先前我們在急性肝炎(Lai et al., 1999)及初代肝細胞9 的實驗就已 發現到 PHU 能提升肝臟 GSH 的含量。在第二章的實驗，PHU 增加肝 臟及腎臟的 GSH 含量。 GSH 是細胞內重要的抗氧化及解毒物質，為 確認 PHU 對腎臟 GSH 提升的作用，是否有藥理上的意義，本章實驗 使用抗癌藥物 cisplatin 誘發腎毒性，探討 PHU 對此是否有拮抗作用。
已知 cisplatin 的毒性機轉與排空腎臟 GSH 有關 (Kuhlmann et al., 1997)。
材料與方法
一、 人尿製劑的製備
詳第二章材料與方法。
二、 動物
使用 SD 雄性大鼠體重約 180-220 公克，購自國科會動物中心。飼 養環境，溫度維持 23 ±1℃，相對濕度 55 ±5%，明暗控制各 12 小時。
飲水經逆滲透處理，餵食福壽牌飼料。大鼠分成 5 組，每組 8 隻。控
制組及 cisplatin 組每天經投與去離子水 1 ml / 100g body weight，分三 組給藥組，每天經口投予 PHU 1 g/kg、 2g/kg 、3g /kg，連續 8 天，於 第 5 天投藥 1 小時後，除控制組外，靜脈注射 cisplatin 5mg / kg。於第 9 天將動物犧牲。於動物犧牲前收集 24 小時尿液 。動物犧牲時，大鼠 在乙醚麻醉下，由腹腔動脈採血後，取出腎臟。腎臟以冰冷的生理食 鹽水洗淨，再用濾紙擦乾，放置-80℃儲藏備用。
以生化自動分析儀(Ciba-corning 550)測定血清中 creatinine 、血中 尿素氮(blood urea nitrogen; BUN) 濃度，尿液 creatinine 濃度。算出 creatinine 清除率。
Creatinine clearance = urinary creatinine × urinary volume / hrs/ serum creatinine
三、腎組織均漿 LPO 和 GSH 之測定 詳第二章材料與方法。
四、腎組織粒線體層 LPO 和 GSH 之測定
粒線體層之萃取參照 Ohtsuki et al.(1995)的方法進行，取 0.5g 腎組 織，加入 5ml 1.15% KCl 溶液，以均質機均質化。取 3ml 均漿以 900 xg，
4℃離心 10 分鐘。取其上清液，以超高速離心機離心(20000 xg，30 mins，4℃)。將沉澱物以 1.15% KCl 溶液洗淨，再一次離心，則沉
澱物即為粒線體層。
粒線體層 LPO 和 GSH 之測定詳第二章材料與方法。
五 、SOD 之測定
詳第二章材料與方法。
六、Catalase、GSH-Px 之測定 詳第三章材料與方法。
七、試藥
KCl、pyridine、NaCl、Trichloroacetic acid (TCA)、Na2HPO4•12H2O、
NaH2PO4•2H2O、sucrose、sodium citrate 等購自 Wako Pure Chemical Industries,Ltd.。reduce glutathione、2-thiobarbituric acid、sodium dodecyl sulfate (SDS) 、 NaN3 、 Tris-base 、 triron X-100 、 pyrogallol 、 ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)等購自 sigma chemical CO.P.O.。
acetic acid 購自 Shimakyu’s pure chemicals。n-butanol 購自聯工化學廠。
5,5’-dithio-bis (2-nitrobenzoic acid) 購 自 Fluka chemie:AG CH-9470 Buchs 。 methanol 購 自 BDH Laboratory supplies Poole,BH 15 1TD,England。metaphosphoric acid (NaPO3)n 購自 Hayashi pure chemical Industries Ltd.Japan。H2O2購自 Ferak laborat gmbh berlin (west)。Cisplatin 購自 Pharmacia & Upjohn S.P.A.-Milan, Italy.
八、統計方法
以單尾變異數分析(one-way analysis of variance )方法分析，並進行 Dunnet 測試，以 P 值小於 0.05 認為有顯著差異。
結 果
一、死亡率
Cisplatin 組和 PHU 1 g/kg 、2 g/kg、3 g/kg 組的死亡率分別為 37.5%、12.5%、0 %、12.5%。
二、血清 creatinine 及 BUN
cisplatin 處理的大鼠，血清中 creatinine 值較控制組明顯上升。 對 cisplatin 引起的 creatinine 上升，PHU 有明顯的下降作用 (Fig. 5-1)。
cisplatin 處理的大鼠，血清中 BUN 值較控制組明顯上升。對 cisplatin 引起的 BUN 上升，PHU 具有明顯的下降作用 (Fig. 5-1)。
三、 尿量及 creatinine 清除率
cisplatin 處理的大鼠，24 小時尿量較控制組明顯減少。 對 cisplatin 引起的尿量減少，PHU 有明顯的增加作用 (Fig. 5-2)。
cisplatin 處理的大鼠，creatinine 清除率較控制組明顯下降。 對 cisplatin 引起的 creatinine clearance 減少，PHU 有明顯的增加作用
四、脂質過氧化測定
cisplatin 處理的大鼠腎組織均漿 LPO 值和控制組無差異。PHU 處 理大鼠腎組織均漿 LPO 值較 cisplatin 組為低 (Fig. 5-3)。
cisplatin 處理的大鼠，腎臟粒線體層中 LPO 值，和控制組無差異。
PHU (3 g/kg )處理的大鼠，腎臟粒線體層 LPO 值較 cisplatin 組為低 (Fig 5-3)。
五、GSH 含量
cisplatin 處理的大鼠，在腎臟組織均漿中 GSH 的含量較控制組低。
PHU 處理的大鼠，組織均漿 GSH 含量較 cisplatin 組明顯增加。
(Fig. 5-4)
cisplatin 處理的大鼠，腎臟粒線體層 GSH 的含量較控制組低。PHU 處理的大鼠，腎臟粒線體層 GSH 含量較 cisplatin 組明顯增加。
(Fig. 5-4)
六、腎臟 SOD、catalase、GSH-Px 的活性
cisplatin 處理的大鼠，腎臟 SOD 及 catalase 的活性和控制組無差 異，PHU 對 SOD 和 Catalase 的活性沒有影響。 cisplatin 處理的大鼠，
腎臟 GSH-Px 的活性比控制組明顯下降，PHU (3 g/kg) 能提升 GSH-Px 的活性(Table 5-1)。