第四章 材料與方法
4.2 試驗毒物
4.3.1 實驗前準備
本實驗使用之馴養水為參考中華民國環檢所和 OECD 使用之稀釋水，
配置方法如下：
將四種試藥級試劑依比例配置(表 4.3.1.1)，等試藥完全溶解後，劇烈 曝氣至少 8 小時，其硬度需落在 160~180 mg/L(as CaCO3)間，室溫下避光 保存不宜超過 14 天。除了這四種試劑以外，還參照 OECD 的標準方法，
添加維生素，先將兩種維生素(B1、B12)依比例配成 1L 的儲備溶液(表 4.3.1.2)，
此儲備液必須保存在冷凍情況下。
表 4.3.1.1 稀釋水成分
添加試劑(mg/L)
最終 水質 NaHCO3 MgSO4‧7H2O KCl CaSO4‧2H2O 硬度 高硬度
稀釋水 192.0 246.0 8.0 120.0 160-180
表 4.3.1.2 維生素儲備液 Combined vitamin stock(1L)
添加維生素(mg/L)
Thiamine hydrochloride(B1) 750 Cyanocobalamine(B12) 10
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先用 500ml 稀釋水將魚錠片飼料泡軟，再把乾酵母粉和草葉粉一起加 入均質機，高速攪打 5 分鐘後，冷藏靜置一小時，再取上層液 300ml，方 裝後冷凍保存。其解凍後可冷藏保存 7 天。
除了飼料以外，還搭配月芽藻餵食，大約培養一個禮拜後計算月芽藻 濃度，接著離心將上層培養液去除，再以馴養水重新調整濃度為3 × 07個 /ml。餵食量約 1.5ml/L 馴養水。
4. 小於 24 小時實齡之試驗水蚤製備
開始試驗前 24 小時，自馴養燒杯內以玻璃管，吸取成熟母水蚤放入 內盛稀釋水之 1L 燒杯。飼養溫度為 25 ± 2℃，光照時間維持在每天 16 ± 1 小時。24 小時後再將成熟母水蚤從燒杯內吸出，這樣即可獲得毒性試驗所 需之時齡不超過 24 小時之水蚤。
5. 實驗前，將 50ml 小燒杯放入震盪器，用 RO 水清洗，之後再用稀釋水 潤過一次。
6. 配製當次實驗所需毒化物的儲備液。
4.3.2 48 小時急毒性試驗流程
1. 使用< 24 小時實齡的幼蚤，實驗前 2 小時餵食幼蚤。
2. 將稀釋水倒入少許至 50ml 小燒杯中，再用玻璃管和吸球從 1L 燒杯中 吸取小水蚤至小燒杯中。一個燒杯要放 5 隻幼蚤，一個濃度有 4 重複，
所以一組實驗(5 個濃度+空白)共需要 120 隻幼蚤。
3. 將毒化物依各個濃度分別添加至有水蚤的小燒杯中，再以稀釋水定量
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到 50ml，定量完後用石臘膜(paraffin)將杯口封住以減少毒化物揮發影 響實驗。
4. 把封完膜的小燒杯亂數擺放進恆溫水槽中。溫度為 25 ± 2℃，以定時 開關器控制光暗比為 16 : 8 (light : dark)。實驗期間(48 小時內)不餵食。
5. 分析其當次實驗使用的稀釋水、最高濃度、最低濃度的基本水質(pH、
溶氧、導電度)。
6. 48 小時後，計算小燒杯內水蚤的存活數量，並分析其空白組、最高濃 度和最低濃度的基本水質(pH、溶氧、導電度)。
4.3.3 21 天慢毒性試驗流程
1. 使用< 24 小時實齡的幼蚤，實驗前不餵食。
2. 將稀釋水倒入少許至 25ml 小燒杯中，再用玻璃管和吸球從 1L 燒杯中 吸取幼蚤至小燒杯中。一個燒杯放 1 隻幼蚤，一個濃度有 10 重複，
所以一組實驗(5 個濃度+空白)共需要 60 隻幼蚤。
3. 將毒化物依各個濃度分別添加至有水蚤的燒杯中，再以稀釋水定量到 100ml，定量完後用石臘膜(paraffin)將杯口封住以減少毒化物揮發影響 實驗。
4. 把封完膜的小燒杯亂數擺放進恆溫水槽中。溫度為 25 ± 2℃，以定時 開關器控制光暗比為 16 : 8 (light : dark)。實驗期間，每天都要更換試 驗溶液，且要餵食。
5. 分析每天更換後使用的稀釋水、最高濃度、最低濃度的基本水質(pH、
溶氧、導電度)。
6. 每天要計算存活率和生殖率，且要將新生小水蚤從燒杯內移出。
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