GenomeLab GeXP技術應用介紹
目前研究學者所使用的基因表達分析研究技術包括下列二項:
(一)定量PCR(real time PCR)
每個試管最多只能作5個基因表達的分析,對於多重基因綜合作 用所引起的疾病作用機轉, 癌症發生及轉移機轉的研究中,少 數基因分析常常不能真實地反映出生物個體在自然狀態下的基 因之間相互作用及相互協調的現象。若需檢測多重基因表達, 而樣本數又需增加以做實驗再現性的認證,就要耗費很高的成 本(包含試劑,樣本的RNA量等)及很長的時間。
(二)基因晶片(micro array chips)
目前廠商的技術發展,已可做到在一個晶片上,偵測數萬個基因 表達,其優點為高通量的基因表達分析,然而晶片成本高,不適合 大量樣本的檢測。
貝克曼庫爾特公司GenomeLab GeXP多重基因表達分析系統 的專利技術,採用universal primer與gene specific primer相結合的 方法，先進行反轉錄(reverse transcription)反應，獲得的cDNA產物 都含有universal primer序列，再利用含有螢光標定的相對應的單一 primer(universal primer)進行這些cDNA的擴增。此技術可以確保反 應中各模板cDNA產物都會有相同的擴增效率，並抑制非特異性 (non-specific RT-PCR)產物的發生。
藉由eXpress Profiler軟體,研究學者只要將想要研究的gene accession number輸入此軟體中,它就會提供您最適合的primers序 列(primer panel)。研究學者只需要請primer序列合成公司,合成這些 primers,再配合start kit,即可在一個試管中做出(多達40個)不同size 大小的RT-PCR產物,並利用高解析度的毛細管電泳,將這40個產物 以電泳技術分離開來。
由於每根peaks都有積分面積的數據,因此可以比較出這些基因 在不同的實驗條件下,它們的表現情形。結合multiplex RT-PCR技術 和毛細管電泳高靈敏度的特性,只需要20ng total RNA,每一根毛細 管就能夠偵測多至40個multiplex RT-PCR產物,並進行定量分析比 較。
由於系統本身為8個毛細管陣列,可放置2個96 well plates,因此 實驗設計可以分析少樣品量的高通量基因表達分析或是大樣品量的 中度通量的基因表達分析,此系統同時具備了基因晶片及定量PCR 的優點,而且更具有低成本及實驗分析耗時短的特性。
0 10000 20000 30000 40000 50000 60000 70000
150 175 200 225 250 275 300 325
RoRef ARR.D03_050919087N
Size (nt)
152.43157.71
162.61
168.01 173.72
178.09
184.11 188.84
197.58 203.36
206.55 214.20
219.00
224.24 227.77
233.32 238.36
247.22 255.27
258.85
264.28 268.74
275.21 295.46
325.29
利用GenomeLab GeXP高通量基因表達分析系統的優點, 適 合您應用於目標基因的尋找及篩選，藥物及毒物代謝途徑分析，
Biomarker的尋求，Microarray 數據的確效 ，RNAi研究，以及基因 調節的監測。
除了基因表達分析(Gene Expression)以外, 此系統尚可進行 PCR產物的分析, 例如對偶基因鑑定(Allele Identification), 微衛星 基因不穩定研究(Microsatellite Instability) ,異型接合子缺失分析 (Loss of Heterozygosity, LOH) , 限制酵素片段放大多型性研究 (Amplified Fragment Length Polymorphism, AFLP)及核酸單點多 型性分析(SNP)等研究
