市售化粧品微生物之調查

冊、ISO標準檢驗法及日本衛生試驗法等數種。近年來 研究報告指出，以核酸為基礎的PCR（Polymerase chain reaction）快速檢測法可應用在藥品及化妝品中微生物

的檢測^(6-8)。

為確保化粧品之品質及消費者使用之安全，先 進國家如美國、歐盟及日本對於嬰兒用品、眼部化粧 品、口腔用品及其他化粧品都設有微生物容許量基準 為化妝品品質之參考（表一）。一般而言，國際間化 粧品之生菌數容許量基準介於100 CFU/g~1000 CFU/g 之間，病原性微生物及特定指標菌則不得檢出。國內 於94年9月23日公告化粧品中微生物容許量基準，從 95年4月1日開始，凡製造或輸入販售之化粧品，應符 合公告基準規定：嬰兒用及使用於接觸黏膜部位之化 粧品其生菌數均應在100 CFU/g以下，其他類化粧品其 生菌數均應在1000 CFU/g以下，且不得檢出大腸桿菌

（Escherichia coli）、綠膿桿菌（P. aeruginosa）或金黃 色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）等（表二），違 反者，則依化粧品衛生管理條例之有關規定處辦。

台灣溫暖潮濕的氣候，是適合各種微生物滋生繁 殖的溫床，化粧品污染微生物機率較溫帶或寒帶國家 為高。本研究目的在於調查市售化粧品於「化粧品中 微生物容許量」新基準施行前微生物含量之背景值，

作為衛生署日後加強輔導與監控之重點。委由國內各 衛生局抽樣眼部用品、嬰兒用品、面膜、面霜乳液類 及唇膏等共51件化粧品送至本局進行生菌數、大腸桿 菌、綠膿桿菌及金黃色葡萄球菌污染之檢測。

材料與方法

一、檢體來源

前　言

愛美是人的天性，化粧品工業因此蓬勃發展。化 粧品是一種獨一無二的產品（unique products），成分 如食品般複雜且富含營養，如油脂、多醣類、酒精、

蛋白質、氨基酸、糖苷類、膽固醇類、胜肽及維他命 等，惟其保存期（shelf life）不似食品般嚴格執行；化 粧品通常被歸屬在藥品類，卻尚未實施近乎無菌製造 系統（near-sterile manufacture systems）之規範⁽¹⁾。若 加上環境因子，如氧氣、水份、pH值、溫度、表面活 性、香料及精油等有利微生物生長條件⁽²⁾，容易造成微 生物污染繁殖及產品變質，影響消費者健康。化粧品 中微生物污染問題在工業界亦備受關注，因可能使產 品及經濟蒙受重大損失⁽³⁾。

在美國，有品質問題之化粧品通常由製造廠商主 動且自願將產品回收下架，政府機構則站在「監督」

之立場來管理⁽⁴⁾。美國藥物食品管理局曾有報告指出：

於1994-1998年間，美國因微生物污染而回收化粧品多 達56件，檢出的細菌有Burkholderia cepacia; Pseudomo- nas aeruginosa; Klebsiella oxytoca; Enterobacter gergo- viae及mold/yeast/fungi等，以污染綠膿桿菌（P. aerugi- nosa）為回收化粧品的主要原因（45%）⁽⁵⁾，這些調查 結果顯示市售化粧品中潛伏污染微生物之風險。化粧 品及其原料中微生物的檢測流程乃採用傳統菌落計數 及增菌分離培養法。然而，有關化粧品產品或化粧品 工廠環境中微生物生理與代謝機制（metabolic state of microorganisms），可供參考文獻資料不多⁽³⁾。國際上 可依據的檢驗方法有美國藥典、美國FDA細菌分析手

市售化粧品微生物之調查

張洳楣　林宜蓉　管麗珍　周秀冠 中部檢驗站

摘　要

化粧品成份複雜且富含營養，若加上環境因素，如氧氣、水份及溫度等有利微生物生長條件，

容易造成微生物污染繁殖及產品變質而影響健康。為確保化粧品之品質及消費者使用之安全，94年9 月23日衛生署公告「化粧品中微生物容許量基準」，自95年4月1日起，凡製造或輸入販售之化粧品，

應符合本公告基準規定，違反者，則依化粧品衛生管理條例之有關規定處辦。為瞭解市售化粧品微生 物品質概況及背景調查，本局委由各縣市衛生局於95年3至5月間自藥局、美容美髮行及化粧品量販店 等地，共抽樣化粧品51件。其中包括眼部用品8件、嬰兒用品9件、面膜9件、面霜乳液類17件及唇膏8 件，進行微生物品質檢測。結果發現51件化粧品均未檢出大腸桿菌、綠膿桿菌及金黃色葡萄球菌，其 中雖有2件嬰兒用品及1件護唇膏之生菌數含量超出該公告基準，惟其製造或輸入日期均為95年4月1日 之前，因此尚符合規定。本調查結果已於95年12月5日發布新聞在案。

關鍵詞：化粧品、生菌數、大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌

自民國95年3月至民國95年5月委由台北市政府衛 生局等23縣市衛生局，自藥局、美容美髮材料行、百 貨公司、大賣場、超級市場、藥粧店及化粧品量販店 等，抽樣化粧品共51件。其中包括眼部用品8件、嬰兒 用品9件、面膜9件、面霜乳液類17件及唇膏8件。各縣 市抽樣地點及件數詳如表三；國產及進口之眼部化粧 品、嬰兒用品、面膜、面霜乳液類及唇膏抽樣件數詳 如表四。

二、材料與器具

1. 高壓滅菌釜（Tomy, SS-325, Japan）

2. 振盪器（Vortex 2, U.S.A.）

3. 吸管：已滅菌，1 mL吸管有0.01 mL之刻度 4. 冰箱：-80℃（Sanyo MED-U32V, Japan）低溫冷

凍櫃；4℃冷藏櫃（Sanyo MPR-411F, Japan）

5. 培養箱：30℃與35℃（Memmert, Germany）

6. 不銹鋼藥杓、剪刀、小刀、曲玻棒與鑷子：可 滅菌

7. 接種環：鎳鉻合金

8. 電子天平（Mettler PB602, Swizerland）

9. 無菌塑膠離心管（PE材質）：50 mL，附有螺 旋蓋

10. 無菌培養皿平板：15 × 100 mm

表一、世界衛生組織及各國化粧品微生物容許基準^(9,10)

國 別 對 象 生 菌 數

(CFU/g)以下 不得檢出之特定菌

美 國 嬰兒用品 500

(CTFA Guide Line) 病原性微生物

眼部用品 500 金黃色葡萄球菌

口腔用品 1000 大腸桿菌

其他化粧品 1000 綠膿桿菌

WHO 一般製劑 細菌1000 大腸桿菌、綠膿桿菌

真菌 100 金黃色葡萄球菌

日 本 眼部化粧品 1000 病原性微生物

英 國 嬰兒用品 100

(TPE Guide Line) 病原性微生物

眼部用品 100

其他化粧品 1000

表二、衛生署公告化粧品中微生物容許量基準

生菌數 其他規定

(1) 嬰兒用、眼部周圍用 及使用於接觸黏膜 部位之化粧品：100 CFU/g或mL以下。

(2) 其他類化粧品：1000 CFU/g或mL以下。

不得檢出大腸桿菌

（Escherichia coli）、

綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa）或

金黃色葡萄球菌

（Staphylococcus aureus）

等。

表三、各縣市化粧品抽驗件數

調查地點 抽 樣 地 點 件數

台北市 藥局、美容美髮材料行 3

高雄市 化粧品量販店 3

基隆市 百貨公司、美容美髮材料行 2

台北縣 大賣場、美容美髮材料行 3

桃園縣 化粧品量販店 2

新竹市 藥局、化粧品量販店 2

新竹縣 藥粧店 2

苗栗縣 藥局 2

台中縣 藥局、美容美髮材料行 2

台中市 百貨公司 3

彰化縣 美容美髮材料行 2

南投縣 化粧品量販店 2

雲林縣 藥局 2

嘉義縣 化粧品量販店 2

嘉義市 藥局、化粧品量販店 2

台南縣 藥局、藥粧店 2

台南市 美容美髮材料行 2

高雄縣 藥局 2

屏東縣 化粧品量販店 2

宜蘭縣 美容美髮材料行、化粧品量販店 2

花蓮縣 化粧品量販店 2

臺東縣 超級市場 2

澎湖縣 超級市場、藥粧店 3

合 計 51

11. 微生物自動鑑定儀Vitek 32（bioMerieux, Inc., U.S.A.）

三、 檢驗方法

依據美國FDA細菌分析手冊及本局相關文獻資 料。

四、實驗菌株

E. coli ATCC 25922、S. aureus ATCC 6538p及P.

aeruginosa ATCC 27853等3菌株購自食品工業研究所 生物資源保存及研究中心。所有實驗菌種均冷凍保存

（-80℃）於細菌保存管中，使用時先接種於Trypticase soy broth（TSB）培養液，35℃培養24小時復育後，再 將活化後的菌液取一白金耳接種於Trypticase soy agar

（TSA），35℃培養24小時，挑取單一菌落於TSA斜面 培養基4℃儲存備用。

五、培養基及藥品

Modified letheen broth（MLB）、Modified letheen agar（MLA）、木糖離胺酸去氧膽酸鹽培養基（Xylose lysine deoxycholate agar, XLD）及Cetrimide agar購自 Difco Lab（Detroit, Michigan, U.S.A.）。伊紅亞甲藍培 養基（Levine’s eosin-methylene blue agar, L EMB）、

胰化酪蛋白大豆培養基（Trypticase soy agar, TSA）、

三糖鐵培養基（Triple sugar iron agar, TSI）、馬鈴薯葡 萄糖培養基（Potato dextrose agar, PDA）、麥芽培養基

（Malt extract agar, MEA）、巴德派克培養基（Baird- Parker, BP）、氯四環素（Chlortetracycline）及Tween 80購自Merck（Darmstadt, Germany）。

六、培養基製備

依據購買培養基所附說明配製。

七、樣品製備方法

化粧品檢體收到後儘快分析樣品，室溫方式儲 存。開封前先檢查外包裝是否完整。

量取液體類檢體（如乳液）1 mL置入9 mL modi- fied letheen broth（MLB）無菌離心管中混合均勻成10 倍稀釋液。固體及粉狀類檢體（如面膜、眼影及爽身

粉）之調製方法：稱取檢體1 g加入無菌Tween 80 1 mL 及MLB 8 mL混合均勻成10倍稀釋液。面霜及唇膏等油 脂類檢體之調製方法：稱取檢體1 g加入無菌Tween 80 1 mL，5-7顆5 mm玻璃珠（或10-15顆3 mm玻璃珠）與 MLB 8 mL混合均勻成10倍稀釋液。

八、生菌數檢驗法

檢體取約1 g加MLB 9 mL，混合均勻成10倍稀釋 液依序做成10^-1~10^-6倍稀釋液。取10^-1~10^-6倍稀釋 液0.1 mL至MLA以曲玻棒塗抹均勻，均為二重 覆。MLA於30℃培養48小時計算並記錄菌落數

（CFU/g）。

牞 黴菌及酵母菌生菌數之檢測

檢體取約1 g，加MLB 9 mL，混合均勻成10倍稀 釋液依序做成10^-1~10^-6倍稀釋液。取10^-1~10^-6倍 稀釋液 0.1 mL至添加40 ppm Chlortetracycline之 PDA，以曲玻棒塗抹均勻，均為二重覆。PDA於 30℃培養7天後，計算並記錄菌落數（CFU/g）。

犴 增菌試驗（若上述MLA培養基上無任何菌落時進 行本試驗）

MLB（10^-1~10^-6倍）各稀釋液30℃增菌培養7天後

（每天觀察，若有混濁生長現象）取一接種環量 至MLA及MacConkey培養基，30℃培養48小時。

觀察MLA及MacConkey培養基上有無菌落生長，

記錄有菌落之平板。

犵 篩選試驗（檢測生菌數前之預試驗）

檢體取約1 g加MLB 9 mL，混合均勻成10倍稀釋 液，取10倍稀釋液之1 mL以傾注平板技術（Pour plate technique）置於MLA及PDA培養基上或取 10倍稀釋液之0.1 mL以曲玻棒塗抹均勻（Spread plate technique）於MLA及PDA培養基上，均做二 重覆；MLA培養基置於30℃培養48小時，PDA培 養基置於30℃培養7天後估算檢體生菌數小於10 或小於100（CFU/g）。

九、大腸桿菌檢驗法

檢體取約1 g依上述製備方式混合均勻成10倍稀釋 液，並依序做成10^-1~10^-3倍稀釋液，取10^-1~10^-3倍稀釋 表四、國產及進口之眼部化粧品、嬰兒用品、面膜、面霜乳液類及唇膏抽樣件數

種類 國產 進口

日本 美國 韓國 印尼 大陸 德國 義大利 泰國

眼部化粧品 2 2 2 1 1

嬰兒用品 5 2 1 1

面膜 2 3 2 2

面霜乳液類 7 5 1 1 1 1 1

唇膏 3 2 2 1

進口件數 12 5 6 3 3 1 1 1

總件數 19 32

液0.1 mL至MLA上以曲玻棒塗抹均勻，均為二重覆。

經30℃培養48小時後將所有生長菌落接種於MacConkey 及EMB培養基上。經35℃培養24小時鉤取可疑菌落 TSA及TSI培養基上中，置於35℃培養18-24小時後進行 微生物自動鑑定儀Vitek 32（bioMerieux, Inc., U.S.A.）

生化鑑別試驗，記錄結果。

十、綠膿桿菌檢驗法

檢體取約1 g依上述製備方式混合均勻成10倍稀釋 液，依序做成10^-1~10^-6倍稀釋液。取10^-1~10^-6倍稀釋液 0.1 mL至MLA上以曲玻棒塗抹均勻，均為二重覆30℃

培養48小時所有生長菌落接種於MacConkey 及Cetrim- ide培養基。經35℃培養24小時鉤取可疑菌落至TSA及 TSI培養基中，置於35℃培養18-24小時後進行微生物自 動鑑定儀Vitek 32（bioMerieux, Inc., U.S.A.）生化鑑別 試驗，記錄結果。

十一、金黃色葡萄球菌檢驗法

檢體取約1 g加MLB 9 mL，混合均勻成10倍稀釋 液，並依序做成10^-1~10^-3倍稀釋液。取0.1 mL 10^-1~10^-3 倍稀釋液至巴德派克培養基（Baird-Parker agar, BP）上 以曲玻棒塗抹均勻，均為二重覆。於35℃培養48小時 後，計算並記錄可疑菌落數。由BP上鉤取可疑菌落接 種於TSA培養基及BHI培養液上中，經35℃培養24小時 後進行凝固酶試驗及微生物自動鑑定儀Vitek 32（bioM- erieux, Inc., U.S.A.）生化鑑別試驗，記錄結果。

十二、接種標準菌株試驗

自冰箱中取出E. coli ATCC 25922; S. aureus ATCC 6538p; P. aeruginosa ATCC 27853等3株標準菌，取一 白金耳菌接種至TSA plate，於35℃經24小時培養後，

調菌液至MacFarland 1.0。分別自三株標準菌取10³~10⁴ CFU/mL菌液0.1 mL分別接種至1 g化粧品檢體中，加入 MLB 8-9 mL，混合均勻成為10~100 CFU/mL菌數，各 取0.1 mL塗抹於MLA, BP, CT, EMB上經35℃，24小時 培養後觀察各選擇性培養基上典型菌落型態及計算菌 數。

結果與討論

化粧品並非要求無菌（not expected to be asep- tic），唯不得檢出病原性微生物，生菌數愈低表示品 質愈佳。目前為止，尚無一套可廣泛被接受的生菌數 標準，美國暫訂容許量標準為：嬰兒用品及眼部化粧 品之生菌數須小於500 CFU/g，口腔及其他化粧品之生 菌數須小於1000 CFU/g⁽⁹⁾。95年國內衛生署新公告基準 規定：嬰兒用及使用於接觸黏膜部位之化粧品其生菌 數均應在100 CFU/g以下，其他類化粧品其生菌數均應 在1000 CFU/g以下。相較之下，國內的公告基準規定甚 至比美國容許量標準更能保護消費者的健康。

衛生局共送驗51件化粧品檢體，均為95年4月1日 前生產製造之化粧品。屬於國產之化粧品佔19件，分 別為眼部化粧品2件、嬰兒用品5件、面膜2件、面霜 乳液類7件及唇膏3件。進口之化粧品佔32件，分別為 眼部化粧品6件，自美國及日本進口各2件，印尼及韓 國進口各1件；嬰兒用品4件分別為韓國2件，德國及 印尼進口各1件；面膜7件分別為日本進口3件，韓國 及大陸進口各2件；面霜乳液類10件分別為日本進口5 件，美國、韓國、印尼、義大利及泰國進口各1件；唇 膏5件分別為美國及日本進口各2件及大陸進口1件（表 四）。抽樣之化粧品檢體均送到本局進行微生物檢 驗，結果並未檢出可能致病的大腸桿菌、綠膿桿菌及 金黃色葡萄球菌，僅2件嬰兒用品及1件唇膏之生菌數 含量超出100 CFU/g（表五）。

2件嬰兒用品為國產嬰兒爽身粉，1件標示成分為 青小豆、玉米澱粉、綠薄荷及天然精油；另1件標示 成分為甘草粉、綠豆粉、白芷根油，松花粉、硬脂酸 鋅、薄荷腦、冰片及保存劑（Methyl Paraben），可 能因天然植物性成份富有養份，適合微生物繁殖，因 此生菌數含量偏高（1.2 × 10³ CFU/g及9.4 × 10⁴ CFU/

g）。1件護唇膏為進口化粧品，檢驗結果生菌數為700 CFU/g，依新基準使用於接觸黏膜部位之化粧品其生菌 數均應在100 CFU/g以下。本案是否因運送過程或儲存 環境溫度不當，造成生菌數偏高仍待探討。應標示品 項方面，除2件唇膏未標示批號及製造（或有效）日期 外，其餘化粧品包裝上均依化粧品衛生管理條例標示 製造廠名等相關資訊。

本局71及81年度，曾針對國內市售化粧品微生物 含量進行探討及調查，結果71年度10件送驗化粧品檢

表五、眼部化粧品、嬰兒用品、面膜、面霜乳液類及唇膏之檢驗結果

種類 送驗

件數

陽性件數 生菌數

(>100 CFU/g) 大腸桿菌群 金黃色葡萄球菌 綠膿桿菌

眼部化粧品 8 0 0 0 0

嬰兒用品 9 2 0 0 0

面膜 9 0 0 0 0

面霜乳液類 17 0 0 0 0

唇膏 8 1 0 0 0

總件數 51 3 0 0 0

體中有1件霜劑（10%）含有酵母菌和黴菌總生菌數

（Yeast and Mold Plate Count, YMPC）達3.5 × 10⁴ CFU/

g，經進一步鑑定結果，得知其含有一種可能引起全身 性病症的婆娑狀黴菌（Paecilomyces sp.）屬⁽¹¹⁾。81年 度201件中有21件（10%）好氣性生菌數（APC）超出 新公告基準，及1件眼部化粧品（眼線液）檢出可能引 起人類疾病的金黃色葡萄球菌⁽¹⁰⁾；95年本調查結果顯 示，51件送驗化粧品中有3件（6%）生菌數超出微生物 容許量基準；整體而言，生菌數超出公告基準的比率 有逐年降低的趨勢，顯示政府及業者均關注化粧品中 微生物品質與安全問題（圖四）。FDA（1989）調查 百貨公司專櫃化粧品污染情形：結果發現有超過5%污 染黴菌及病原菌⁽¹²⁾。相關研究報告指出：微生物污染 化粧品通常因添加不適當防腐劑或產品製造儲存環境

不當所致^(1,3,11)。

依據「化粧品衛生管理條例」第二十六條所述，

「直轄市或縣（市）衛生及工業主管機關，應派員赴 各化妝品及化粧品色素製造、加工之場所、倉庫、販 賣處所，實地檢查其設備、裝置、製造程序、環境衛 生及其成品、半成品、原料、配料、包裝、容器、標 籤、仿單等，廠商不得無故拒絕。」⁽¹³⁾。本次調查所 發現生菌數偏高的3件化粧品除由轄區衛生局輔導業者 主動下架，本局並會同衛生局稽查員赴國內製造廠查 核相關設備、原料及製程，輔導及督促業者落實品管 制度。

綜言之，化粧品的原料成份複雜並富有養份，

容易被微生物污染繁殖甚至產品變質，影響消費者健 康。本調查結果發現51件化粧品中有2件嬰兒用品及 1件唇膏之生菌數含量超出公告基準，惟其製造或輸 入日期均為95年4月1日之前，因此尚符合規定；均未

檢出可能引起人類疾病的大腸桿菌、綠膿桿菌及金黃 色葡萄球菌。為確保化粧品之品質及消費者使用之安 全，有關單位似應更積極輔導業者儘速推動化粧品優 良製造規範（Good Manufacture Practice, GMP），以保 障消費者使用安全與健康。

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10 1

201

21

51 3

0 50 100 150 200 250

71年度 81年度 95年度

總件數 不合格件數

件數

圖一、歷年化粧品中生菌數調查檢驗結果分析

Microbiological Survey of Marketed Cosmetics in Taiwan

JU-MEI CHANG, YI-RONG LIN, LI-CHEN KUAN AND HSIU-KUAN CHOU

Central Regional Laboratory

ABSTRACT

Cosmetic products contain complex ingredients with nutrients, such as lipids, polysaccharides, alcohol, proteins, amino acids, glycosides, esteroids, peptides and vitamins. Additionally, the environmental factors including oxygen, humidity and temperature facilitate the growth of microorganisms. The microbial contamination of cosmetics can be health hazards for consumers. To assure the quality of cosmetics and protect the health of consumers, the Department of Health (DOH) announced “Microbial guideline of cosmetics” on Sept. 23, 2005. Either domestic or imported cosmetics, manufactured after the date of April 1, 2006, enforce the “Microbial guideline of cosmetics” established by DOH. Therefore, a total of 51 cosmetic products including 8 samples of eye-area cosmetics, 9 of baby cosmetics, 9 of masks, 17 of creams and lotions and 8 of lipsticks were collected by 23 local bureaus of health in Taiwan in 2006. These samples were examined for aerobic plate count (APC) for Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus. Although the aerobic plate counts of 2 baby power and 1 lipstick were higher than the announced regulation limit (100 CFU/g) in this investigation, the cosmetic products still meet the regulation limit for their manufacture dates earlier than the official April 1, 2006. Besides, none of the pathogens of E. coli, P. aeruginosa and S. aureus were detected in all cosmetic products. The results of this survey were announced by Department of Health on Dec. 5, 2006.

Key words: cosmetic, aerobic plate count, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus