根據生理學，小腸的推動是藉由蠕動波以 0.5~2 cm/s 的速度向 肛門方向推進，小腸前端較快，在小腸末端較慢。由於蠕動波的力 量微弱，通常不超過 10 cm，因此乳糜在小腸的淨運動速度為每分 鐘 1 cm。即乳糜由噴門到迴盲瓣需要 3~5 小時（李，1991）。在生 物有效性試驗中，如表 2-2 所示，Davls et al.（1992）與 Ruby et al.
（1993）在體外試驗中，於小腸輸送時間上皆以 2 小時作為試驗參 數，但 Ruby et al.（1996）在 PBET 的試驗方法中則改用 4 小時，
即以消化液流經小腸至大腸進口所需的時間做為小腸輸送率。但在 Rodriguze et al.（1999）的 IVG 及 IVG-AB 方法與 Sarkar et al.（2003）
的 IVG-S 及 IVG-AI 方法中，卻縮短至 1 小時，是否顯著影響試驗 結果，尚待確認。
綜合上述體外試驗參數之探討，其生物有效性試驗程序主要係參考 Rodriguze et al.（1999）的二階段 IVG 及 IVG-AB 體外試驗程序，其試驗 程序如下：
（1）IVG 試驗：將待測樣品置於備製好的胃液中，將 pH 調整至 1.8 模 擬胃相，消化 1 小時後收集胃相樣品，再添加豬膽汁及胰酵素，並
圖 2-14：二階段生物有效性 IVG 及 IVG-AB 體外試驗程序（Rodriguez et al.,1999）
以 canning jars(1L)做為 reactor vessels
1.water bath at 37 ℃ 2.利用氬氣維持厭氧狀態 3.隨時監測 pH 值
4.並使用 paddle stirrers 攪拌(100rpm)
再加入豬的膽汁 2.10 g 及胰酵素 0.21 g
備製飽和 NaHCO3溶液 並將胃液 pH 條至 5.5 做為小腸液
將 iron hydroxide 置於 161 ㎝2 8 μm的 nylon membrane filter 並將 nylon membrane filter 紮成茶包狀懸掛於反應槽中
(Intestinal Phase-Absorption)
Intestinal Phase-Absorption 反應 1 小時後，
將茶包置入 250 mL 三角錐瓶中，並加入 0.2 M H2SO4攪拌 1 小時
Gastric Phase 反應 1 小時後，以 Luerlock syringe 收集 40ml 胃液
離心(10000rpm，15min) 以0.45μm濾紙過濾 再以濃 HCl 溶液酸化
ICP-HG 分析重金屬 (Intestinal Phase Digestion)
再加入豬的膽汁 2.10 g 及胰酵素 0.21 g
備製飽和 NaHCO3溶液 並將胃液 pH 值調至 5.5 做為小腸液
Intestinal Phase Digestion 反 應 1 小時後，以 Luerlock syringe 收集 40ml 小腸液 (Gastric Phase)
備製 600 mL 胃液
(0.15 M NaCl & 1 % porcine pepsin)
加入 4 g soils(1/150) 及 200 g dough(2 %)
以濃 HCl 溶液 調整pH 至 1.8
Intestinal Phase-Absorption 反 應結束後，以 Luerlock syringe 收集 40ml 小腸液
IVG IVG-AB
將 pH 調至 5.5 模擬腸相，最後進行消化 1 小時，收集腸相樣品。
（2）IVG-AB 試驗：將待測樣品置於備置好的胃液中，將 pH 調整至 1.8 模擬胃相，消化 1 小時後收集胃相樣品，再加入豬膽汁及胰酵素，
再將 pH 調至 5.5 模擬腸相，並以 iron hydroxide gel 模擬腸相吸收 作用，1 小時後收集腸相樣品。
最後將所有樣品經離心、過濾並酸化後，以 ICP-HG 分析其重金屬濃 度。
雖然上述生物有效性之體外試驗方法之操作參數均詳細考量人體胃 腸環境，但仍有若干缺失：
1. 未建立 surrogate reference material（SRM）之品管基準
2. 未探討使用速度梯度（velocity gradient，簡稱 G，
G P / V
， 單位 1/s，其中 P 為功率，單位 W (N．m/s)；μ為黏度，單位 N．s/m2；V 為反應槽有效容積，單位 m3）模擬胃腸蠕動之可行性 3. 可進一步簡化反應槽設計及厭氧控制方法，以減少操作成本 4. 未進一步利用 RBF 建立風險評估數學模式
爰此，本研究之目的主要以 As 為例，建立適當之 SRM，如 As 可選 用 Na2HAsO4．7H2O 探討其品管基準 （包括 reproducibility, external recovery 及 internal recovery）。其次本研究將修正並簡化 Rodriguez et al.
（1999）之生物有效性試驗程序，期盼能夠建立一套準確評估胃腸生物 有效性體外試驗方法，本研究修改之部分試驗程序與試驗方法將於下一 個章節詳細說明並探討。