實驗結果

4-1. 切片染色

級抗體換成磁性試劑，證明了在免疫染色下看到的染色結果也在 磁染色中看得到，由於我們的一級抗體是披覆在磁性奈米粒子 上，所以當抗體與抗原結合後，磁粒子也相當於在抗原的位置 上 ， 在 經 由 掃 描 式 超 導 生 物 感 測 儀 (Scanning SQUID Biosusceptometry, SSB)來觀察肝腫瘤切片的整體磁訊號。免疫染 色後的結果在顯微鏡下觀察，但顯微鏡只能看出部分區域的染色 情況，無法將整個切片的結果表現出來，藉由 SSB 我們可以看 到切片整體的磁訊號，實驗結果如圖 4-1-1 至 4-1-6。

圖 4-1-1. 左邊使用 AFP 抗體的免疫染色切片與染色結果 右邊為使用 GPC3 抗體的免疫染色切片與染色結果

100 μ m 100 μ m

100 μ m 100 μ m

圖 4-1-2. 左邊使用 AFP 抗體的磁染色切片、染色結果、SSB 訊號 右邊使用 GPC3 抗體的磁染色切片、染色結果、SSB 訊號

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6.6x10

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6.6x10

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6.6x10

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6.6x10

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6.6x10

100 μ m

100 μ m

圖 4-1-2. 左邊使用 DCP 抗體的磁染色切片、染色結果、SSB 訊號 右邊為未磁染色之切片、顯微鏡下影像、SSB 訊號

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6.6x10 ^-3

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6.6x10 ^-3

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6.6x10 ^-3

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6.6x10 ^-3

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6.6x10 ^-3

4-2. 以癌鼠血清進行 IMR

隨著老鼠種植腫瘤的週數越來越長，可以發現以 AFP 試劑、

GPC3 試劑、DCP 試劑、披覆多重抗體試劑(抗原濃度比 1:1:1)、

混合試劑(體積比 1:1:1)進行檢測，隨著腫瘤成長的時間拉長，檢 測到的 IMR 值也隨著變大，如圖 4-2-1 所示。以單一試劑來看，

AFP 試劑檢測到的 IMR 值相對較高，各週的變化量表現與 GPC3 試劑差不多，但使用 DCP 試劑檢測出的結果幾乎是緩慢成長，

可以推斷出肝癌指標性蛋白，甲型胎兒蛋白(Alpha-fetoprotein, AFP)及磷酯肌醇蛋白聚醣 3 (Glypican–3, GPC3)，隨著腫瘤的成 長，老鼠血液中濃度增加的變化量較明顯，則脫羧機凝血酶原 (Des-gamma-carboxy prothrombin, DCP)，濃度隨時間增加的變化 量較小。相較於單一試劑，混合試劑與披覆多重抗體試劑，在腫 瘤成長至 1 週時，量測得到的磁檢量檢測(IMR)值為 1.11%左右，

比 AFP 試劑的 0.96%和 GPC3 試劑的 0.84%大，磁檢量檢測的雜 訊最大值為 0.6%，混合試劑與披覆多重抗體試劑可以明顯的測 量出磁訊號的衰減，也就是混合試劑和披覆多重抗體試劑在腫瘤 生長前期，提供較明顯的測量結果，這也是我們所希望的目標。

圖 4-2-1. 磁檢量檢測量測不同週數癌鼠血清

混合試劑的比例選擇部分，我們以 AFP 試劑、DCP 試劑、GPC3 試劑做了 4 種不同的體積比例，並且檢驗了種植肝癌腫瘤前的老鼠血 清，種植腫瘤後 5 週的老鼠血清，將後者量測得的 IMR 值減去前者 的 IMR 值，發現以比例 AFP:DCP:GPC3=1:1:1 的差異最大，可以明 顯的鑑別是否罹患癌症，如圖 4-2-2。

種植腫瘤後時間（週）

4-3. 以癌鼠血清進行 ELISA

我們採集 0、1、3、5 週各四隻的老鼠血來檢驗，每隻老鼠的 血清在各週的檢驗樣品皆為二重複，將每隻老鼠的血清測量兩次 後的結果進行平均，然後將平均後的結果做比較，發現平均的數 值不一定會隨著腫瘤的成長而成長，因此我們將四隻老鼠血清在 各週的量測數值進行平均，以各週進行平均來比較血清內抗原的 變化。會發現以 AFP 和 DCP 的 ELISA 結果顯示，隨著腫瘤成長，

量測到的數值也相對較大，但 GPC3 的 ELISA 結果顯示，0 週 到 5 週老鼠血清內的 GPC3 抗原濃度沒有太大差異，如圖 4-3-1。

從實驗數據會發現 ELISA 的靈敏度不高，量測出的結果誤差相 當大，所以只能拿來當作參考用。

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