壹、小鼠血癌細胞 WEHI-3 致毒活性：

1. 細胞來源：小鼠血癌細胞株 WEHI-3，購自新竹食品工業發展研究所。

2. 細胞培養：血癌細胞 WEHI-3 放置於 75cc 組織培養瓶中，內含 RPMI-1640 培養液中，

含10%胎牛血清，及 1% penicillin- streptomycin (10,000 U/ml penicillin and 10 mg/ml streptomycin) 、 1% glutamine，以每 ml 約 50000 個細胞密度，在室溫 37 ℃，5% CO2 and 95%空氣下生長，每 2~3 天更換一次培養液。

3. 細胞存活率試驗(cell viability assay)：將培養生長良好的 WEHI-3 細胞，用培養液稀釋 成密度為50000 cell/ml，放入有 12 孔之培養盤中，內含 RPMI-1640 培養液中，及 10%

胎牛血清，及1% penicillin- streptomycin (10,000 U/ml penicillin and 10 mg/ml

streptomycin)、1% glutamine。每孔分別放入欲測之藥品，藥品濃度最終濃度分別為 0 M、0.1μM、1μM、10μM 和 100μM，以 DMSO 為溶煤，每個藥品濃度皆有 3 孔 分別同時進行試驗，以藥品濃度為0 M 當對照組，在室溫 37 ℃，5% CO2 and 95%

空氣下生長24 小時，然後以流式細胞儀分析不同濃度的藥品造成細胞凋亡的細胞百 分比之表現量。

4. 測量方法：PI 染色法，利用利用碘化丙啶(Propidium iodide, PI)對完整細胞膜無法穿 透，而能穿透細胞凋亡中或死亡之細胞膜，使細胞核之 DNA 染色，由流式細胞儀檢 測每個細胞之螢光有無而判斷細胞有無發生細胞凋亡。

5. 實驗結果：

表 2. 1 化合物 1、2、3、4、5、10 對 WEHI-3 cells 的細胞毒性影響

Ps. IC50計算方法：把各濃度(0.1、1、10、100μM)及其存活細胞百分比各取對數值(log 10)後，

以Excel 作圖並作線性迴歸直線圖，並由 Excel 作圖所得公式，換算 y = log 1050 = 0.169897 時之X 軸數值，然後再把 X 軸數值反對數，即可得 IC50之濃度。[取對數原因是因濃度差皆 以10 倍方式遞增(0.1、1、10、100μM)，在取對數後其數值變為(-1、0、1、2)呈現等差，在 Excel 作圖才能得到近似直線圖，如此線性迴歸才能得線性方程式。或把各濃度(0.1、1、10、

100μM)及其存活細胞百分比，用 Excel 作圖並作線性迴歸直線圖(趨勢線格式以對數作圖，

並點取圖上顯示公式及顯示R-squared 值。兩種方式換算所得IC50，選取R-squared 值較接近 1 者。

表 2. 2 化合物 1、2、3、4、5、10 的結構及 WEHI-3 cells 細胞毒性 IC50分析表

表 2. 3 化合物 11、19、43、44、49、58、78、79、80、81、83 對 WEHI-3 cells 的細

19 HAJ01009 0.1μM 88.3 ± 32.6 0.553μM

1.0μM 39.9 ± 6.7

44 HAJ03002 0.1μM 65.5 ± 16.2 0.571μM

1.0μM 71.0 ± 27.6

10.0μM 23.1 ± 0.6

100.0μM 1.0 ± 0.0

49 HAJ03007 0.1μM 44.5 ± 10.9 0.251μM

1.0μM 33.5 ± 12.4

78 JOT01005 0.1μM 44.5 ± 12.9 0.259μM

1.0μM 29.2 ± 4.6

80 JOT01007 0.1μM 79.5 ± 30.9 0.461μM

1.0μM 36.3 ± 6.8

表 2. 4 化合物 11、19、43、44、49、58、78、79、80、81、83 的結構及 WEHI-3 cells

1. 化合物11為化合物1接上無取代基之Benzyl group，化合物11活性增加(比較1μM 活性 18：2.4)，但接上有m-fluoro取代基之Benzyl group，活性降低。

2. 化合物3 (其IC50為大於10μM)，接上 para-OCH3 之 Benzyl group，活性增加很多(比較

表 2. 5 化合物 1、152 和 157 的結構及 WEHI-3 cells 細胞毒性 IC50分析表

2. 化合物152和化合物157差異在後者有3methyl benzylation，由實驗數據 顯示benzylation後，細胞毒性增強不多。

表 2. 6 化合物152、160、162、163、164、167對WEHI-3 cells 的細胞毒性影響 化合物編號 化合物代號 濃度 存活細胞百分比 推算 IC50

157 HAJ01103 0.1μM 54.2 ± 11.0 ^0.151μM 1.0μM 39.7 ± 10.0

10.0μM 0.6 ± 0.3 100.0μM 1.8 ± 0.0

160 HAJ01106 1.0μM 2.5 ± 0.1 ^{< 1μM} 10.0μM 0.75 ± 0.1

162 HAJ01108 0.1μM 271.1 ± 35.0 4.892μM 1.0μM 94.9 ± 7.4

10.0μM 10.8 ± 5.3 100.0μM 0.2 ± 0.0

163 HAJ01109 0.1μM 118.3 ± 49.0 10.239μM 1.0μM 97.7 ± 32.0

10.0μM 55.8 ± 1.9 100.0μM 5.7 ± 0.1

164 HAJ01110 0.1μM 341.1 ± 83.0 ^{> 100μM} 1.0μM 230.2 ± 12.0

10.0μM 188 ± 11.0 100.0μM 67.8 ± 0.9

167 HAJ01116 0.1μM 232.3 ± 76.0 13.375μM 1.0μM 103 ± 48.0

10.0μM 62.7 ± 2.9 100.0μM 3.2 ± 0.1

Ps. 存活細胞百分比計算方法：以對照組之實驗數值為 100%存活，以實驗組實驗所得之數據換 算相對於對照組為 100%細胞存活率，計算後所得之數據即為實驗組之細胞存活百分比。

Ps. IC₅₀計算方法：比照 表 2. 1 之計算法。

表 2. 7 化合物 157、160、162、163、164、167 的結構及對 WEHI-3 cells 細胞 毒性 IC₅₀分析表

編號 代號 R3 R4 R5 R6 R7 IC50

157 HAJ01103 OCH3 H H CH3 H 0.151μM 160 HAJ01106 OCH3 H H Cl H <1μM 162 HAJ01108 OCH3 H F H H 4.892μM 163 HAJ01109 OCH3 H H F H 10.239μM 164 HAJ01110 OCH3 H H H F >100μM 167 HAJ01116 OCH3 H H H OCH3 13.375μM

N O

O O

H

CO

CH

R

R

R

討論：1. 環化之化合物，benzyl group上取代基時，ortho-位置F較有活性，para-位置 活性降低很多。

2. 環化之化合物，benzyl group上meta-取代基時，以0.1μM比較，活性比較：Cl > CH3

> F 取代。

3. 環化之化合物，benzyl group上para-取代基時，活性比較：OCH3 > F 取代。

表 2. 8 化合物 172、176、177、180 對 WEHI-3 cells 的細胞毒性影響

貳、化合物 80 誘導人類子宮頸鱗狀上皮癌細胞(Human cervical epidermoid