動物實驗

我們以矽膠管填充幾丁聚醣纖維薄膜來評估對截斷大鼠坐骨神經 再生的影響，觀察重點包含實驗大鼠外觀的變化、電生理功能評估、神 經再生情形及術側腓腸肌萎縮程度等項。

3.3.1 動物分組、麻醉與消毒

實驗動物則選用雌性 Sprague-Dawley (SD)大鼠 16 隻，重量為 251-326 g，隨機將大鼠分為 2 組: 麻醉機麻醉，初起劑量為 5 litter/kg.min，等大鼠昏迷後自麻醉箱中 取出。利用塑膠管輸送麻醉劑，此時將麻醉劑量改為 5 litter/kg.min，

並將此塑膠管套於大鼠鼻上，保持其麻醉狀態。 (greater trochanter of fermur )及外側豆狀骨(lateral fabella)予 以定位，並用刀片延此兩點之連線劃開皮膚，鈍性分離股二頭肌(biceps femoris muscle)與筋膜，游離出長約 2.5 cm 的坐骨神經。在距梨狀肌 (piriformis)下緣約 8 mm 處，用剪刀整齊剪斷坐骨神經幹，再取已滅 菌之神經導管，以 9-0 Nylon 縫合線將神經近側斷瑞固定在神經導管其 中一端距導管邊緣 1 mm 處，並使斷端伸入管中，用同樣的方式，將神 經遠側斷端固定在神經導管另一端距導管緣 1 mm 處，也使斷端伸入管 中而製造出 l0 mm 的間距(圖 3.4)。神經與神經導管縫合完畢後，以 4-0

Catgut chrom 縫合肌肉及皮膚。

圖3.4 神經斷端與矽膠管縫合的步驟。9-0 nylon 自矽膠管之外端穿入

（1），然後穿過斷端之神經外膜（2），最後自矽膠管之內側穿出（3），

神經藉著少許張力帶入矽膠管內，並在矽膠管內的外側打結固定

手術完畢後，測量大鼠體重，並將大鼠置回籠子，照光維持體溫，

等待動物甦醒。以抗生素 Pamoxcillin 1 g 溶解於 100 ml 逆滲透水中，

當作兩天份的自由飲水，預防傷口感染。並在飼養期間定期觀察大鼠的 飲食、大小便、傷口、毛色、活動情形與是否自殘等。

3.3.3 動物飼養環境

實驗動物之飼養環境為空調房間，一個塑膠籠子飼養 2 隻大鼠，溫 度維持 22 ± 3 ℃，相對溼度 55 ± 5 %，半日照環境，自由飲水及餵養 標準大鼠實驗飼料(福壽公司，台灣)。

3.3.4 觀察實驗大鼠外觀的變化

動物犧牲前，在上述飼養環境中飼養大鼠，並觀察大鼠的飲食、傷 下，置入 3.7 % Formalin solution 中保存。之後取樣本中間部份做切 片，以 Parffin wax 包埋，切片厚度為 12μm，並以 Hemnatoxylin and eosin 染色。

再 生 神 經 組 織 連 同 神 經 導 管 與 兩 側 神 經 幹 ， 浸 泡 於 2.5 %

Glutardialdehyde 三天後取出，利用刀片將導管均分為三等分。將中間 三分之一以刀片輕輕劃開，把中央的再生神經組織剝下，過程中需注意 保 持 其完 整 ；將 再 生神 經 組織 置 入含 2.5% Glutardialdehyde、 4%

Paraformaldehyde 及 0.lM Cacodehyde 混合液中。兩天後將神經取出，

以 1% OsO4固定約二小時，再以 50-100%酒精脫水。用樹脂包埋後，將再 生神經組織之樹脂置入 60-70℃ 烤箱中約 16 小時。待樹脂硬化，隨後 將包埋的再生神經組織作橫向 lμm 切片後，以 Toluidine blue 染色，

髓鞘與 Schwann cell 會明顯呈色。對再生神經組織切片先以接於顯微 鏡的數位相機(Nikon Coolpix 950，Japan)拍下數位影像。