以YWp09 、 YWp10 PCR 增 幅 出 包 含 asr 及 其 啟 動 子 區 域 的 片 段 接 入 pRK415質體中，再轉型至大腸桿菌S17-1λpir，利用接合作用送入突變株 中。
生長曲線測試
取隔夜培養的菌液 200 微毫升加至新鮮的 4 毫升 M9、LB 或 LPM 中，
每隔一段時間測OD600的吸光值直到生長趨於靜止生長期。
IPTG誘導RstA或Asr蛋白質的表現
取200微毫升隔夜培養的菌液，加入4毫升新鮮LB或LPM培養液，在37℃
培養2小時後，將IPTG 加入培養液中至濃度為0.5 mM，經37℃培養6小時 後，以2,800 xg離心10分鐘取得菌體，進一步以SDS-PAGE分析並作為蛋白質
純化的來源。
抗生素抗性試驗
隔夜培養的菌液取200微毫升至新鮮4毫升LB中，於37℃培養箱中培養 2~3小時後，加入IPTG至0.5 mM作用3小時後，同時進行SDS-PAGE分析蛋白 質的表現，並且將菌液三重複用棉花棒塗抹於LB盤，待10~20分，將含抗生 素的濾紙錠放於盤中央，放入37℃培養箱中培養12~16小時後觀察抑菌圈大 小。
啟動子活性試驗
抽 取pLacZ15 的 質 體 並 將 目 標 基 因 （ asr ： YWp01 、 YWp02 ； rstB ： YWp27、YWp28）啟動子區域用PCR增幅出來之後切酵素，再與pLacZ15接 合在一起，接著利用轉型作用送入大腸桿菌S17-1λpir。取隔夜培養的菌液 200微毫升至新鮮的4毫升M9、LB或LPM中，置於37℃培養箱至OD600 = 0.7，
取1毫升菌液於1.5毫升的離心管中，用Z buffer（取16.1克 Na2HPO4·7H2O、
4.78克NaH2PO4、0.75克KCl、0.246克MgSO4·7H2O配製成一升且pH為7.0，滅 菌完後使用前加入2.7毫升2-mercaptoentanol）洗兩次菌塊並將細菌刮破後，
加入1毫升的Z buffer使之懸浮，取100微毫升至試管中（已加入35微毫升 chloroform，17微毫升0.1％ SDS，900微毫升Z buffer）使混合均勻，將試管 放入37℃，10分鐘後，加入4毫克/毫升ONPG溶液（加入102.5毫升0.2 M
Na2HPO4·2H2O、22.5毫升0.2 M NaH2PO4·2H2O、一克ONPG，補水至250毫 升）200微毫升使之反應開始，待達作用完成之時間點加入1 M Na2CO3 500微 毫升使之停止反應。測量OD420之吸光值並記錄之 (24)。
酸逆境下菌存活試驗
將隔夜培養的菌液取 200 微毫升至新鮮 pH 7.0 LPM 培養液中，至 OD600=0.6 塗盤，並分兩部分；第一部分，直接給予酸逆境，pH 3.0 作用兩 小時後塗盤，隔夜計數菌落數除以初始反應菌數為存活率；第二部分，先在 弱酸pH 4.6 適應 2 小時後，再給予酸逆境 pH 3.0 作用兩小時，再塗盤，隔夜 培養將酸逆境後塗盤菌數除以初始反應菌數為存活率 (38)。
十二酯硫酸鈉- 聚丙烯醯氨膠體電泳（SDS-PAGE）
首先先將玻璃擦拭乾淨架好之後，迅速倒入Running gel（12.5%）：
deionized water 3.7毫升；Running buffer 1毫升（3 M Tris-HCl，pH 8.0）; 10%
SDS 80微毫升；40%（w/v）acrylamide solution（acrylamide：bis-acrylamide
= 37.5：1）3毫升；TEMED 9微毫升，10% APS 100微毫升）至適當高度，以 酒精輕輕加至電泳膠上方，等待電泳膠凝固後，倒掉上層水並以紙吸乾，再 加入stacking gel（Deionized Water 1.9毫升；Stacking buffer（1.0 M Tris-HCl pH 6.8 ） ， 83 毫 升 ； 10% SDS 33 微 毫 升 ； 40% (w/v) acrylamide solution
（acrylamide：bis-acrylamide = 37.5：1）0.4毫升；TEMED，5微毫升；10%
APS，60微毫升）至溢出，隨即插入樣品梳，凝固之後移去樣品梳，並置於 電泳槽內，倒入 running buffer（35 mM Tris-base，250 mM glycine，0.1％
SDS）待用，將欲分析的蛋白質加入2X loading dye [ 2X SDS gel-loading buffer：100 mM Tris-HCl pH 6.8；4% SDS；20% glycerol；0.2% bromophenol blue（3’,3”,5’,5”-tetrabromophenol Sulfonphtalein）；200 mM dithio-threitol ]，
並於100℃加熱十分鐘後加至電泳膠well中，以100伏特數電泳分析15分鐘 後，再以90伏特電泳2小時，最後由玻璃夾層中取出電泳膠。將經電泳後的 SDS-PAGE切掉stacking-gel後，浸於staining buffer（0.25克Coomassie Brilliant Blue R250；45毫升deionized water；45毫升methanol；10毫升glacial acetic acid）室溫搖晃30分鐘，再浸於Destain buffer（30% methanol；10% acetic acid）中退染至可清楚的看見蛋白質為止。