第三章 實驗材料及研究方法
第一節 實驗材料
一、藥材
本實驗所使用之中藥材係購自台中欣隆藥材行:
炙甘草為豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.的乾燥根及根莖。
乾薑為薑科植物薑 Zingiber officinalis Rosc. 的乾燥根莖。
附子為毛茛科植物烏頭 Aconitum carmichaeli Debx.的子根加工品。
二、藥品及試劑
甘草酸(glycyrrhizic acid) TCI Chemical Co.
薑辣素(6-gingerol) WAKO Chemical Co.
羥苯丙酯(Propyl paraben) Sigma(St.Louis, MO, U.S.A.) 磷酸(Phosphoric acid) Merck Co.
甲醇(Methanol) Merck Co.
氰甲烷(Acetonitrile) Merck Co.
鹽酸 (Hydrochloric acid) Merck Co.
氫氧化鈉(Sodium hydroxide) 德國 R.D.H. Co.
磷酸二氫鉀(Potassium dihydrogen phosphate) Merck Co.
＊ 使用於高效液相層析儀之試劑均為HPLC 級
＊ 使用於高效液相層析儀之水均經Millipore 公司之 Milli-RO60 製造之純水，再經 Millipore 0.45μm 過濾膜過濾
三、儀器及材料
1.高效液相層析儀之裝備
幫浦(Pump)： Jasco Model PU-980
偵測器(Detector)： Jasco Model UV-970 Intelligent UV/VIS 積分儀(Integrator)： Scientific Information Service
Corporation Integrator 自動取樣機(Auto Sampler)：
Jasco Model AS-950
印表機(Printer)： Heweltt Packard Deskjet 695C 層析管(Column)： Merck Lichrospher 100 RP-18e 保護管柱(Pre-column)： Merck Lichrocart 4-4 guard column Induction Motor：41K25RGK-A2 Shang Yang Motor（Taiwan）
Hardness Tester：AE-30 capacity 30Kg model Aikoh（Taiwan）
Moisture Determination Balance：FD-600 Kett（Japan）
Friabilator：40J10GA-A Oriental（Japan）
Dissolution Tester：DT-610 Jasco（Japan）
Oven Dryer：KS-21AC Kwang Shan（Taiwan）
Thickness Tester：PC-440 Teclock（Japan）
Disintegration Tester：SK30202 新光精機公司（Taiwan）
振盪過篩機：AS200 digit Retsch（Japan）
2.實驗室裝備
電子天平： Sartorius Type 1801
減壓抽氣機： Eyela, Aspirator A-2S, Tokyo, Rikak Co.
微量移液管(Micropipette)：
Socorex Transferpette： l - 10 µl 20 - 200 µl
100 - 1000
µl
試管振盪器： Maxi Mix II Thermolyne Type 37600 Mixer 高速離心機： Hettich Zentrifugen D-7200 Tuttlingen,
Germany (5000 rpm)
酸鹼測定儀(pH meter)： Suntex Microprocessor pH meter Model-2200 純水製造裝置： Operting and Maintenance manual For RiOsTM and ElixTM Water purification
system, Millipore Co. Operting and Maintenance manual Milli-Q, Millipore Co.
超音波振盪器： BRANSON 5510, BRANSON ULTRASONIC Co. , USA 過濾膜： Millipore Type HV, 0.45µm, Millipore Co.
四、溶液製備
1. 薑辣素及甘草酸的標準溶液(6-Gingerol and Glycyrrhizic acid stock standard solution)
精稱薑辣素及甘草酸標準品各10.0 mg 分別置入一個 20 ml 的容 量瓶中，添加甲醇至刻度，即得濃度為0.5 mg/ml 的薑辣素及甘草酸 的標準溶液。使用時再以甲醇稀釋成所需濃度之標準溶液。
2.內部標準溶液(internal standard solution)
精稱羥苯丙酯(Propylparaben) 50 mg 置於 100 ml 定量瓶中，先加 入適量甲醇(Methanol )使之溶解，再加入甲醇至刻度，可得濃度為 500 µg/ml 對羥苯丙酯儲備液；取 1.0 ml 之儲備液置於 10 ml 容量瓶，加 入甲醇至刻度並混合均勻，即得濃度為50 µg/ml 的內部標準溶液。
3.人工胃液、人工腸液之配製：
人工胃液：量取濃鹽酸21ml 加水稀釋至 3000ml，經標化為 1N HCL，作為溶離試驗用之人工胃液（pH1.2）。（不加pepsin）。
人工腸液：量取磷酸氫鉀20.5 克，加 1N NaOH 67.2 ml，再 加水稀釋至 3000ml，經標化為 pH6.8，作為溶離試驗用之人 工腸液。
4.四逆湯濃縮液之製備：
依四逆湯方中各藥材用量比例 4：3：4，秤取飲片炙甘草 400g、
乾薑 300g、炮附子 400g，將藥材放入二重鍋中加入 6 倍水量，煮 沸1 小時，收集濾液，藥渣再加入 6 倍水量，煮沸 1 小時，收集濾 液。合併二次濾液，經減壓濃縮成流浸膏狀備用。
操作流程如下：
四逆湯：炙甘草400g、乾薑 300g、炮附子 400g（4：3：4）
加入 6 倍水量煎煮 1 小時
濾液 藥渣
加入 6 倍水量煎煮 1 小時
濾液 藥渣
合併
濾液 沉澱
減壓濃縮
流浸膏
冷凍乾燥
加入賦型劑 製錠