【11】證書號數：I548873 【45】公告日： 中華民國 105 (2016) 年 09 月 11 日 【51】Int. Cl.： G01N33/533 C12N5/079 (2006.01) (2010.01) G01N33/58 (2006.01) 發明 全 9 頁 【54】名 稱：建立分析模組快速評估神經功能之方法
METHOD FOR QUICK EVALUATING NEURAL FUNCTION BY ESTABLISHING ANALYSIS MODULE
【21】申請案號：103133108 【22】申請日： 中華民國 103 (2014) 年 09 月 24 日 【11】公開編號：201612523 【43】公開日期： 中華民國 105 (2016) 年 04 月 01 日 【72】發 明 人： 沈孟儒 (TW) SHEN, MENG RU；張廉筠 (TW) CHANG, LIAN YUN；孫苑
庭 (TW) SUN, YUAN TING；張俊彥 (TW) CHANG, JANG YANG 【71】申 請 人： 國立成功大學 NATIONAL CHENG KUNG
UNIVERSITY 臺南市東區大學路 1 號 國立成功大學醫學院附設醫院 臺南市北區勝利路 138 號 【74】代 理 人： 陳豐裕 【56】參考文獻：
2014年 03 月 14 日，High Content Image Analysis Identifies Novel Regulators of Synaptogenesis in a High-Throughput RNAi Screen of Primary Neurons，PLoS One. 2014 Mar 14;9(3):e91744
2011年 03 月 04 日，年齡對交感神經節節後神經細胞之細胞核大小的影響，劉增 容，美和科技大學
2010年 07 月 15 日，A computational framework for studying neuron morphology from in vitro high content neuron-based screening， J Neurosci Methods. 2010 Jul 15;190(2):299-309.
1992年 05 月，Demonstration of local protein synthesis within dendrites using a new cell culture system that permits the isolation of living axons and dendrites from their cell bodies，J Neurosci. 1992 Mar;12(3):762-72.
審查人員：張榮興 [57]申請專利範圍 1. 一種建立分析模組快速評估神經功能之方法，其包括下列步驟：步驟一：利用一螢光顯 微影像系統擷取一具有複數個螢光標定之培養細胞以進行該培養細胞之影像分析，其中 該螢光顯微影像系統係內建有一包含複數指令之分析模組依序執行該步驟一至步驟三， 該培養細胞係包含神經細胞，該複數個螢光標定係包含赫斯特(Hoechst)染劑以標記細胞 核；步驟二：依據細胞核之面積大小與螢光強弱，選取表現軸、樹突螢光標定的神經細 胞，排除非神經細胞，並計算神經細胞體之面積大小，及軸突、樹突之長度與分支數 目，以確認該神經細胞之軸、樹突生長情形，其中該軸、樹突螢光標定係選自微管相關 蛋白 2(MAP2)抗體或神經元類型Ⅲ β-微管蛋白(TUJ1)；以及步驟三：根據該步驟二之 軸、樹突螢光標定範圍，計算該神經細胞上突觸(synapse)螢光標定的數目，以確認該神 4180
-經細胞生長情形，藉以評估神經功能，其中該突觸螢光標定係選自突觸蛋白 (Synaptophysin)抗體或突觸 後密度蛋白 95(PSD95)。 2. 如申請專利範圍第 1 項所述之建立分析模組快速評估神經功能之方法，其中該培養細胞 係由下列步驟製得：步驟一：將源自一幼鼠大腦皮質組織之細胞加入一第一培養基打散 以形成一混合液，其中幼鼠係出生後 0~1 天之小鼠(mouse)或大鼠(rat)，且該第一培養基 係不含血清之 DMEM/F12 培養基；步驟二：過濾該混合液，並以離心方式獲得一細胞沉 澱液；以及步驟三：將該細胞沉澱液培養於一第二培養基內 9~12 天，以製備出該培養細 胞，其中該第二培養基係包含 Neurobasal® A 培養基(Neurobasal® A medium)、L-麩醯胺 酸(L-glutamin)、B-27®添加劑(B-27® Supplement)，以及青黴素-鏈黴素(Penicillin/ Streptomycin)。 3. 如申請專利範圍第 2 項所述之建立分析模組快速評估神經功能之方法，其中係將該細胞 沉澱液培養於該第二培養基內 10 天，以製備出該培養細胞。 圖式簡單說明 第一圖：本發明建立分析模組快速評估神經功能之方法之步驟流程圖 第二圖：神經細胞示意圖 第三圖：不同培養天數之神經細胞代表圖 第四圖：不同培養天數對於神經細胞數量之影響 第五圖：不同培養天數對於神經細胞生長情形之影響 第六圖：不同培養天數對於突觸數量之影響 第七圖：不同化療藥物處理對於神經細胞數量之影響 第八圖：不同化療藥物處理對於突觸數量之影響 第九圖：不同化療藥物處理對於軸樹突長度之影響 (2) 4181
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