摘 要 殘留量調查 市售畜禽產品中動物用藥乙型受體素類（ -Agonists ） β

之畜禽產品，進行乙型受體素類（β-agonists）動物用 藥之殘留量調查。

材料與方法

一、檢體來源

民國95年2月至4月由各縣市（政府）衛生局以稽 查方式至其轄區之大賣場、傳統市場、超級市場及鵝 肉專賣店等商號取得檢體，包括豬肉10件、雞肉10件 及鵝肉10件，共計30件。檢體送至本局後，即於-20℃

保存，直至分析時取出使用。

二、化學藥品

Clenbuterol hydrochloride （CLEN, > 98%）、sal- butamol （SALB, 99.0%）、terbutaline hemisulfate salt

（TERB, > 99%）、tulobuterol hydrochloride （TULO, >

99%）及內部標準品 （internal standard, I.S.） metopro- lol tartrate salt （METO, > 99%） 皆購自Sigma Chem. 公 司 （St. Louis, MO, U.S.A.），四種標準品及I.S.之結構 式如圖一所示。乙腈及甲醇為HPLC級，購自Labscan

前　言

乙型受體素類（β-Agonists）係具有模仿交感神經 活性之合成分子，一般用於治療人或動物之支氣管疾 病，如氣喘或減緩子宮收縮。有些β-agonists藥物能使 動物體內營養成分由脂肪組織轉移為肌肉組織，稱為 再分配效應（repartitioning effects），使體內之脂肪分 解代謝增強，增加蛋白質合成，顯著提高瘦肉率、飼 料轉換率及增重⁽¹⁾。1980年末期以來，高於治療劑量之 β-agonists被非法使用於畜牧生產，以促進家畜生長及 改善品質，歐盟及其他國家都出現含clenbuterol之畜產 品⁽²⁾，亦曾發生因食用殘留clenbuterol之牛肝而引起食 物中毒之案例^(3,4)。由於β-agonists會引起與心臟、中樞 神經系統及肺相關之急性中毒，因此被很多國家禁用

(5)。為防止動物用藥濫用及維護國人健康，行政院衛生 署於96年1月公告修訂「動物用藥殘留標準」⁽⁶⁾，其中 規定clenbuterol之殘留標準如表一所示，牛肉及牛肝之 殘留容許量分別為0.0002及0.0006 ppm。本局為配合此 規定，針對國內曾違規使用而被檢出之乙型受體素，

於93年度建立禽畜產品中乙型受體素類（β-agonists）

動物用藥之檢驗方法，以LC/MS/MS同時檢測禽畜產品 中clenbuterol、salbutamol、terbutaline及tulobuterol四種 乙型受體素，此方法業已成為行政院衛生署公告方法

(7)。93年度利用此方法監測市售禽畜產品44件，結果有 3件鵝肉、3件鵝肝及2件鵝腎檢體檢出salbutamol 1.10 ~ 11.21 ppb，與規定不符者達18.2% ⁽⁸⁾。調查結果顯示市 售鵝檢體存在salbutamol殘留問題，已提供有關單位作 為行政管理之參考，並加強對業者之管理及輔導。為 瞭解市售禽畜產品是否仍有乙型受體素類動物用藥之 不法殘留問題，95年度抽驗豬肉、雞肉及鵝肉各10件

市售畜禽產品中動物用藥乙型受體素類（ β-Agonists）

殘留量調查

曾素香　周珮如　陳素燕　蘇淑珠　周薰修

第四組

摘　要

95年度針對市售畜禽產品，包括豬肉、雞肉及鵝肉各10件，進行乙型受體素類（β-agonists）動 物用藥之殘留量調查。檢體委由各縣市（政府）衛生局進行採樣，以行政院衛生署公告之液相層析串 聯質譜法（liquid chromatography/tandem mass spectrometry, LC/MS/MS）進行clenbuterol、terbutaline、

salbutamol及tulobuterol等四種β-agonists之檢驗，結果均未檢出，與規定相符。本檢驗方法之最低檢出 限量為0.02 ppb。

關鍵詞：乙型受體素類、動物用藥、畜禽產品、液相層析串聯質譜法

表一、Clenbuterol之殘留標準

藥品名稱 殘留部位 禽畜種類 殘留容許量

（ppm）

學名

Clenbuterol

肌肉、脂 牛、馬 0.0002

肝、腎 0.0006

乳 牛 0.00005

（行政院衛生署，2007）

公司（Bankok, Thailand）。醋酸鈉、醋酸銨、氫氧化 鈉及冰醋酸均為Nacalai Tesque公司 （Kyoto, Japan）

之特級產品。β-Glucuronidase（G-0876, type H-2, from helix pomatia）購自Sigma-Aldrich公司（St. Louis, MO, U.S.A.）。固相萃取匣Oasis HLB（6 mL, 200 mg）為 Waters公司（Milford, MA, U.S.A.）產品，使用前預先 以甲醇3 mL及水3 mL潤洗。

三、儀器設備與裝置

檢體以均質攪拌機（ACE homogenizer, Nihonseiki Kaisha Ltd. Tokyo, Japan）均質，振盪器（祥泰精機股 份有限公司）、離心機（Labofuge 400, Heraeus Instru-

ments GmbH, Hanau, Germany）、旋渦混合器（Vortex mixer, Type 37600 Mixer, Thermolyne Corporation, Iowa, U.S.A.）及固相真空萃取裝置（Supelco, Bellefonte, PA, U.S.A.）用於檢液製備。

高效液相層析串聯質譜儀（LC/MS/MS）係Alli- ance 2695液相層析儀系統配合Waters Micromass Quatto Premier質譜儀（Waters Corporation, Milford, MA, U.S.A.），離子源採電灑法（electrospray ionization, ESI）偵測正離子，並附MassLynx軟體之電腦系統。

四、檢驗方法

依據行政院衛生署公告「食品中動物用藥殘留量

CH₃OCH₂ CH₂ OCH₂ CH OH

CH₂ N H

CH CH₃ CH₃

H₂N Cl

CH OH

CH₂ N H

C CH3

CH₃ CH₃ Cl

HO CH

OH

CH2 N H

C CH₃ CH3

CH3

HO

CH OH

CH₂ N H

C CH₃

CH₃ CH₃ Cl

CH OH

CH₂ N H

C CH₃

CH₃ CH₃ HO

HO

Clenbuterol (CLEN) Salbutamol (SALB)

Tulobuterol (TULO) Terbutaline (TERB)

Metoprolol (METO)

圖一、本實驗所檢測化合物之化學結構式

檢驗方法—乙型受體素類多重殘留分析」⁽⁷⁾，進行檢體 前處理，檢驗流程見圖二。

五、高效液相層析串聯質譜儀分析條件 灱進樣系統

層析管柱為Polaris Si-A（3 µm, 50 mm × 2.0 mm; Varian MetaChem Products, Torrance, CA, U.S.A.）。移動相為乙腈：7 mM醋酸銨（85：15, v/v）溶液，注入量5 µL，流速為0.2 mL/min。

牞質譜儀條件

離子源採電灑法偵測正離子，質譜儀之分析條 件及偵測之離子詳如表二及表三。Clenbuterol、

terbutaline及tulobuterol之碰撞誘導解離（col- lision induced dissociation）能量設定為20及25 eV，salbutamol為15 eV，而metoprolol為30 eV。

Clenbuterol之母離子為m/z 277，確認用子離子 有m/z 259、203及132，以m/z 203為定量離子。

Terbutaline之母離子為m/z 226，確認用子離子有 m/z 170、152及125，以m/z 152為定量離子。Sal- butamol之母離子為m/z 240，確認用子離子有m/z

Sample (muscle, liver) 5 g

Homogenize with 15 mL of 0.2 M acetate buffer (pH 5.2) Add 100 ML of I.S. (100 ng/mL)

Add 100 ML of B-glucuronidase Incubate at 55^℃ for 1 hr

Centrifuge (3500 rpm, 10 min) Supernatant Precipitate

Add 15 mL of 0.2 M acetate buffer (pH 5.2) Shake 10 min

Centrifuge (3500 rpm, 10 min) Supernatant

Adjust pH to 7.0

Centrifuge (3500 rpm, 10 min) Supernatant

Oasis HLB cartridge column (6 mL, 200 mg)

Wash with 4 mL of 5% MeOH Elute with 4 mL of MeOH Eluate

Evaporate to dryness at 65^℃ Residue

Dissolve in 0.5 mL of CH3CN: 7mM NH4OAc (1:1, v/v)

LC/MS/MS Combine

圖二、β-Agonists殘留之檢驗方法流程

222、 166及148，以m/z 222為定量離子。Tulob- uterol之母離子為m/z 228，確認用子離子有m/z 172、154及118，以m/z 154為定量離子。Metopro- lol之母離子為m/z 268，子離子選定m/z 159。

表二、質譜儀分析條件

Parameter Condition ESI mode Positive Capillary voltage 3.2 kV Desolvation temperature 280℃

Desolvation gas flow rate 500 L/hr Cone voltage 20 V

Collision voltage 20, 25 eV for clenbuterol 20, 25 eV for terbutaline 20, 25 eV for tulobuterol 15 eV for salbutamol 30 eV for metoprolol

表三、以質譜儀偵測之碰撞能量、離子片段及其比率 β-Agonist Transition

monitored

Relative intensity

(%)

Collision energy (eV) CLEN 277 → 259 29 (1.7)^a 20

277 → 203 100 20 277 → 132 11 (3.2) 25 TERB 226 → 170 9 (3.1) 20 226 → 152 100 20 226 → 125 11 (3.6) 25 SALB 240 → 222 100 15 240 → 166 48 (3.8) 15 240 → 148 37 (0.3) 15 TULO 228 → 172 16 (1.1) 20 228 → 154 100 20 228 → 118 7 (4.6) 25

METO 268 → 159 30

a Value in parenthesis is the coefficient of variation (CV, %), N=3.

圖三、四種b-agonists之多重反應偵測層析圖譜

16:16:4311-Jan-2005

std5+20,(in85ACN+15%7mM)-5 VAA155

1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00Time

%

0 100

1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00

%

0 100

20050111-25Sm(SG, 6x8) MRMof5ChannelsES+

277>203 3.10e4 Area 4.31;11198.06

20050111-25Sm(SG, 6x8) MRMof5ChannelsES+

226>152 1.84e4 Area 5.42;7647.79

20050111-25Sm(SG, 6x8) MRMof5ChannelsES+

240>222 1.53e4 Area 6.29;7649.76

20050111-25Sm(SG, 6x8) MRMof5ChannelsES+

228>154 8.05e4 Area 4.23;28763.60

20050111-25Sm(SG, 6x8) MRMof5ChannelsES+

268>159 1.38e4 Area 5.12;5406.76

277m203

226m152

240m222

CLEN

TERB

SALB

TULO

METO

228m154

268m159

結果與討論

本研究採用行政院衛生署公告方法，所得四種 β-agonists之多重反應偵測層析圖見圖三。此方法靈敏 度高，clenbuterol之最低檢出限量低達衛生署公告殘留 標準⁽⁶⁾之十分之一，該殘留標準係參考Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives（JACFA）⁽⁹⁾於1996 年第47次會議所訂定之標準。目前歐盟及美國⁽¹⁰⁾皆禁 用clenbuterol等β-agonists於產肉動物，歐盟針對禁用藥 物（banned drugs）制定實施檢驗之檢測能力最低要求

（minimum required performance limits, MRPLs），建 議肉及肝組織中clenbuterol之MRPLs為1 ppb，而salbu- tamol及terbutaline為3 ppb，另食品法規委員會（Codex Alimentarius Commission）訂有clenbuterol之每日可接 受攝取量為0.004 µg/kg bw ⁽¹¹⁾。95年度分析市售豬肉10 件、雞肉10件及鵝肉10件，結果均未檢出，並無94年 鵝檢體存在salbutamol殘留問題，顯示有關單位已加強 對業者之管理及輔導，並有一定成效。

參考文獻

Hanrahan, J. P. 1987. β-Agonists and their effects on animal growth and carcass quality. Elservier Applied Science, Barking, Amsterdam.

Hahnau, S. and Julicher, B. 1996. Evaluation of com- mercially available ELISA test kits for the detection of clenbuterol and other β-agonists. Food Addit. Contam.

13(3): 259-274.

Martinez-Navarro, J. F. 1990. Food poisoning related to consumption of illicit β-agonist in liver. Lancet 336:

1311.

Pulce, C., Lamaison, D., Keck, G., Bost Vironnois, C., Nicolas, J. and Descotes, J. 1991. Collective human 1.

2.

3.

4.

food poisoning by clenbuterol residues in veal liver.

Vet. Hum. Toxicol. 33(5): 480-481.

Lau, B. P. -Y., Lewis, D. and Lawrence, J. F. 1997.

Confirmation analysis of clenbuterol in beef liver and minced beef by a combination of immunoaffinity chro- matography and liquid chromatography/electrospray mass spectrometry or liquid chromatography/electro- spray tandem mass spectrometry. J. Mass Spectrom. 32:

655-661.

行政院衛生署。2007。動物用藥殘留標準。96.1.25 衛署食字第0960400187號令。

行政院衛生署。2005。食品中動物用藥殘留量檢驗 方法—乙型受體素類多重殘留分析。94.8.22衛署食 字第0949424412號公告。

蘇淑珠、周曉蕙、周薰修。2004。畜產品中動物用 藥β-agonists檢驗方法之建立。計畫編號：DOH93- FD-2030。

JECFA. 1996. Summary of evaluations performed by the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Addi- tives. [http://www.inchem.org/documents/jecfa/jeceval/

jec_450.htm].

FDA. CFR Title 21 database—Food and drugs. Chapter 1—Food and drug administration department of health and human services. Subchapter E–Animal drugs, feeds, and related products. Part 530–Extralabel drug use in animals.

[http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/

cfCFR/CFRSearch.cfm].

11. Codex Alimentarius: Codex Alimentarius Veterinary Drugs.

[http://faostat.fao.org/faostat/vetdrugs/vet_ref/vlst-e.

htm].

5.

6.

7.

8.

9.

10.

Survey on β-Agonists Residues in Marketed Meat and Poultry

SU-HSIANG TSENG, PEI-JU CHOU, SU-YEN CHEN, SHU-CHU SU AND SHIN-SHOU CHOU

Food Chemistry Division

ABSTRACT

A survey of β-agonists residues including clenbuterol, terbutaline, salbutamol and tulobuterol in marketed meat and poultry was conducted in 2006. Thirty samples, including 10 swine, 10 chicken and 10 goose samples, were obtained from retailers by local health personnel from February to March in 2006. Samples were analyzed by liquid chromatography/

tandem mass spectrometry (LC/MS/MS) promulgated by the Department of Health and none of β-agonists residues were detected.

Key words: β-Agonists, veterinary drugs, meat and poultry, liquid chromatography/tandem mass spectrometry