2-1 菌株
大腸桿菌株
Escherichia coli JM109，購自於 Novagen 公司。
Escherichia coli M15[pREP4] ，購自於 Qiagen 公司。
品種 (Strain) 基因型 (Genotype)
JM109
recA1 supE44 endA1 hsdR17 gyrA96 relA1 thi
(lac-proAB) F’ [traD36 proAB+ lacIq lacZ
M15]M15[pREP4] nals strs rifs lac- ara- gal- mtl- F- recA+ uvr+ lon+ 表 1. 使用之大腸桿菌品種與其基因型類別
2-2 培養基
菌株培養
Luria-Bertani (LB) broth
10 g tryptone、5 g yeast extract 和 10 g NaCl (購自於 Sigma 公司) 溶 於 900 ml 二次水，利用 NaOH 調整 pH 值至 7.0，之後補水至最 後體積為 1 公升。高壓滅菌 30 分鐘。
LB agar plate
配法和 LB broth 相同，另多添加 15 g bactoagar (購自 Sigma 公 司) 。
Ampicillin，購自於生工公司
將 Ampicillin 溶於二次水，最後濃度達到 50 mg/ml，再以 0.22 m
filter 過濾滅菌，之後分裝儲存於-20 ℃。
Kanamycin，購自於生工公司
將 Kanamycin 溶於二次水，最後濃度達到 10 mg/ml，再以 0.22 m filter 過濾滅菌，之後分裝儲存於-20 ℃。
Isopropyl -D-thiogalactopyranoside (IPTG) ，購自於生工公司
將 2.383 g IPTG 溶於 8 ml 二次水，調整至其最後體積為 10 ml。
再以 0.22m filter 過濾滅菌，然後分裝儲存於-20℃。
2-3 人類胎盤 cDNA 庫 (cDNA library)
Human Placenta Marathon-Ready cDNA，購自於 CLONTECH 公 司。
2-4 轉殖載體
yT&A cloning vector，購自於益生生技股份有限公司。 (附錄 A)
pQE-30，購自於 Qiagen 公司。 (附錄 B)
2-5 藥品詴劑
PCR 引子
引子 (oligonucleotide primer) 製備由生工有限公司合成。
質體 DNA 微量製備純化套組
Gene-SpinTM -V2，購自於波士特生物科技股份有限公司。
DNA 瓊脂洋菜膠純化套組
DNA Clean/Extraction kit，購自於 GeneMark。
酵素
Taq DNA polymerase，購自於 Violet 公司。
Restriction enzyme BamH
Ⅰ
，購自於 Promega 公司 Restriction enzyme Hind
Ⅲ
，購自於 Promega 公司 YEA T4 DNA Ligase，購自於益生生技開發股份有限公司。
T4 DNA Ligase，購自於 Fermentas 公司
DNA ladder 標準品
1 kp plus DNA ladder，購自於 Violet 公司
Gen-100 DNA ladder，購自於 GeneMark 公司
GeneRulerTM DNA ladder mix，購自於 Fermentas 公司
Protein marker 標準品
Prestained protein Ladder,～10-170 kDa，購自於 Fermentas 公司。
Unstained protein standards 14.4~116.25，購自於波仕特公司。
一級抗體
Mouse anti-His monoclonal antibody，購自於 Amersham Biosciences Ltd.。
二級抗體
Goat anti-Mouse IgG HRP conjugated affinity purified antibody，購 自於 CHEMICON international, Inc.。
Hypercassette
TM和 Hrperfilm
TM(Amersham Biosciences Ltd.)
其它用於配製詴劑與緩衝液之藥品皆購自於 Sigma-aldrich CO.或 Merck LTD.。
2-6 溶液與緩衝液
E.coli 勝任細胞 (competent cell) 之製備
Transformation bufferⅠ (TfbⅠ)
30 mM CH3COOK、100 mM KCl、10 mM CaCl2、50 mM MnCl2 和 15 % glycerol，將所有成份混合均勻，利用 0.2 M acetic acid 調整 pH 至 5.8，再以 0.22 m filter 過濾滅菌，儲存於 4 ℃。
Transformation bufferⅡ (TfbⅡ)
10 mM MOPS、10 mM KCl、75 mM CaCl2和 15 % glycerol，將所 有成份混合均勻，利用 KOH 調整 pH 至 6.5，再以 0.22
m filter
過濾滅菌，儲存於 4 ℃。DNA 電泳
5× Tris-borate-EDTA (TBE) electrophoresis buffer
將 54 g Tris base 和 27.5 g boric acid 溶於 800 ml 的二次水，加入 20 ml 0.5 M EDTA (pH8.0)，以水調整至最後體積為 1 L，儲存於室 溫中。使用時稀釋為 0.5×。
6× Gel-loading buffer
以二次水配製 0.25 % bromophenol blue、0.25 % xylene cyanol FF 和 30 % glycerol，將所有成份混合均勻後，儲存於 4 ℃。
1 % Agarose gel
取 1 g Agarose 粉末溶於 100 ml 二次水加熱沸騰，之後待其冷卻，
儲存於 TBE buffer 中備用。
SDS-聚丙烯醯胺膠體電泳 (SDS-polyacrylamide gel electrophoresis)
1× SDS sample-loading buffer
0.5M Tris-Cl (pH 6.8) 1.2ml、100% glycerol 1ml、10 % SDS 2ml、
0.1 % bromophenol blue 0.5ml 和 2-mercaptotehanol 0.5ml，最後用 ddH2O 補至 10ml 混合均勻。以 0.45 filter 過濾後儲存於-20 ℃。
Bacterial lysis buffer
50 mM Tris-Cl、1 mM EDTA 和 100 mM NaCl，調整 pH 值至 8.0。
5× Tris-glycine electrophoresis buffer
125 mM Tris base 和 1.25 M glycine 溶於 900 ml 二次水，加入 0.5 % SDS，調至 pH 值 8.3，最後以水調整至體積 1 公升。
Coomassie Blue staining solution
將 0.25 g Coomassie Brilliant Blue R-250 溶於 90 ml 的 methanol:
H2O (1:1) 混合液，再加入 10 ml glacial acetic acid。以 Whatman No.1 filter 過濾後儲存於室溫。
Destain solution Ⅰ
600 ml ddH2O、300 ml methanol 和 100 ml glacial acetic acid 混合 均勻，儲存於室溫。
Destain solution Ⅱ
800 ml ddH2O、100 ml methanol 和 100 ml glacial acetic acid 混合 均勻，儲存於室溫。
西方墨點法 (Western blotting)
1× Transfer buffer
39 mM glycine、48 mM Tris base、0.037 % SDS 和 20 % methanol 混合均勻，調整 pH 值至 8.0。
Phosphate-buffered saline (PBS)
將 8 g NaCl、0.2 g KCl、1.44 g Na2HPO4和 0.24 g KH2PO4溶於 800 ml 的二次水，利用 HCl 調至 pH 值 7.4，加水至最後體積 1 公升。
高壓滅菌 30 分鐘。
Blocking Solution 5 % (W/V) skim milk
0.2 % Tween 20 溶於 PBS 中。
PBST
取 PBS 溶液加入 0.05 % Tween-20。
GBX developer and replenisher，購自於 Kodak 公司
取200 ml “developer and replenisher ” 與 718 ml 的二次水混合。
GBX fixer and replenisher，購自於 Kodak 公司
取200 ml “fixer and replenisher ” 與 718 ml 的二次水混合。
6x His-tag 蛋白質純化 (QIAGEN Ltd.)
管柱
Ni-NTA Agarose 和 5 ml bed-volumn column (QIAGEN Ltd.)
Lysis buffer B
Regeneration buffer
6 M GuHCl 和 0.2 M acetc acid 混合均勻。
2-7 儀器
Polymerase Chain Reaction (PCR) machine：iCycleTM Thermal Cycler, Bio-Rad, Inc.
DNA 迷你膠電泳槽：upid-2, COSMO BIO CO., LTD
無菌操作臺：JW-4NEW, Lian Shen Enterprise Co., LTD
桌上型離心機：Biofuge pico, Heraeus Instruments, Inc.
高速離心機：GS-15R centrifuge, Backman Coulter, Inc.
迴轉式振盪培養箱：S300D, 一升科技(股)公司
迷你垂直電泳槽：Mini-Protein 3 cell, Bio-Rad Laboratories, Inc.
濕式電泳膠轉漬器：Mini Trans-Blot cell, Bio-Rad Laboratories, Inc.
酵素免疫吸附分析儀：Model 550 microplate reader, Bio-Rad, Inc.
恆溫水浴槽：B206, 一升科技(股)公司
分光光度計：OPRON-3000 , HANSON TECHNOLOGY Co., LTD