3-1 實驗材料
實驗中所使用的藥品及溶劑名稱、化學式、廠牌、等級均列於表 3-1。實驗過程中所使用的二次水，其電阻值均大於 17M-cm 歐姆以 上。
表 3-1 實驗使用藥品及溶劑
名稱 化學式 廠牌 等級
L-Ascorbic acid C6H8O6 SIGMA 99％
L-Ascorbic acid phosphate
magnesium salt n-hydrate C6H7MgO9P Wako 99％
Ascorbic acid 2-glucoside C12H18O11 Hatashibara 99％
3-O Ethyl ascorbic acid C8H12O6 Spec-Chem Ind 99％
Kojic acid C6H6O4 Alfa Aesar 99％
Arbutin C17H16O7 TCI 97％
Hydroquinone C6H6O2 SIGMA 99％
Sodium Hydroxide NaOH 聯合化工試藥 95％
Potassium Phosphate
monobasic KH2PO4 KOJIMA 試藥級
Potassium hydrogen phosphate K2HPO4 Merck 試藥級
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表 3-1 實驗使用藥品及溶劑(續)
名稱 化學式 廠牌 等級
Phosphoric acid H3PO4 J.T. Baker 85-87％
Citric acid monohydrate HOC(COOH)(CH2COOH)2
H2O SIGMA
≥
98％Butylammanium hydroxide 40％ w/w aq.(TBAH)
C16H37NO Alfa Aesar
Methanol CH3OH J.T. Baker HPLC 級
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3-2 儀器設備
實驗中所使用儀器及管柱名稱、廠牌、型號均列於表 3-2。
表 3-2 實驗使用儀器及管柱
名稱 廠牌 型號
高效能液相層析幫浦 HITACHI L-7100
高效能液相層析儀管柱 Agilent HC-C18
紫外線-可見光偵測器 UV-Vis HITACHI L-7420
紫外光-可見光分光光譜儀 HITACHI U-2900
pH 計 EUTECH pH510
超音波震盪器 BRANSON3210 Spire Mixer5100
四位數精密分析天秤 Precisa XS225A
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3-3 研究方法
3-3.1 波長選擇
分別取適量維生素 C、維生素 C 磷酸鎂鹽、維生素 C 醣苷、
3-氧-乙基維生素 C、熊果素、對苯二酚、麴酸標準品，分別以二次去 離子水配製成 1000μg/ml 的儲備溶液再稀釋成 20μg/ml 溶液，置於兩 面透光石英槽中利用紫外光/可見光光譜儀進行掃描。波長掃描設定 範圍為 200~400nm 之間。
3-3.2 離子對試劑濃度的選擇
HPLC 條件為移動相 A 相:0.05MKH2PO4 (pH2.5)緩衝溶液；B 相:
甲醇，靜相為 Agilent HC-C18 , 250×4.6mm,5μm。偵測波長為 264nm，
移動相流速 1ml/min，樣品注射量 20μl。
配製七種美白劑 1000μg/ml 的儲備溶液，分別取等量各儲備溶液 以二次去離子水稀釋成 50μg/ml 測試溶液。實驗中使用離子對試劑為 Tetrabutylamonium hydroxide (TBAH)，將 TBAH 配製於 A 相緩衝溶 液中，其濃度各分別為 2、5、10、15mM，經由上述 HPLC 條件測試，
觀察滯留時間變化及解析度，並選擇最適當離子對試劑濃度來進行實 驗。
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3-3.3
探討不同有機修飾劑比例配製七種美白劑 1000μg/ml 的儲備溶液，分別取等量各儲備溶液 以二次去離子水稀釋成 50μg/ml 溶液，由 3.3-2 中所述 HPLC 條件進 行實驗，將移動相 B 相中有機修飾劑-甲醇調整不同比例 2、3、4、5、
6％，觀察滯留時間變化及解析度，並選擇最佳有機修飾劑比例來進 行實驗。
3-3.4 探討不同緩衝溶液 pH 值
取七種美白劑 1000μg/ml 的儲備溶液，分別取等量各儲備溶 液以二次去離子水稀釋成 100μg/ml 溶液，由 3.3-2 中所述 HPLC 條件 進行實驗，將移動相 A 相調整不同 pH 值，緩衝溶液配製如下:
(1) pH 2.5
取 1.7g 的磷酸氫二鉀用二次去離子水溶解，使用磷酸將 pH 值調 整至 2.5 再加入二次去離子定量至 250ml。
(2) pH 5
取 5.25g 的檸檬酸用二次去離子水溶解，使用 0.1M 氫氧化鈉將 pH 值調整至 5 再加入二次去離子定量至 250ml。
(3) pH 7
秤取 0.218g 的磷酸氫二鉀與 0.170g 的磷酸二氫鉀，加入二次去
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離子水溶解，使用 0.1M 氫氧化鈉將 pH 值調整至 7 再加入二次去離 子水定量至 250ml。
分別利用上述緩衝溶液添配製移動相中，觀察滯留時間變化，並 選擇最適當 pH 值緩衝溶液來進行實驗。
3-4 標準品溶液及檢量線配製
精秤維生素 C、維生素 C 磷酸鎂鹽、維生素 C 醣苷、3-氧-乙基維生素 C 、熊果素、對苯二酚、麴酸，分別以二次去離子水配 製成 10000μg/ml 最高儲備溶液，再以二次去離子水稀釋配製成不同 濃度點 5、10、20、50、100μg/ml 做為檢量線。
3-5 自製、市售樣品前處理及添加方法
(a)自製、市售樣品前處理
取 0.1 克自製樣品放入 50ml 定量瓶，市售樣品 1 放入 25ml 定量 瓶，樣品 2 放入 5ml 定量瓶中，樣品 3 放入 50ml 定量瓶中，樣品 4 放入 100ml 定量瓶中，加入二次去離子水定量至刻度線，超音波震盪 後再使用 0.45μl Nylon 濾膜過濾即可測定。表 3-3 為本次實驗所檢測 市售樣品。
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(b)樣品添加方法
分別各取 0.1 克自製樣品及市售樣品，放入不同體積定量瓶中，
添加已測得濃度溶液，此溶液從各美白劑最高儲備溶液取得，加入二 次去離子水定量至刻度線，超音波震盪後再使用 0.45μl Nylon 濾膜過 濾即可上機。回收率 100±10％為可接受範圍。
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表 3-3 市售樣品
樣品編號 產品成分表中標示美白劑 標示含量(％) 劑型
01
熊果素 (AR) ---
乳液 維生素 C 磷酸鎂鹽 (MAP) ---
02 維生素 C 醣苷(AA2G) --- 面膜液
03
熊果素 (AR) 6％
精華液 3-氧-乙基維生素 C (3-O-EAA) ---
04 維生素 C (AA) 5％ 精華乳
樣品來源:開架式產品
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Caprylic/Capric Triglyceride 1.0
Squlane 1.0
Minernal oil 1.0
Dimethicone 1.0
GermabenⅡ 0.6
BHT 0.3
B 相
Vitamin C 0.5
Ascorbyl Glucoside 0.5
Magnesium ascorbyl phosphate 0.5
3-O-Ethyl Ascorbic Acid 0.5
kojic acid 0.1
Arbutin 0.5
Hydroquinone 0.5
Xanthan Gum 0.3
Distilled Water to 100
42 metahisulfite 至完全溶解。(2)分別稱取 A％及 B％成分(A 相需先預溶 至透明) ，用攪拌器攪拌，再把 B％成分加入 A％中，攪拌數分鐘，
Ascorbyl Glucoside 1
Magnesium ascorbyl phosphate 1
3-O-Ethyl Ascorbic Acid 1
kojic acid 1
Arbutin 1
Hydroquinone 1
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3-7 精密度與準確度
為評估建立分析方法同日分析、異日分析之精密度與準確度，取 適量維生素 C、維生素 C 磷酸鎂鹽、維生素 C 醣苷、3-氧-乙基維生 素 C、熊果素、對苯二酚、麴酸，分別以二次去離子水配製成 1000μg/ml 最高儲備溶液，再以二次去離子水稀釋配製成不同濃度點 5、10、20、
50、100μg/ml。在將上述所配置不同濃度之標準品，各取 20μl 的標 準溶液，由 HPLC/UV 分析 ( n = 3 )。
3-8 偵測極限(LOD)及定量極限(LOQ)
秤取維生素 C、維生素 C 磷酸鎂鹽、維生素 C 醣苷、3-氧-乙基 維生素 C 、熊果素、對苯二酚、麴酸，分別以二次去離子水配製成 1000μg/ml 最高儲備溶液，再以二次去離子水稀釋配製成 100μg/ml 中間儲備溶液，配製成 0.5、1、2、5、10、20μg/ml 濃度範圍建立檢 量線，在取 0.5μg/ml、1μg/ml 及 2μg/ml 濃度點各測定七次，求出各 美白劑面積平均標準偏差值(SD)帶回檢量線方程式。得知一個濃度自 行配製由 HPLC 測定為偵測極限(LOD)；定量極限(LOQ)約為偵測極 限 3.3 倍。
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