第五章 結果與討論
5.2 混合毒性試驗結果
再看到圖 5.1.8~圖 5.1.11 的結果，實驗開始後大約第 6~11 天便出現 子代，而後隨著試驗時間增長而增多，這種情形在 control 組和較低的濃度 組更容易看出。平均而言，依然是 Aniline 開始產生子代的時間比較晚，
從此處也可看出 Aniline 對水蚤具有較強的慢毒性危害。
5.2 混合毒性試驗結果
本研究的急毒性混合試驗是利用毒性單位(Toxic unit，TU)之 95%信賴 區間(Confidence interval，CI)來作判別，當 95% CI 小於 1 時，為協同作用 (Synergism)；反過來說，當 95% CI 大於 1 時，則為拮抗作用(Antagonism)；
若 95% CI 恰好包含 1 時，則判別為相加作用(Simple addition)。
文獻回顧曾提到說，當毒性物質之作用機制不相同時，其混合毒性試 驗結果主要以毒性減弱為主。但依 Chen & Yeh(1996)提出之觀點來看，當 兩毒性物質的劑量反應曲線之斜率甚小時，容易呈現協同作用；反之，若 兩毒性物質之中有一個的劑量反應曲線之斜率甚大時，則易產生拮抗作用。
因此本研究根據 Chen & Yeh 所提出的觀點，利用單一毒性試驗所得之劑量 -反應曲線的斜率去探討此三種不同作用機制毒化物的混合毒性效應，並利 用混合預測模式來預測這三種毒性物質之兩兩混合效應。
實驗首先以毒性單位比 1：1 作混合毒性試驗。表 5.2.1 為急毒性混合 試驗的結果，並和預測之毒性結果做比較，去探討實驗結果和文獻是否有 相符合的地方。圖 5.2.1~5.2.3 為劑量-反應曲線圖。
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[ ]：毒性混合作用；S: synergism；+: simple addition；A: antagonism a：實驗值之 EC50 值(TU)
比對本研究的結果可以發現，只有 Aniline 和 Malathion 的急毒性混合結果 為拮抗作用，但卻和 RA model 所預測的結果不符。另外一個大斜率+小斜 率的組合為 Chloroacetonitrile + Aniline，由於其 95%CI 過大，造成預測結 果呈現簡單相加作用的情況，但其實協同作用亦佔據很大部分，故此兩種 毒化物若同時存在，會比預期上還具有危害性。而在本研究中，只有
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Chloroacetonitrile + Malathion 的混合毒性試驗皆為大斜率的毒化物，為相 加作用。
圖 5.2.1 Chloroacetonitrile & Aniline 之 48hr 混合毒性反應劑量曲線
圖 5.2.2 Chloroacetonitrile & Malathion 之 48hr 混合毒性反應劑量曲線
0.00
0.01 0.10 1.00 10.00 100.00
Inhibi ti on R ate
Toxic unit (TU) Response base on 48-hr data
0.00
0.10 1.00 10.00 100.00
Inhibi ti on R ate
Toxic unit (TU)
Response base on 48-hr data
Y=7.08+3.39 logZY= 4.87+2.01 logZ
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0.10 1.00 10.00 100.00
Inhibi ti on R ate
Toxic unit (TU) Response base on 48-hr data
0
Dead number
Toxic unit (TU)
Aniline+Malathion
Cloroacetonitrile+Aniline
Chloroacetonitrile+Malathion Y=3.83+2.1 logZ
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由此可看出，不管是 control 組還是濃度組，其 replicates 間的數據變異度 過大，推測原因可能為慢毒性的試驗時間較長(21 天)，且試驗生物本身也 容易受到周遭環境影響造成健康度不一致，這些變動因子都可能是使數據 再現性不佳的原因。由表 5.2.2 慢毒性之混合慢毒性結果，若環境中同時 存在著 Chloroacetonitrile 和 Malathion，則可能在極低的暴露濃度下，甚至 是觀察不到危害的濃度下，便會對水體環境生物造成破壞及影響。
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圖 5.2.5 Chloroacetonitrile & Aniline 之混合慢毒性數據計算- NOEC & LOEC
圖 5.2.6 Chloroacetonitrile & Malathion 之混合慢毒性數據計算- NOEC & LOEC
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圖 5.2.7 Aniline & Malathion 之混合慢毒性數據計算- NOEC & LOEC
表 5.2.3 急慢毒性之混合毒性作用
Acute toxicity Chronic toxicity Chloroacetonitrile
+ Aniline
Simple addition [+]
Simple addition [+]
Chloroacetonitrile +
Malathion
Simple sddition [+]
Synergism [S]
Aniline + Malathion
Antagonism [A]
Antagonism [A]
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表 5.2.3 為混合急慢毒性作用比較，除了 Chloroacetonitril + Malathion 這組的作用不相同外，其餘兩組在兩種毒性試驗下所呈現的毒性作用為相 似的。
由表 5.2.4 可觀察到，Chloroacetonitrile 和 Malathio 這組的最高兩個 TU 均無母蚤存活亦無子代數，也可以對應到上述所提到的結果。而在總 出生子代數的部分可以發現，除了母蚤全數死亡的 TU 以外，其餘的總出 生子代數在 TU 值間或 control 組間並無明顯的變化。
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表 5.2.4 Daphnia magna 14days 和 21days 慢毒性混合試驗比較 Chemicals TU Survival(%) Total neonates
14-days 21-days 14-days 21-days
Chloroacetonitrile
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表 5.2.4(續) Daphnia magna 14days 和 21days 慢毒性混合試驗比較 Chemicals TU Survival(%) Total neonates
14-days 21-days 14-days 21-days
Aniline
圖 5.2.8 Chloroacetonitrile+Aniline 21days 慢毒性混合試驗積累性出生子 代數
Cumulative number of neonates
Experiment time (days)
control Chloroacetonitrile + Aniline
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圖 5.2.9 Chloroacetonitrile+Malathion 21days 慢毒性混合試驗積累性出生 子代數
Cumulative number of neonates
Experiment time (days)
control
Cumulative number of neonates
Experiment time (days)
control
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Toxic unit(TU)
Chloroacetonitrile+Aniline
Chloroacetonitrile+Malthion
Aniline+Malathion
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Proportional response relative to controls
Toxic unit(TU)
Chloroacetonitrile+Aniline
Average offspring per female
control
/：no reproduction
/
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圖 5.2.14 21days 混合毒性反應曲線-平均出生子代天數
5.3 Isobologram
本實驗亦利用 isobologram 來描述混合毒性效應，主要是藉由不同的 毒性比例來進行毒性物質混合，以求得其完整的混合毒性結果，並觀察分 析 是 否 有 ” 非 交 互 作 用 “ 以 外 的 情 形 產 生 。 挑 選 的 試 驗 組 別 分 別 為 Chloroacetonitrile+Anilin、Chloroacetonitrile+Malathion 及 Aniline+Malathion 之 48hr 急毒性試驗，下圖 5.3.1~5.3.3 分別為 isobologram 的分析結果。
/：no reproduction
/ / /
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圖 5.3.1 Chloroacetonitrile + Aniline 之 Isobologram 分析圖
圖 5.3.2 Chloroacetonitrile + Malathion 之 Isobologram 分析圖
0
T oxic Units of Aniline
Toxic Units of Chloroacetonitrile
Isobologram
T oxic Units of Malathion
Toxic Units of Chloroacetonitrile
NA
NA CA
Isobologram
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圖 5.3.3 Aniline + Malathion 之 Isobologram 分析圖
可以看到在圖 5.3.2，即 Chloroacetonitrile + Malathion，有部分落在代 表非交互作用的虛線區塊以外，而在圖 5.3.3，也就是 Aniline + Malathion 的組別，幾乎全部都落在虛線區塊以外，由此可以判定在這兩組的混合試 驗中，可能存在著交互作用的毒性效應，才會使得 isobologram 的圖中有 落於虛線外的點。另外一組 Chloroacetonitrile + Aniline 的 isobologram 圖，
其點皆落在 CA(Concentration Addition)作用的虛線下方，呈現出協同的毒 性效應，推測可能是由於非交互作用即交互作用皆存在於這兩種毒化物之
0 0.20.40.60.8 1 1.21.41.61.8 2 2.22.4
T oxic Units of Malathion
Toxic Units of Aniline
NA
NA CA
Isobologram
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