ13C * (ppm) 78.8. δ1H (ppm) 5.62 (dd, J=13.1 , 2.3 Hz) 2.84 (dd, J=17.2, 2.6 Hz) 12.65. δ1H ** (ppm) 5.68 (dd, J=12, 3 Hz) 2.8-3.3 (m) 12.68. 6.17 (d, J=1.8 Hz). 6.28. 7.35 (d, J=8.5 Hz) 6.73 (d, J=8.5 Hz). 7.54 6.98. 6.73 (d, J=8.5 Hz) 7.35 (d, J=8.5 Hz). 6.98 7.54. 6.70. 6.90. 12.46 6.26 (d, J=1.9 Hz). 13.27 6.50. 7.09 (d, J=8.4 Hz) 6.80 (d, J=8.4 Hz). 7.73 7.02. 6.80 (d, J=8.4 Hz) 7.09 (d, J=8.4 Hz). 7.02 7.73. : literature data103,104 **: literature data105 ?:在碳譜當中無此訊號，是利用參考資料加以輔助.
(41) 【七】Compound VII (ursolic acid) 1. 白色結晶 2. m.p.：263-265℃ 3. TLC Rf =0.26 (CHCl3:EtOAc= 10:1) 4. EI-MS m/z (%) (rel. int.): 456 [M]+ (4.4), 300 (3.6), 249 (16.2), 248 (100), 203 (47.8), 189 (16.7), 147 (11.7), 133 (44.5), 121 (11.3), 119 (21.0), 107 (17.9), 105 (19.3), 81 (26.2), 79 (18.8), 69 (32.4), 57 (24.8), 55 (38.8), 43 (46.0), 41 (37.3) (圖 44) 5.. IRν. KBr max. cm-1 ：3483, 3178, 1650, 1621, 1578, 1511, 1430, 1359,. 1268, 1225, 1155 (圖 45) 7. 1H-NMR（pyridine-d5, 200 MHz）(圖 46) 8. 13C-NMR（pyridine-d5, 50 MHz） (圖 47) 9. DEPT (圖 48) 10. HMQC (圖 49) 11. HMQC (圖 50) δ1H: 0-2.2 ppm, δ13C: 7-65 ppm.
(42) Table 5 Compound VII 之 NMR Data δ13C (ppm). δ13C ＊ (ppm). 1 2 3. CH2 CH2 CH. 37.4 28.1 78.1. 39.1 28.1 78.1. 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18. C CH CH2 CH2 C CH C CH2 CH C C CH2 CH2 C CH. 39.3 55.8 18.7 33.5 39.3 48.0 39.0 24.9 125.6 139.2 39.9 28.6 23.6 42.5 53.5. 39.4 55.8 18.8 33.6 39.9 48.1 37.3 23.9 125.7 139.3 42.5 28.7 23.9 48.1 53.6. 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29. CH CH CH2 CH2 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 C CH3. 48.0 39.4 31.0 37.2 28.8 16.6 15.6 17.5 23.9 179.9 17.4. 39.5 39.4 31.1 37.5 28.8 16.6 15.7 17.5 23.6 179.9 17.0. 30. CH3. 21.4. 21.4. : literature data106. ＊. δ1H (ppm). δ1H (ppm)＊. 3.46 (1H, dd, J=7.8, 8.0 Hz). 3.45 (1H, dd, J=6.0, 10.3 Hz). 5.50 (1H, t). 5.49 (1H, t). 2.63 (1H, d, J=11.2 Hz). 2.63 (1H, d, J=11.5 Hz). 1.24 (3H, s) 0.98 (3H, s) 0.88 (3H, s) 1.05 (3H, s) 1.22 (3H, s). 1.24 (3H, s) 1.02 (3H, s) 0.87 (3H, s) 1.06 (3H, s) 1.23 (3H, s). 1.02 (3H, d, J=7.5 Hz) 0.96 (3H, d, J=4.7 Hz). 1.01 (3H, d, J=6.5 Hz) 0.95 (3H, d, J=6.5 Hz).
(43) 第三章 第一節. 結果與討論. 各化合物之結構鑑定. 【一】Compound I (tritriacotane) Compound I 為淡黃色結晶，可溶於 CHCl3，熔點 53-55 ℃。 其 TLC 片經移動相 hexane 展開後，噴灑 10％ H2SO4 溶液，加熱， 在 Rf =0.8 位置經加熱後呈現一粉紅色點。 由 EI-MS m/z (%) (圖 7)顯示分子離子峰為 464 (0.4)；裂片依序分 子量少 14 遞減，為烴烷類化合物之特徵；推測分子式為 C33H68。 從 IR 光譜(圖 8)看到此化合物的特徵吸收：2842 cm-1 為甲基之 C-H 伸展振動的吸收；1464、1378 cm-1 為 C-H 彎曲振動的吸收；718 cm1 為 CH2 擺動吸收之訊號。 1 H-NMR 光譜(圖 69)顯示：在 δ0.86 位置的吸收峰，為 triplet， 是 末端 CH3 訊號；δ1.23 為長鏈 CH2 訊號。 13 C-NMR 光譜(圖 10)顯示：δ14.1 為末端 CH3 訊號；δ22.7、 29.4、29.7、31.9 為長鏈 CH2 訊號。 綜合上述光譜數據並與文獻值 95,107-109 比對，推定此化合物為 tritriacotane，其結構如下所示： CH3-(CH2)31-CH3.
(44) 【二】Compound II (tetratriacontanoic acid) Compound II 為白色結晶，可溶於 CHCl3，熔點 73-74 ℃。 其 TLC 片經移動相 hexane:CH2Cl2 為 4:1 展開後，噴灑 10％ H2SO4 溶液，加熱，在 Rf =0.18 位置經加熱後呈現一粉紅色點。 由 EI-MS m/z (%) (圖 11)顯示分子離子峰：508 (0.5)，裂片依序 分子量少 14 遞減，為烴烷類化合物之特徵；推測分子式為 C34H68O2。 從 IR 光譜(圖 12)看到此化合物的特徵吸收：3394 cm-1 為 OH 伸展振動的吸收；2844 cm-1 為甲基之 C-H 伸展振動的吸收；1705 cm-1 為 C=O 伸展振動的吸收；1466、1419、1374 cm-1 為 C-H 彎曲振 動的吸收；724 cm-1 為 CH2 擺動吸收之訊號。 1 H-NMR 光譜(圖 13)顯示：在 δ0.87 位置的吸收峰，為 triplet， 是末端 CH3 訊號；δ1.23 為長鏈 CH2 訊號；δ2.36 為接在 OH 旁之 CH2 的質子訊號。 13 C-NMR 光譜(圖 14)顯示：δ14.1 為末端 CH3 碳的訊號； δ22.7、23.9、25.0、29.3、29.4、29.7、31.9、42.8 為長鏈 CH2 碳的 訊號。長鏈脂肪酸之化合物應在 δ170 左右會有一微小 COOH 之碳 的訊號，但因此化合物 CH2 訊號很強，而導致 COOH 之訊號變的更 加微弱，而無法被偵測；然而可以從 IR 光譜中有 1705 cm-1 為 C=O 伸展振動的吸收及 MS 圖裂片得到佐證。 綜合上述光譜數據並參考文獻值 110-112，推定此化合物為 tetratriacontanoic acid，其結構如下所示： CH3-(CH2)32-COOH.
(45) 【二】Compound III (4-decanol) Compound III 為白色結晶，可溶於 CHCl3，熔點 79.2-80℃。其 TLC 片經移動相 hexane:EtOAc 為 100:1 展開後，噴灑 10％ H2SO4 溶 液，加熱，在 Rf =0.24 位置經加熱後呈現一粉紅色點，推測可能為 脂肪族化合物。 由 EI-MS m/z (%) (圖 15)顯示分子離子峰：158，且裂片依序分子 量少 14 遞減，為烴烷類化合物之特徵；推測分子式為 C10H22O。 從 IR 光譜(圖 16)看到此化合物的特徵吸收：3327 cm-1 為 OH 伸 展振動的吸收；2916、2848cm-1 為甲基之 C-H 伸展振動的吸收； 1472cm-1 為 C-H 彎曲振動的吸收。 1 H-NMR 光譜(圖 17)顯示：在 δ0.82 位置的吸收峰，為 triplet， 是末端 CH3 訊號；δ1.23、1.33、1.36、1.40 為長鏈 CH2 訊號；δ3.56 為 CH 接上 OH 之訊號。 從 13C-NMR 光譜(圖 18)及 DEPT 光譜(圖 19)得知：有 CH3 及 CH 訊號，其餘皆為 CH2 的訊號。 13 C-NMR 光譜(圖 18)顯示：δ13.9 為末端 CH3 訊號；δ22.5、 25.4、29.1、29.5、31.7、37.2 為長鏈 CH2 訊號；δ71.8 為 CH 接上 OH 之訊號。 綜合上述光譜數據並參考文獻值 112-115，推定此化合物為 4decanol，其結構如下所示： OH CH3(CH2)4CH2CHCH2CH2CH3.
(46) 【四】Compound IV (4-nonacosanol) Compound IV 為白色結晶，可溶於 CHCl3，熔點 73-75 ℃。 其 TLC 片經移動相 hexane:EtOAc 為 80:1 展開後，噴灑 10％ H2SO4 溶液，加熱，在 Rf =0.24 位置經加熱後呈現一粉紅色點。 由 EI-MS m/z (%) (圖 20)顯示分子離子峰脫水形成裂片：406， 裂片依序分子量少 14 遞減，為烴烷醇類化合物之特徵。醇類化合物 中一級與二級的分子離子峰很小，而三級醇幾乎看不到。在此類化 ... 合物，氧原子旁 C-C 鍵經常發生斷裂；因此一級醇有-CH2= O H (m/e +. 31)的基峰。二級醇及三級醇也會發生類似的斷裂情形： (m/e .. C OH + H. 二級醇斷裂情形. R. 45, 59, 73)基峰. 三級醇斷裂情形 R (m/e .. 59, 73, 87)基峰 C OH + R' 一級醇最特殊的情況：有時主要基峰離子峰是 M-18，即分子離 子峰為失去水的裂片。 下列為電子撞擊法得到的脫去反應式 116： .+ OH. H RHC (CH2)n. CH2. H . RHC. + OH CH2. (CH2)n. -H2O. + CH2. RHC. (CH2)n. RHC. CH2. (CH2)n. +..
(47) 從 IR 光譜(圖 21)看到此化合物的特徵吸收：3331 為 OH 伸展振 動的吸收；2916、2842 cm-1 為甲基之 C-H 伸展振動的吸收；1472 cm-1 為 C-O 彎曲振動的吸收。 1 H-NMR 光譜(圖 22)顯示：在 δ0.86 位置的吸收峰，為 triplet， 是末端 CH3 訊號；δ1.23、1.33、1.36、1.40 為長鏈 CH2 訊號；δ3.55 為 CH 接上 OH 之訊號。 從 13C-NMR 光譜(圖 23)及 DEPT 光譜(圖 24)得知：有 CH3 及 CH 訊號，其餘皆為 CH2 的訊號。13C-NMR 光譜(圖 23)顯示：δ14.1 為末端 CH3 訊號；δ22.7、25.9、29.4、29.7、31.9、37.5 為長鏈 CH2 訊號；δ72.0 為 CH 接上 OH 之訊號。 綜合上述光譜數據並參考文獻值 95,112-115，推定此化合物為 4nonacosanol，其結構如下所示： OH CH3(CH2)23CH2CHCH2CH2CH3.
(48) 【五】Compound V (3-acetyl oleanolic acid) Compound V 為白色結晶，可溶於 CHCl3，熔點 268-269 ℃。其 TLC 片經移動相 hexane:acetone= 8:1 展開後，噴灑 10％ H2SO4 溶 液，加熱，在 Rf =0.29 位置經加熱後呈現一鮮豔紫紅點，加熱後過 一段時間，紫紅色的點會轉變成灰藍色。 由 EI-MS m/z (%) (圖 25)顯示分子離子峰為 498 (1.03)，基峰為 248，推測可能為三萜類化合物的骨架，其分子式可能為 C32H50O4。 從 IR 光譜(圖 26)看到此化合物的特徵吸收：3221 cm-1 為 OH group 伸展振動的吸收；2941 cm-1 為 C-H 伸展振動的吸收；1727、 1680 -1 cm 為 C=O 伸展振動的吸收；1466、1370 cm-1 為 OH 彎曲振動的吸 收；1252 cm-1 為 C-O 伸展振動的吸收；740 cm-1 為 CH2 擺動吸收之 訊號。 1 H-NMR 光譜(圖 27)顯示：δ4.47 (1H, t, J=7.8 Hz) 位置的吸收 峰，為 H-3 訊號；δ5.24 (brs)位置的吸收峰，為 H-12 訊號；在 δ2.80 (m)位置的吸收峰，為 H-18 訊號；δ0.83、0.82、0.91、2.02 (3H)、 1.09 (3H, s)、0.71、0.89 位置的吸收峰，分別為 H-23、H-24、H25、H-26、H-27、H-29、H-30 訊號；δ0.87 位置的吸收峰，為 CH3CO 訊號。 從 13C-NMR 光譜(圖 28)及 DEPT 光譜(圖 29)得知：有 8 個 CH3 訊號，10 個 CH2 訊號，5 個 CH 訊號，9 個四級碳的訊號，共有 32 個碳之訊號。 13 C-NMR 光譜(圖 28)顯示：δ15.4、16.6、17.1、21.3、23.6、 25.9、28.0、33.0 為 CH3 訊號，其中 δ33.0 為 CH3CO 訊號；δ18.1、 22.8、23.4、27.6、32.4、32.4、33.8、37.7、45.8 為 CH2 訊號； δ40.8、47.5、55.2、80.9、122.5 為 CH 訊號。δ30.6、37.0、38.0、 39.2、41.5、46.5、143.6、171.1、184.4 為四級碳訊號，其中 δ171.1 為 CH3CO 訊號。 HMQC (圖 30、31)顯示：δ4.47 (H-3)與 δ80.9 (CH)相對應； δ5.24 (H-12)與 δ122.5 (CH)相對應；δ2.80 (H-18)與 δ47.5 (CH)相對 應； δ 0.83 (H-23)、0.82 (H-24)、0.91 (H-25)、2.02 (H-26)、1.09 (H-27)、 0.71 (H-29)、0.89 (H-30)各自與 δ28.0 (CH3)、δ16.6 (CH3)、δ15.4 (CH3)、δ21.3 (CH3)、δ25.9 (CH3)、δ17.1 (CH3)、δ23.6 (CH3)對應； δ0.87 (CH3CO)與 δ33.0、171.1 對應。 另由質譜之裂片，基峰 248 之斷裂形成，推定如下：.
(49) + .. -COOH. OH. +. COOH O. m/z 203. m/z 248. AcO. m/z 498. +. +. m/z 133. m/z 189. Scheme 51 3-acetyloleanolic acid 之質譜斷裂方式 117 綜合上述光譜數據並與文獻值 102-103 比對，推定此化合物為 3acetyl oleanolic acid。根據文獻報導，此化合物對於 Periodontopathic bacteriumrum 及 Porphyromonas gingivalis 有抑制作用 118。其 結構如下所示： 30. 29. 11 2 3 AcO. 1. 25 10. 4. 5 23. 13 14. 8 27. 20. 17 16 15. 7 6. 24. 12 26. 9. 19 18. 21 22 28 OH O.
(50) 【六】Compound VI (rhusflavone) Compound VI 為黃色粉末，微溶於 MeOH，熔點 238-240℃。其 TLC 片經移動相 CHCl3:EtOAc= 1:1 展開後，噴灑 10％ H2SO4 溶液， 加熱，在 Rf =0.41 位置經加熱後呈現一黃色點。 從 IR 光譜(圖 33)看到此化合物的特徵吸收：3483 cm-1 為 OH group 伸展振動的吸收；1621 cm-1 為與雙鍵共軛的 C=O 伸展振動的 吸收；1511、1430 cm-1 為芳香環的吸收；1268、1225、1155 cm-1 為 C-O-C 伸展振動的吸收。 UV 光譜(圖 34)λmax (MeOH) nm (logε)：在 224 nm (3.70)，247 nm (2.76)，280 nm (2.50)有吸收。 由 EI-MS m/z (%) (圖 32)顯示分子離子峰：540 (0.5)，基峰為 364，其分子式可能為 C30H20O10。 1 H-NMR 光譜(圖 35)顯示：訊號大多出現在 6-8 ppm 之間，全為 芳香環上的氫，由於 peak 都是成對出現且積分多一倍，推測此化合 物可能為 dimer，即雙黃酮化合物。經由偶合常數並從 H,HCOSY(圖 38)得知δ6.73 (B-3’, B-5’)、δ7.35 (B-2’, B-6’)互相偶合(J= 8.5 Hz)，且為鄰位關係；δ6.80 (E-3’, E-5’)、δ7.09 (E-2’, E-6’)互相 偶合(J= 8.4 Hz)，亦為鄰位關係。上述這六個氫都為苯環上氫。δ 2.84(C-3)、δ5.62(C-2)經由 H,H-COSY(圖 39)得知互相偶合。δ5.62 (dd, J=13.1, 2.3 Hz)位置的吸收峰，為 C-2 訊號；δ2.84 (dd, J=17.2, 2.6 Hz)位置的吸收峰，為 C-3 訊號；δ6.17 (d, J=1.8 Hz)位置的吸收 峰，為 A-8 訊號；δ6.26 (d, J=1.9 Hz)位置的吸收峰，為 D-6 訊號； δ6.70 位置的吸收峰，為 F-3 訊號。δ12.65、12.46 位置的吸收峰， 分別為 A-5 及 D-5 之 OH 訊號。一般 OH 訊號不會出現在δ12 左右 的位置，是因在這兩個 OH 形成分子內氫鍵所導致。 從 13C-NMR 光譜(圖 36)及 DEPT 光譜(圖 37)得知：1 個 CH2 訊 號，12 個 CH 訊號，17 個四級碳的訊號，共有 30 個碳之訊號。 13 C-NMR 光譜(圖 36)顯示：δ42.3 為 CH2 訊號；δ78.9、94.0、 99.4、100.3、115.0、115.3、128.6、131.5 為 CH 訊號；δ99.4、 100.3、102.0、106.4、120.4、128.3、154.9、155.4、156.9、158.0、 160.7、161.3、164.0、165.1、183.0、198.9 為四級碳訊號，其中 δ99.4、100.3 在 13C-NMR 光譜(圖 36)及 DEPT 光譜(圖 37)得知為 CH 訊號，而沒有另外四級碳訊號吸收，因此藉由參考文獻 103-104 加以輔 助推測。 HMQC 光譜(圖 40、41)顯示：δ5.62 (C-2)與 δ78.9 (CH)相對應； δ6.17 (A-8)與 δ99.4 (CH)相對應；δ6.26 (D-6)與 δ94.0 (CH)相對應； δ6.70 (F-3)與 δ100.3 (CH)相對應；δ6.73 (B-3’, B-5’)與 δ115.0 (CH).
(51) 相對應；δ6.80 (E-3’, E-5’)與 δ115.3 (CH)相對應；δ7.09 (E-2’, E-6’) 與 δ131.5 (CH)相對應；δ7.35 (B-2’, B-6’)與 δ128.6 (CH)相對應。 HMBC 光譜(圖 42、43)顯示：δ198.9、160.7、165.1、161.3、 102.0、128.3、154.9 分別為 C-4、A-5、A-7、A-9、A-10、B-1’、B4’之訊號。δ164.0、182.3、156.9、161.3、155.4、106.4、120.4、 158.0 分別為 F-2、F-4、D-5、D-7、D-9、D-10、E-1’、E-4’之訊 號。δ94.0(A-8)與δ99.4(D-6)碳的訊號可能會互相交換。而δ 100.3(A-6)及δ99.4(D-8)在 13C-NMR 光譜(圖 36)及 DEPT 光譜(圖 37) 沒有其吸收訊號，藉由參考 rhusflavanone 及 agathisflavone 之碳譜數 據加以輔助推測。 綜合上述光譜數據並與文獻值 103-105 比對，推定此化合物為 rhusflavone。根據文獻報導，此化合物有細胞毒性作用 119。其結構 如下所示：. 3' 2' HO. 8. 7. 9. A. 6. 5. 1 O. 8. 9. O. D 6. 5 OH. 1 O. 2. 3'. 10. 4 O. 1'. 3. 4'. E 5' 6'. F. 5'. 3. 2' HO 7. B 6'. C 10 4. OH. 1'. 2. 4'. OH. OH.
(52) Table 6 Rhusflavanone 及 agathisflavone 之 13C spectral Data103 agathisflavone rhusflavanone δ13C (ppm) C-2 CH 78.6 164.1 C-3 CH2 42.3 103.1 C-4 C 196.4 182.3 A-5 C 161.8 160.0 A-6 C 101.2 103.6 A-7 C 165.2 162.9 A-8 CH 94.6 93.7 A-9 C 162.7 157.0 A-10 C 101.8 103.8 B-1’ C 129.2 121.5 B-2’ CH 128.1 128.6 B-3’ CH 115.4 116.2 B-4’ C 157.7 161.3 B-5’ CH 115.4 116.2 B-6’ CH 128.1 128.6 F-2 C 77.9 163.9 F-3 CH 42.1 102.8 F-4 C 196.3 182.1 D-5 C 161.8 160.9 D-6 CH 95.7 98.9 D-7 C 165.2 162.7 D-8 C 100.3 99.4 D-9 C 161.6 155.1 D-10 C 102.1 104.0 E-1’ C 129.2 121.7 E-2’ CH 127.6 128.2 E-3’ CH 115.3 116.2 E-4’ C 157.3 161.2 E-5’ CH 115.3 116.2 E-6’ CH 128.3 128.2.
(53) 【七】Compound VII (ursolic acid) Compound VII 為白色結晶，不能全溶於 CHCl3，熔點 263-265 ℃。其 TLC 片經移動相 CHCl3:EtOAc= 10:1 展開後，噴灑 10％ H2SO4 溶液，加熱，在 Rf =0.26 位置經加熱後呈現一鮮豔紫紅點， 加熱後過一段時間，紫紅色的點會轉變成灰藍色，推測可能為三萜 類化合物。 由 EI-MS m/z (%) (圖 44)顯示分子離子峰：456 (3.6)，基峰為 248，推測可能為三萜類化合物的骨架，其分子式可能為 C30H48O3。 從 IR 光譜(圖 45)看到此化合物的特徵吸收：3431 cm-1 為 OH group 伸展振動的吸收；2927 cm-1 為甲基之 C-H 伸展振動的吸收； 1693 -1 cm 為 C=O 伸展振動的吸收；1452、1387、1374 cm-1 為 CH 彎曲振 動的吸收；1032 cm-1 為 C-O 伸展振動的吸收。 1 H-NMR 光譜(圖 46)顯示：在 δ3.46 (1H, dd, J=7.8, 8.0 Hz)位置 的 吸收峰，為 H-3 訊號；δ5.50 (1H, t, J=3.1 Hz)位置的吸收峰，為 H-12 訊號；δ2.63 (1H, d, J=11.2 Hz) 位置的吸收峰，為 H-18 訊號；δ1.24 (3H, s)、0.98 (3H, s)、0.88 (3H, s)、1.05 (3H, s)、1.22 (3H, s)位置的 吸收峰，分別為 H-23、H-24、H-25、H-26、H-27 訊號；δ1.02 (3H, d, J=7.5 Hz)、0.96 (3H, d, J=4.7 Hz)位置的吸收峰，分為 H-29 及 H30 訊號。 從 13C-NMR(圖 47)及光譜 DEPT 光譜(圖 48)得知：有 7 個 CH3 訊號，9 個 CH2 訊號，7 個 CH 訊號，7 個四級碳的訊號，共有 30 個 碳之訊號。 13 C-NMR 光譜(圖 47)顯示：δ15.7、16.6、17.4、17.5、21.4、 23.9、28.8 為 CH3 訊號；δ18.7、23.6、24.9、28.1、28.6、31.0、 33.5、37.2、37.2、39.1 為 CH2 訊號；δ39.4、39.5、48.0、53.5、 55.8、78.1、125.6 為 CH 訊號。δ37.4、39.9、39.9、42.5、42.5、 139.2、179.9 為四級碳訊號。 HMQC 光譜(圖 49、50)顯示：δ3.46 (H-3)與 δ78.1 (CH)相對應； δ5.50 (H-12)與 δ125.6 (CH)相對應；δ2.63 (H-18)與 δ53.5 (CH)相對 應；δ1.24 (H-23)、0.98 (H-24)、0.88 (H-25)、1.05 (H-26)、1.22 (H27)分別與 δ28.8 (CH3)、δ16.6 (CH3)、δ15.7 (CH3)、δ17.5 (CH3)、 δ23.9 (CH3)對應；δ1.02 (H-29)、δ0.96 (H-30)與 δ17.4 (CH3)、δ21.4 (CH3)個別對應。 另由質譜之裂片，基峰 248 之斷裂形成，推定如下：.
(54) + .. + .. COOH. + .. RDA. -COOH. +. m/z 208. HO. m/z 456. +. COOH. HO. m/z 248. m/z 203. -H2 O. -H. + .. +. +. +. -H2O +. m/z 189. m/z 207. m/z 189. m/z 190. m/z 133. Scheme 52 ursolic acid 之質譜斷裂方式 117 綜合上述光譜數據並與文獻值 106 比對，推定此化合物為 ursolic acid。根據文獻 120 報導 ursolic acid，已在 34 科 108 種植物中分離到，在 植物界分布較廣，主要分布在女貞子、山楂、白花蛇舌草、陸英、夏枯 草和山茱萸等植物中，以游離形式或結合成糖苷存在；其含量分別為 0.29％、0.46％、0.38％、0.42％、0.35％、0.21％。 根據文獻報導 120-126，此化合物具有抗發炎、降血脂、抗動脈粥狀 硬化、抗潰瘍、抗微生物、抗血小板凝集、促進膽汁分泌、強心、抗心 律不整、保肝作用、抗腫瘤、抗炎止咳、抗糖尿病、抗脂質過氧化、抗 抑鬱、有效抑制 UVA 引起的人類皮膚細胞的光老化及 TGF-β1 拮抗劑 等。其結構如下所示： 30 29. 11 2 3 HO. 1. 25 10. 4. 26 9. 5 23. 19 18. 13 14. 8 27. 20. 17 16 15. 7 6. 24. 12. H. 21 22 28 OH O.
(55) 第四章 結論 紅腺忍冬(Lonicera hypoglauca MIQUEL)葉部之正己烷和乙酸乙酯 粗抽物，經過管柱層析法，共分離得到 7 個化合物：在正己烷層得 到 5 個化合物，乙酸乙酯層則有 2 個化合物，依其結構骨架分類， 如下所述： 1. 長鏈烷類：tritriacotane (I)、tetratriacontanoic acid (II)、4-decanol (III)、4-nonacosanol (IV) 2. 三萜類：3-acetyl oleanolic acid (V)、ursolic acid (VII) 3. 黃酮類：rhusflavone (VI) 其中 3-acetyl oleanolic acid (V)與 rhusflavone (VI)為忍冬屬植物 首次發現的化合物。.
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