探討孕婦菸害暴露情形、可丁寧濃度與新生兒出生結果的關係

表二為母親及新生兒CYP2A6 基因多型性與對偶基因之分布，排除 5 對基因型 檢測失敗之母子配對。孕婦CYP2A6*1A、CYP2A6*1B 及 CYP2A6*4C 之對偶基因 頻率分別為 0.36、0.17 和 0.47，若以基因型分佈來看，CYP2A6*1A/1A、1A/1B、

1B/1B、1A/4C、1B/4C 及 4C/4C 之基因型分布為 2.35%、4.71%、0.00%、62.75%、

29.02%及 1.18%，三組中 CYP2A6 基因型的分佈是使用費雪精確型檢定(Fisher's exact test)，不過並無統計上的顯著差異。

新生兒對偶基因CYP2A6*1A、*1B 及*4C 之頻率分別為 0.27、0.13 及 0.60。而 CYP2A6*1A/1A、1A/1B、1B/1B、1A/4C、1B/4C 及 4C/4C 之基因型頻率各為 0.42%、

0.84%、1.27%、52.32%、21.94%及 23.21%。經由費雪精確型檢定，亦不具統計上 之顯著差異。

由於母親及新生兒在各組中CYP2A6*1A/1A、1A/1B、1B/1B 基因型別的人數太 少，因此將原來的六種基因型依其代謝力合併為以下三種型別：(1)至少帶有一個野 生型(CYP2A6*1A)對偶基因者:包括 1A/1A 與 1A/4C 兩種基因多型性；(2)至少帶有 一個變異型 (CYP2A6*1B)對偶基因者: CYP2A6*1B/1B、1A/1B 及 1B/4C 皆歸類屬 於此種基因型；(3)兩條對偶基因皆為整段缺失:CYP2A6 4C/4C 同型合子。其中將 1A/1B 基因型歸類於至少帶有一個變異型對偶基因者裡，是因為有文獻中指出 1A/1B 型代謝尼古丁能力較1A/1A 基因型好⁽¹³⁾。CYP2A6 基因型重新分組後，母親的基因 型分佈整段缺失(del/del)、至少帶有一個野生型對偶基因(≧wild type)和至少帶有一 個變異型對偶基因(≧variant type)分別為 1.18%、65.10%和 33.73%；而新生兒基因 型分佈各為23.21%、52.74%和 24.05%。將孕婦及新生兒依菸害暴露情形分組後，

新生兒各組間基因分佈具有顯著差異(p=0.046)，孕婦則無顯著差異。

比較母親與新生兒之對偶基因頻率及基因分佈的情形是否相同，發現對偶基因頻 率經由卡方檢定具有顯著差異(p=0.0002)；而且不論使用哪一種基因型分組方式，基 因型分布經由費雪精確檢定均具有統計上顯著意義。

(二) 代謝基因 CYP2A6 基因多型性與可丁寧濃度之關係

新生兒臍帶血可丁寧濃度平均為1.89ng/ml，若以 CYP2A6 基因型來分組，發現 帶有*1B 對偶基因者的可丁寧濃度最高為 1.90 ng/ml，其次是帶有*1A 對偶基因、

ng/ml，接近於顯著差異。

為了探討新生兒 CYP2A6 不同基因型與臍帶血可丁寧濃度關係的估計值，除了 使用簡單線性迴歸外，亦使用以下兩個複迴歸模型:(1)調整菸害暴露情形與(2)調整孕 婦年齡、懷孕週數、職業、教育及菸害暴露情形。分析結果發現帶有*1A 對偶基因、

帶有*1B 對偶基因與基準組(4C/4C)比較，其平均可丁寧濃度分別差 0.20 與 0.50 ng/ml，並無統計上顯著差異；調整菸害暴露情形與其他因子後，雖然差異幅度增加，

但依然無統計上的顯著意義(如表三)。

(三) 可丁寧濃度與出生結果之關係

孕婦不論尿液或血液可丁寧濃度皆隨著菸害暴露量增加而有上升的趨勢。血液平 均可丁寧濃度比尿液可丁寧濃度稍低，但各孕期血液及尿液可丁寧濃度以Spearman 等級相關係數檢定，其值皆大於 0.68，隨著孕期的變化相關係數越大。另外，孕婦 生產期血液、尿液可丁寧濃度與新生兒臍帶血可丁寧濃度 Spearman 等級相關係數 分別為0.90 (p<0.01)和 0.84 (p<0.01)。

根據實驗室以前的分析結果⁽⁴⁸⁾發現，第一孕期尿液、血液可丁寧濃度和新生兒 出生體重與身長之間並無顯著的關聯性，而血液可丁寧濃度與頭圍的關聯性相當顯 著。第二孕期尿液、血液可丁寧濃度和新生兒出生體重之間有顯著的關聯性，出生身 長僅與尿液可丁寧濃度具有關聯性，第二孕期可丁寧濃度與頭圍的關聯性並不顯著。

生產期之可丁寧濃度與三種出生結果的關聯性皆不顯著。

(四) 母親菸害暴露的情形與新生兒出生結果之關係

以四個線性迴歸模型分析母親菸害暴露的情形與新生兒出生結果的關聯性，依變 項為新生兒出生結果，自變項為母親菸害暴露情形，依照菸害暴露情形的三個組別來 設立兩個虛擬變項(dummy variable)，以非吸菸組為基準組，迴歸係數(β)為暴露組 新生兒平均出生結果與基準組的差異。四個迴歸模型分別為:(1)模型一:簡單線性迴 歸，探討母親菸害暴露的情形與新生兒出生結果的關係；(2)模型二:調整與新生兒出

生結果有關聯性的可丁寧濃度 (出生體重:調整孕婦第二期血液及尿液可丁寧濃度，

出生身長:調整孕婦第二期尿液可丁寧濃度，出生頭圍:調整孕婦第一期血液可丁寧濃 度)；(3) 模型三:調整孕婦及其新生兒 CYP2A6 基因，(4) 模型四:調整孕婦人口學資 料中具顯著差異之變項年齡、懷孕週數、職業、教育程度與飲酒習慣，以及在模型二 與模型三中統計上具顯著意義(p<0.05)之變項。

表四的結果顯示，簡單線性迴歸中二手菸暴露組比非吸菸組的新生兒平均出生體 重較輕、身長較短且頭圍亦較窄，但皆無統計上的顯著差異。就出生體重及身長來說，

經過不同的模型調整可能的因子後雖然差異有所改變，但依然無統計上的顯著差異。

以出生頭圍而言，模型三中調整了孕婦及其新生兒 CYP2A6 基因後，二手菸暴露組 的新生兒平均出生頭圍顯著的較非吸菸組小 0.66 公分。進一步，在模型四中放入所 有可能的潛在因子後，二手菸暴露組與非吸菸組的新生兒平均出生頭圍差異更大，且 依然具有統計上的顯著差異。另外，吸菸組與非吸菸組新生兒出生結果皆無顯著的差 異。

第三節、新生兒基因型分佈頻率、DNA 損傷程度與出生結果之關係

表五為四種代謝基因之基因型分佈，第一期代謝基因CYP1A1*野生/野生、野生 /變異、變異/變異在全部新生兒中的頻率分別為 53.05%、36.62%及 10.33%。將 CYP1A1*野生/變異與變異/變異合併後，CYP1A1*野生/野生和 CYP1A1*野生/變異、

變異/變異在非吸菸組之新生兒分別為 46.81%及 53.19%，二手菸暴露組各為 58.65%

及41.35%，吸菸組各為 53.33%及 46.67%，經由卡方檢定三組中 CYP1A1 基因型 的分布，並未達到統計上的顯著差異(p=0.249)。

GSTT1 非無效型與無效型的比例分別為 54.46%、45.54%，GSTM1 非無效型 與無效型的頻率各為57.28%、42.72%；比較三組間新生兒 GSTT1 與 GSTM1 基因 型的分布，經由卡方檢定後無統計上的顯著差異。

NAT2 基因型分為快型與慢型(79.41%和 20.59%)，在非吸菸組分別占 80.43%、

19.57%，二手菸組分別為 78.79%、21.21%，吸菸組分別為 76.92%、23.08%，而 三組經由卡方檢定沒有統計上的顯著差異(p=0.936)。

(二) 孕婦菸害暴露的程度與新生兒彗星試驗結果的比較(見表六)

以目視判定方法，母親為非吸菸組的新生兒 DNA 損傷積分最低為 53.96，其次 是吸菸組為58.53，最嚴重的為二手菸組為 69.73。在多樣本比較中，變異數分析與 Kruskal-Wallis Test 兩種檢定都具有統計上的顯著差異(p=0.015 和 p=0.030)。在雙 樣本比較中，只有二手菸暴露組新生兒的DNA 損傷積分顯著高於非吸菸組。

以影像分析方法來說，新生兒DNA 損傷積分的順序由大到小依然是二手菸暴露 組、吸菸組與非吸菸組，平均損傷積分各別為 64.37、62.04 及 53.80，但不論是雙 樣本比較或是多樣本比較，其平均值及中位數都不具統計上的顯著差異。

另一個影像分析的指標「頭部與尾巴拖曳長軸之比值」呈現於表七，頭部與尾巴 拖曳長軸之比值越大代表DNA 受損越嚴重，而非吸菸組、二手菸組與吸菸組平均比 值各為 2.09、1.95 及 3.05，顯示二手菸組新生兒 DNA 損傷比非吸菸組輕，非吸菸 組又比吸菸組輕，與預期的趨勢不符合，但經由變異數分析與 Kruskal-Wallis Test 檢定都不具統計上的顯著意義。

由新生兒彗星試驗「DNA 損傷積分」部分的結果，可以清楚的顯現出母親暴露 於二手菸對新生兒DNA 損傷程度的影響最為嚴重，而且以目視判定方法及影像分析 方法所計算的DNA 損傷積分結果相當一致，這兩種測量方法之間也有不錯的相關性 (Spearman 相關係數=0.82，p-value<0.01)。本文此後的分析一律使用目視判定方法 計算DNA 損傷積分。

(三) 母親菸害暴露程度、新生兒代謝基因與 DNA 損傷的關係

利用線性迴歸分析來探討母親菸害暴露程度與新生兒 DNA 損傷積分的關係(如 表八)。在簡單線性迴歸中，二手菸暴露組的新生兒 DNA 損傷積分顯著的高於未曾吸

菸組的新生兒15.77，吸菸組亦比非吸菸組新生兒高 4.57，但無統計上的顯著意義。

同時調整CYP1A1 、GSTT1、GSTM1 及 NAT2 四個基因後，二手菸暴露組的新生 兒DNA 損傷積分比非吸菸組的新生兒多 16.91(p=0.015)；而吸菸組 DNA 損傷積分 高於非吸菸組新生兒，但依然無統計上的顯著意義。由此結果發現，調整代謝基因後 新生兒 DNA 損傷積分變化不大，且孕婦吸入二手菸比吸菸對新生兒 DNA 造成更嚴 重的損傷。

(四) 新生兒 DNA 損傷出生結果之關係圖【圖一~圖四】

以無母數迴歸的局部平滑估計呈現新生兒DNA 損傷與出生結果之關係，就出生 體重而言，隨著DNA 損傷積分越高，體重有呈現緩降的趨勢，且損傷積分約大於 50 分時，出生體重隨著DNA 損傷積分上升而下降的趨勢更為明顯。就出生身長而言，

出生身長隨著DNA 損傷積分增加而產生的變化波動似乎不多，大概都介於 50~52 公 分間。但是可以發現在損傷積分約為50 時，出生身長微微升高而後才又緩緩的下降。

以出生頭圍和胸圍而言，其結果亦類似。故可根據以上之分析，以DNA 損傷積分 50 及100 的地方做為切點。整體而言，隨著 DNA 損傷程度越高，出生結果較往負向發 展；若僅以DNA 損傷積分 50 為切點，將 DNA 損傷分為輕度損傷(≦50)及高度損傷 (>50)兩組時，高度損傷組的出生結果明顯地較差。

(五) 孕婦菸害暴露狀態對新生兒出生結果的影響

由以上的結果顯示，新生兒DNA 損傷程度會影響新生兒的出生結果，而新生兒 DNA 損傷程度也剛好與孕婦菸害暴露狀態有關，符合了干擾因子的定義。因此，以 分層分析法(stratified analysis)控制干擾因子--「新生兒 DNA 損傷程度」，探討孕婦 菸害暴露狀態對新生兒出生結果的影響。

DNA 損傷程度以輕度損傷(≦50)及高度損傷(>50)做分層(如表九)，就輕度損傷 層來說，吸菸組新生兒的頭圍平均比非吸菸組大 1.59 公分，具有統計上的顯著差異 (p=0.023)；調整其它可能的潛在因子後，吸菸組新生兒平均出生體重及頭圍顯著大

於非吸菸組。

在高度損傷層中，以新生兒出生體重而言，二手菸暴露組比非吸菸組的平均體重

在高度損傷層中，以新生兒出生體重而言，二手菸暴露組比非吸菸組的平均體重