1. SLIT2 蛋白表達情形與病歷資料相關性
利用免疫組織染色法，分析 92 位 NSCLC 病人的癌組織切片之 SLIT2 蛋白表現，染色代表圖見 Figs. 4A-D。實驗結果顯示：在檢驗
的92 個檢體中，38 人(41.3%) 其癌組織切片之癌細胞的細胞質/細胞 膜呈<40%紅褐色反應，判定為 SLIT2 蛋白無表達或低表達的病人；
另外在病歷資料分析方面，發現 SLIT2 蛋白低表達或不表達的情形，
與 病 人 之 性 別 、 抽 煙 狀 況 、 癌 症 種 類 間 並 無 明 顯 相 關 性 存 在 (P>0.05)，但是值得注意的是，在年齡層面，SLIT2 protein 表現降低 情形通常發生在年輕的病人 (P=0.005)；此外，在癌症分期層面，
SLIT2 protein 表現降低情形則通常發生在癌症晚期的病人 (P=0.003) (Table 6)。
2. SLIT2 mRNA 表達情形與病歷資料相關性
利用RT-PCR 方法，分析 92 位 NSCLC 病人癌組織及其鄰近正常 組織 SLIT2 mRNA 表達情形，引子所夾的區域為 exon 36 與 exon 37，
全長為387 bp，RT-PCR 代表圖見 Fig. 5A。實驗結果顯示：在檢驗中
的92 個檢體中，41 位病人(44.5%) 其癌組織 mRNA 表現比正常細胞 降低一半以上；另外在病歷資料分析方面，發現 SLIT2 mRNA 低表達 或不表達的情形，與病人之年齡、性別、抽煙狀況、癌症種類間並無 明顯相關性存在 (P>0.05)，但是值得注意的是，在癌症分期層面，
SLIT2 mRNA 表現降低情形通常發生在癌症晚期的病人 (P=0.05)
(Table 6)。3. SLIT2 基因啟動子高度甲基化情形與病歷資料相關性
利用設計不同之引子來增量甲基化及沒有甲基化之 DNA，PCR 引子所夾的區域為啟動子－676 至－518 位置，長度為 158 bp，MSP 代表圖見Fig. 6A。在所分析的92 位病人中，58 位 (63%)病人的 SLIT2 基因啟動子有過度甲基化情形，另外在病歷資料分析方面，發現 SLIT2 啟動子高度甲基化情形，與病人之性別、年齡、抽煙狀況、癌症種類、
癌症分期間並無明顯相關性存在 (P>0.05) (Table 6)。
4. SLIT2 mRNA、蛋白表達情形、啟動子甲基化與癌症分期 之相關性
由上述 SLIT2 mRNA、蛋白表達情形與病歷資料相關性之分析結 果顯示，在癌症分期層面，不管是 SLIT2 mRNA 表現降低情形還是 SLIT2 蛋白質表現降低情形都可發現通常發生在癌症晚期的病人
(P<0.05)。因此我們更進一步將癌症分期從原本的 I + II 期定義為癌症 早期病人，III + IV 期定義為癌症晚期病人，改為 I、II、III、IV 期各 自獨立分期，來更精確的檢測 SLIT2 變異情形與癌症分期的相關性，
此外，特地加入肺癌病人是否遠端轉移此一病歷資料，也去檢測它與
SLIT2 變異情形的相關性。統計分析後發現，SLIT2 mRNA 表現降低
情形與 SLIT2 protein 表現降低情形隨著癌症分期的演進，其不表達 或低表達情形有越來越嚴重的趨勢，尤其是 SLIT2 protein 不表達或 低表達情形，從 I 期病人的 27.0% (10/37)、II 期病人的 31.3% (5/16)、III 期病人的 53.1% (17/32)到 IV 期病人的 85.7% (6/7)，達到顯著相關 性 (P=0.01)；此外，值得注意的是，不管是 SLIT2 mRNA 表現降低
情形還是 SLIT2 protein 表現降低情形皆通常發生在有遠端轉移的病 人 (mRNA, P=0.023；protein, P=0.013)，至於 SLIT2 啟動子甲基化情 形與癌症分期與遠端轉移與否並無顯著相關性 (P>0.05) (Table 9)。
5. SLIT2 mRNA、蛋白不表達與啟動子高度甲基化間之相關 性
分析 SLIT2 mRNA、蛋白不表達以及啟動子高度甲基化之相關性
(Fig. 7A)，發現mRNA 有表達/蛋白亦有表達，與 mRNA 低表達/蛋白
亦低表達的病人佔全部之 90.2% (83/92)，二者間達顯著相關性
(P<0.001)，顯示 SLIT2 mRNA 與蛋白表達情形有相當大的一致性；
啟動子甲基化與否和mRNA 表達情形相符合者佔 62.0% (57/92)，且 達顯著相關 (P=0.008)；至於啟動子甲基化與否和蛋白表達情形，其 相符合者佔56.5% (52/92)，僅有邊緣統計顯著相關性 (P=0.076)。
二. 探討台灣地區肺癌病人 ROBO1 基因/蛋白之變異情形
1. ROBO1 蛋白表達情形與病歷資料相關性
利用免疫組織染色法，分析 92 位 NSCLC 病人的癌組織切片之 ROBO1 蛋白表現，染色代表圖見 Figs. 4E-H。實驗結果顯示：在檢
驗的 92 個檢體中，19 人(20.1%) 其癌組織切片之癌細胞的細胞質/細 胞膜呈<40%紅褐色反應，判定為 ROBO1 蛋白無表達或低表達的病
人；另外在病歷資料分析方面，發現 ROBO1 蛋白低表達或不表達的 情形，與病人之性別、抽煙狀況以及癌症分期間並無明顯相關性存在 (P>0.05)；但有趣的是，在年齡層面，發現在年輕的病人中，ROBO1 蛋白質表現降低情形有高於年老病人的趨勢 (P＝0.087)；此外，在癌 症種類層面，可以稍微發現在肺腺癌病人中，ROBO1 蛋白質表現降 低情形有高於鱗狀上皮肺癌病人的趨勢 (P＝0.117) (Table 7)。
2. ROBO1 mRNA 表達情形與病歷資料相關性
利用RT-PCR 方法，分析 92 位 NSCLC 病人癌組織及其鄰近正常 組織 SLIT2 mRNA 表達情形，引子所夾的區域為 exon 1 至 exon 2，
全長為362 bp，RT-PCR 代表圖見Fig. 5B。實驗結果顯示：在檢驗的 92 個檢體中，10 位病人(10.8%) 其癌組織 mRNA 表現比正常細胞降 低一半以上；另外在病歷資料分析方面，發現 ROBO1 mRNA 低表達 或不表達的情形，與病人之年齡、性別、年齡、抽煙狀況、癌症分期 間並無明顯相關性存在 (P>0.05)，但是值得注意的是，在癌症種類層
面，ROBO1 mRNA 表現降低情形通常發生在肺腺癌的病人 (P=0.046) (Table 7)。
3. ROBO1 基因啟動子高度甲基化情形與病歷資料相關性
利用設計不同之引子來增量甲基化及沒有甲基化之 DNA，PCR 引子所夾的區域為exon 1，位置 257 至 503，長度為 246 bp，，MSP 代表圖見Fig. 6B。在所分析的92 位病人中，34 位 (37.0%) 的 ROBO1 基因啟動子有過度甲基化情形，另外在病歷資料分析方面，發現
ROBO1 啟動子高度甲基化情形，與病人之年齡、性別、抽煙狀況間
並無明顯相關性存在 (P>0.05)，但值得注意的是，在癌症種類層面，可以稍微發現在肺腺癌病人中，ROBO1 基因啟動子過度甲基化情形 有高於鱗狀上皮肺癌病人的趨勢 (P＝0.073) (Table 7)。
4. ROBO1 mRNA、蛋白不表達與啟動子高度甲基化間之相 關性
分析 ROBO1 mRNA、蛋白不表達以及啟動子高度甲基化之相關
性 (Fig. 7B)，發現mRNA 有表達/蛋白亦有表達，與 mRNA 低表達/
蛋白亦低表達的病人佔全部之 88.1% (81/92)，二者間達顯著相關性 (P<0.001)，顯示 ROBO1 mRNA 與蛋白表達情形有相當大的一致性；
啟動子甲基化與否和蛋白表達情形相符合者佔72.8% (67/92)，有達到 顯著相關性 (P<0.001)；而啟動子甲基化與否和 mRNA 表達情形相符 合者佔67.4% (62/92)，亦達到顯著相關性 (P=0.022)。
三. 探討台灣地區肺癌病人 SRGAP1 基因/蛋白之變異情形
1. SRGAP1 mRNA 表達情形與病歷資料相關性
利用RT-PCR 方法，分析 92 位 NSCLC 病人癌組織及其鄰近正常 組織 SRGAP1 mRNA 表達情形，引子所夾的區域為 exon 22，全長為 315 bp，RT-PCR 代表圖見 Fig. 5C。實驗結果顯示：在檢驗中的 92 個檢體中，31 位病人(33.7%) 其癌組織 mRNA 表現比正常細胞降低 一半以上；另外在病歷資料分析方面，發現 SRGAP1 mRNA 低表達 或不表達的情形，與病人之年齡、性別、抽煙狀況、癌症種類、癌症 分期間並無明顯相關性存在 (P>0.05) (Table 8)。
2. SRGAP1 基因啟動子高度甲基化情形與病歷資料相關性
利用設計不同之引子來增量甲基化及沒有甲基化之 DNA，PCR 引子所夾的區域為啟動子－813 至－690 位置，長度為 123 bp，MSP 代表圖見Fig. 6C。在所分析的92 位病人中，37 位 (40.2%) 的 SRGAP1 基因啟動子有過度甲基化情形，另外在病歷資料分析方面，發現
SRGAP1 啟動子高度甲基化情形，與病人之年齡、癌症種類、癌症分
期間並無明顯相關性存在 (P>0.05)，但值得注意的是，在性別層面，可以發現在女性族群病人中，SRGAP1 基因啟動子過度甲基化情形有 高於男性族群病人 (P＝0.011)；此外，在抽煙狀況層面，可以發現在
非吸煙族群病人中，SRGAP1 基因啟動子過度甲基化情形有高於吸煙 族群病人 (P＝0.008) (Table 8)。
3. SRGAP1 mRNA 與啟動子高度甲基化間之相關性
分析 SRGAP1 mRNA 與啟動子高度甲基化之相關性 (Fig. 7C)，
啟動子甲基化與否和mRNA 表達情形相符合者佔 63.0% (58/92)，且 達顯著相關 (P=0.041)。
4. SLIT2 、 ROBO1 與 SRGAP1 基因任一表達變異與病歷資料
之相關性
文獻中報導，SLIT2、ROBO1 與 SRGAP1 有直接的交互作用關 係，意即三者屬同一訊息傳導路徑的成員 (21, 22)。因此我們推想，
若是三者間任一者發生變異，可能就會導致整體訊息傳導路徑的失 常，進而影響下游路徑的蛋白，因此特地統計分析 SLIT2、ROBO1 與 SRGAP1 三基因若任一基因蛋白質不表達或低表達就判定為不表 達或低表達之時 (SRGAP1 蛋白表現以 mRNA 計算)，此聯合低表達 率達 63.0% (58/92) (Table 10)；其蛋白質表達情形與病歷資料相關 性，統計結果顯示：三基因之聯合分析，其蛋白質表現降低情形與病 人之性別、抽煙狀況、癌症種類間並無明顯相關性存在 (P>0.05)，
但值得注意的是，在病人年齡層面，可以稍微發現在年輕族群病人 中，三基因聯合分析之蛋白質表現降低情形有高於年長族群病人的趨 勢 (P＝0.059)；此外，在癌症分期層面，可以發現在癌症晚期病人中，
三基因聯合分析之蛋白質表現降低情形有高於癌症早期病人的趨勢 (P＝0.136) (Table 10)。