乳癌

根據統計，每年全世界有 25 萬人死於乳癌，國內乳癌的發生率 逐年上升，為女性癌症發生率的第二位。其發生率民國六十八年為每 十萬人口 6.2 人，至八十四年上升為每十萬人口 24.4 人。依據今年行 政院衛生署公佈的資料，民國 89 年惡性腫瘤死亡率 25.4%，仍佔十 大死因的第一位^（2）。但只要早期發現、早期治療，存活率其實很高。

乳癌在西歐與北美為女性最多之癌症^（5），台灣乳癌發生率雖然較低，

但包括台灣在內的亞洲女性罹患乳癌的年齡都較歐美年輕 10 至 15 歲。乳癌的發生原因仍不確定，且亞洲婦女早發性乳癌的因素也還不 清楚^（6）。

乳癌的發生原因複雜，沒有單一因素可完全解釋乳癌的發生，女 性乳癌在 25 歲之前較少見，25 歲之後則任何年齡皆可發生。以流行 病學研究，在發生率的歸納結果，跟乳癌有關的風險因子有^{（2,4,21,22）}： 1. 地區：根據美國研究指出地區性的生活習俗或飲食習慣與發生乳

癌的相關性大於種族因素。如在美國加州的黑人，罹患乳癌的機 會是南非與奈及利亞黑人的三倍風險。

2. 年齡：1976 年聯合國世界衛生組織的報告指出，在乳癌發生率高 的國家，乳癌罹患率隨年齡增加而上升，乳癌發生率低的國家，

乳癌發生率的年齡高峰為 45 到 65 歲之間，之後隨年齡增加遞減，

25 歲以下婦女罹病較少。

3. 家族史：母系一等親如有罹患乳癌則為高危險群。

4. 初經：初經年齡愈早，乳癌發生率越高。

5. 停經：停經較晚的婦女罹患乳癌機率較高。

6. 肥胖：研究顯示身體質量指數大於 25 的停經後婦女風險較高。

7. 足月生產年齡：罹患乳癌風險隨足月生產年齡增加上升。且在 30 歲之前生育的婦女罹患乳癌的機率比未婚或未生產的婦女低。30 歲之後生育的婦女得病機率則高於未婚或未生產的婦女。

8. 哺乳史：有哺乳的婦女罹病的機率較低。

9. 生產胎次、避孕藥、荷爾蒙補充療法的使用：未產婦比多產婦危 險性高，避孕藥與荷爾蒙則仍未定論，但某些資料顯示以較高劑 量荷爾蒙治療停經症狀的危險性較高。

10. 環境荷爾蒙或 PAHs 等。

流行病學研究顯示個人、環境與遺傳為乳癌的重要影響因子

（21,23,24）

，有研究指出 BRCA1 與 BRCA2 基因至少占了乳癌病例的 5%

（23,24）

，而台灣婦女的 BRCA1 與 BRCA2 基因缺失與腫瘤有關^（1,3,25）。 乳癌是一多重因素（含外因性與內生性致癌物）共同作用的結果。個 體對環境暴露的感受性具有差異，個體的差異可能是由於多型性代謝 酵素對環境致癌物之活化、去毒或 DNA 損傷之修護能力有所不同所 產生。

二、化學致癌物代謝基因與其基因多型性

環境毒物可經不同途徑進入人體，當許多外因性或內生性的化學 物質或代謝產物對 DNA 傷害逐漸累積時，便會使細胞逐步癌化，導 致癌症生成，故代謝與解毒能力為體內第一道防線^{（21,26,27）}。由環境毒 物導致的致病風險會因不同的酵素代謝速率有所差異^（28-30）。增加致 癌物活性的第一期酵素（phase I enzyme）活性較低，或可代謝毒性 物質的第二期酵素（phase II enzyme）沒有缺損時，應可保護細胞不 受致癌物毒性影響。相對的，如果第二期酵素（phase II enzyme）有 突變或缺損時，會對環境或內生性因子產生不同感受性，導致致癌風

險上升^（21,26）。故致癌物解毒酵素與 DNA 修復酵素在癌症或乳癌中占

重要角色。乳癌為多重因子共同作用的結果，但僅有一部分易感性個 體暴露於致癌物質會罹患癌症，因此對環境毒物不同活化、去毒，或 DNA 損傷之修復能力的個體差異或許和罹患癌症風險有關^（27）。

許多環境毒物與致癌物質在進入體內經由第一期酵素（phase I enzyme）代謝活化，使其和 DNA 反應的能力增加，成為潛在致癌因 子，最主要的活化酵素為 cytochrome P450（CYP），在十五種 CYP450 酵素中，八種 CYP（CYP1A1、1A2、2A6、2C9、2D6、2E1 與 3A4）

多型性基因被用於研究環境毒物與致癌風險的相關性^(31-34)。

CYP1A1 位於 15q^（23），和芳香烴羥基 （aromatic hydrocarbon hydroxylase ；AHH）酵素活性有關^（29），可代謝 PAHs 產生嗜電性中 間產物如 benzo(a)pyrene 與 7,12-dimethylbenz(a)anthracen 會與 DNA 鍵結，產生突變，導致腫瘤^（28,29）。已有動物實驗證實若懷第一胎之

前暴露於此中間產物會導致癌症。在體外實驗，PAHs 會使乳房上皮 細胞轉形，但跟人類乳癌的相關性仍未定，流行病學研究亦顯示抽煙 和罹患乳癌風險的相關性並不一致^（29）。

CYP1A1 有兩個主要基因多型性︰ CYP1A1 Msp I 基因型為 Thymidine 取代 cytosine，在 3'-noncoding region 產生 Msp I 酵素切位

（35）

GST 基因群為第二期酵素（phase II enzyme），可代謝第一期酵素 如 CYP450 所活化的過氧化物，催化 glutathione 共價鍵結過氧化物及 PAHs 等嗜電性化合物，保護細胞 DNA 不受損害^（26,30,41,42）

。GSTs 有 六個基因位，分為 alpha, mu, pi, sigma, theta, zeta^{（21,26,30）}。GSTM1（μ）

位於第 1 號染色體（1p13.1），分為無效型與非無效型兩種。GSTM1

險為增加 2.1 倍，白種人 58 歲以下之停經後婦女罹患乳癌風險增加 2.4 倍、罹患皮膚癌與結直腸癌的風險亦會上升^（21,22）。

GSTT1（θ）基因位於第 11 號染色體（11q），如同 GSTM1 分為 無效型與非無效型。GSTT1 無效型亦為整段基因缺失，其比率自 10%

到 65%^（13,44），白種人無效型比為 10%至 20%^（14），GSTT1 基因產物可 代謝多種潛在致癌物質如氯甲烷（methyl chloride）、烷基鹵化物（alkyl halides）及環氧乙烷（ethylene oxide）等^（47），GSTT1 無效型在結直 腸癌風險較高^（22,24），有研究指出 GSTT1 無效型合併 GSTM1 無效型 和肺癌有高度相關^（48）。

除了 glutathione 共價鍵結，N-acetyltransferases（NAT）亦為體內 毒性物質的重要代謝途徑^（28）。NAT2 位於第 8 號染色體（8p）^（49），有 M1、M2、M3 三種基因多型性^（50）。NAT 可代謝 arylamines 與雜環胺

（heterocyclic amines）^（51），對 arylamines 行乙醯化作用（N-acetylation）

代謝解毒^（14,15），亦進行氧基乙醯化（O-acetylation），產生嗜電性中間

產物攻擊 DNA。PAHs 及芳基芳香胺已在動物實驗證實會跟乳房上皮 細胞 DNA 鍵結，造成腫瘤。NAT2 可區分為快型與慢型^（49,52）。慢型 為兩個對偶基因為一個或兩個具有變異，快型為只有一個對偶基因變 異或屬於野生型，慢型和膀胱癌有關，快型和結直腸癌有關^（14）。NAT2 慢型於白人約佔 50%，於黑人比例則稍低^（15）。Ambrosone 等人（1996）

（50）

發現帶有 NAT2 慢型的停經後婦女若有 2 至 20 年的抽煙習慣，與 罹患乳癌風險呈現劑量效應關係。

三、DPC

多種致癌物質可誘發 DPC 形成^（17）。DPC 為 DNA 與蛋白質共價 鍵結，產生不易被物理方法分離的穩定結構，在正常細胞內 DNA 與 蛋白質共價鍵結的百分比不高，但 DPC 會因暴露於甲醛、紫外線、

離子或非離子射線或金屬化合物如砷、鉻、鎳等顯著增加^{（17,53,54）}，這 些傷害雖不致造成細胞死亡，但會造成 DNA 損傷或造成 DNA 複製 時產生變異，使致癌風險上升^（17,54）。許多研究指出甲醛對哺乳類動 物細胞會造成基因毒性及致突變性。動物實驗顯示高濃度甲醛可導致 老鼠鼻上皮細胞產生不可逆的損害，亦會造成某些老鼠產生腫瘤。故 較高 DPC 值可能會影響健康效應。高 DPC 可能會造成基因表現的改 變，也可能造成 DNA 股斷裂，導致染色體異常（ CA）與姊妹染色分 體交換（SCE）^（54）。當損害由某些特定物質所引起，如鉻，細胞修復 較慢，如由甲醛引起則修復較快^（17）。在老鼠與猴子的動物實驗中顯 示老鼠的 DPC 含量和組織中甲醛濃度成正比。在體外實驗暴露於環 境污染物如重金屬等或香煙中所含甲醛及乙醛或其代謝物質等均會 造成 DPC^（19）。在工業地區工作的工人亦可偵測到淋巴球中有較高 DPC 值，DPC 可偵測體內 DNA 損傷程度，故可被作為生物指標^（54,55）。

第三章、材料與方法

一、研究對象

本研究屬於病例對照研究，病例組為自 1999 年 11 月到 2001 年 1 月，自中國醫藥學院附設醫院收集 60 名乳癌病例。每位病例由該 院外科醫師詳細診斷，經乳房組織切片檢定確認。並依病例之年齡、

性別、抽煙、家族史配對選取 60 名中部地區婦女為健康對照組。

使用結構式問卷獲得個人相關基本資料，內容包含家族史、初經 年齡及停經年齡、經產狀況、哺乳史、口服避孕藥及荷爾蒙的使用、

抽煙、喝酒、身體質量指數等。

二、研究方法

每名研究對象抽取 6ml 全血，其中 3ml 置於 EDTA 試管中作為抽 取 DNA 及分析基因型用，另外 3ml置於 Heparin 試管中作為分析 DPC 用。DPC 值測定均於採樣三天內完成細胞計數。

（1） DNA 萃取

將含 EDTA 之試管內的末稍血液離心 1,300rpm 10 分鐘，取出白血 球 0.5ml 。 加入 1.5ml 1X RBC lysis buffer，置於冰上 15 分鐘。離心 2,000rpm 10min，去除上清液後，加入 1 ml GenoMaker reagent。在室 溫下靜置 5 分鐘。之後加入 0.5ml chloroform，離心 12,000rpm，4℃，

5 分鐘。取出上清液放入新的 1.5ml 微量離心管內，加入 0.5ml isopropanol，在 4℃下以 6,000rpm，離心 2 分鐘，移除上清液，加入 1ml 70% ethanol，以 6,000rpm，離心 2 分鐘，除去上清液，此步驟再 重複一次。再移除上清液，DNA 溶於 100ul TE buffer。置於－20℃冰 存。

（2） 基因型檢定

以 聚 合 鏈 鎖 反 應 （ PCR ） 及 限 制 片 段 長 度 多 型 性 分 析

（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism ）

（PCR-RFLP）。分析 GSTM1 、 GSTT1 、 CYP1A1 與 NAT2 四種 基因型。四種基因型所用的引子序列顯示於表 1。

表1 各基因型之引子(primer)序列

基因型 引子序列

CYP1A1（1）^（56） 5'- TCACTCGTCTAAATACTCACCCTG -3' 5'- TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT -3' CYP1A1（2）^（56） 5'- CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT -3'

5'- GAGGCAGGTGGATCACTTGAGCTC -3' GSTM1^（27） 5'- CTGCCCTACTTGATTGATGGG -3'

5'- CTGGATTGTAGCAGATCATGC -3' GSTT1^（27） 5'- TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC -3'

5'- TCTCCGGATCATGGCCAGCA -3' β-globin^（27） 5'- ACACAACTGTGTTCACTAGC -3' 5'- CAACTTCATCCACGTTCACC -3' NAT2^（50） 5'- TCTAGCATGAATCACTCTGC -3'

5'- GGAACAAATTGGACTTGG -3'

CYP1A1 使用 nested-PCR 法，CYP1A1（1） 為第一次 PCR 所使用之引子序列，

CYP1A1（2）為第二次 PCR 所使用之引子序列，NAT2 則使用三種酵素判別基 因型。β-globin 作為內標（internal control）

使用 PCR-RFLP 法分析 CYP1A1 基因型。取出從白血球中萃取 的 DNA 1ìg，加入增幅所需的引子【表 1】、Tag 聚合 （Tag polymerase）、去氧核甘三磷酸（dNTP）、聚合 緩衝溶液與蒸餾水共 50ìl。反應條件為 95℃、4 分鐘使雙股 DNA 變性，其次以 94℃、 25 秒；60℃、 25 秒；72℃、 25 秒的條件循環反應 35 次，最後設定 72℃、6 分鐘使產物反應更完全。

第二次 PCR 反應條件為 95℃、4 分鐘作為預變性（prenatural）；

94℃、25 秒；66℃、 25 秒；72℃、 25 秒的條件循環反應 35 次，

制 切割點，故電泳結果只有一個 DNA 片段，其長度為 295bp。若

M：Marker；1：第一次 PCR 產物，413bp；2：CYP1A1MspI 野生/野生型，

295bp；3：CYP1A1MspI 變異/野生型，295bp、160bp、135bp；4、5：CYP1A1MspI

295bp；3：CYP1A1MspI 變異/野生型，295bp、160bp、135bp；4、5：CYP1A1MspI