壹、藥品
實驗所使用的染料標準品茜草素(alizarin)、紫草素(purpurin)和桑 色素(morin)購自 Fluka 公司,大黃素(emodin)、胭脂紅酸(carminic acid)、
檞皮素(quercetin)、芹菜素(apigenin)和木犀草素(luteolin)購自 Sigma 公司,靛藍(indigotin)購自 Aldrich 公司。標準品以 80 %乙腈配製成濃 度 1×10-3 M 之母液(stock solution),避光保存於 4 ℃下備用。實驗時,
依當天所需要濃度以 ddH2O 稀釋之。
磷酸(H3PO4)、Tris(NH2C(CH2OH)3)和氫氧化銨(NH4OH)購自 J. T. Baker 公司,磷酸二氫鈉(NaH2PO4.2H2O)、磷酸三鈉(Na3PO4.12H2O)、 SDS 和 HCl 購自 Sigma-Aldrich 公司,磷酸氫二鈉(Na2HPO4)、硼酸(H3BO3)、
四硼酸鈉(Na2B4O7.10H2O)、氫氧化鈉(NaOH)和氯化銨(NH4Cl)購 自 Riedel-de Haëh 公司,以去離子水配製成實驗所需之緩衝溶液。
分析級之乙腈(Acetonitrile)、甲醇(Methanol)購自 Merck 公司。去 離子水(電阻值
≥
18.0 MΩ/cm)使用 Barnstead 公司 ultrawater system 系統。貳、儀器
pH meter 製造商 HORIBA 型號 D-24 超音波振盪器 製造商 RANSON 型號 1510 超高速離心機 製造商 SIGMA 型號 SIGMA 3K30 微量離心機 製造商 EDWARDS 型號 QS 7011
紫外可見光吸收儀 製造商 Perkin Elmer 型號 Lambda EZ 201 螢光光譜儀 製造商 HITACHI 型號 F-4500
毛細管電泳系統 製造商 Prince Technologies 型號 PrinCE 250
- 26 -
紫外光偵測器 製造商 Bischoff 型號 Lambda 1010 控制軟體 WPrince 32 Bit
數據擷取軟體 SISC 32 2.0 中文版
毛細管內徑 75 μm,外徑 375 μm,長度 60 cm,有效長度 48 cm
参、毛細管電泳實驗流程
新的毛細管以濃度 0.5 N 之 NaOH 充滿,靜置 8-12 小時後將 NaOH 以去離子水(ddH2O)置換備用。
每日進行實驗之前,先以 0.5 N NaOH 壓力 1000 psi 沖提毛細管 10 分 鐘,ddH2O 1000 psi 沖提 10 分鐘,再以緩衝溶液 1000 psi 沖提 10 分鐘,
即可開始進行實驗。每次電泳實驗先以 0.5 N NaOH 1000 psi 沖洗毛細管 1 分鐘,如 Fig. 7(a),緩衝溶液 1000 psi 沖提 5 分鐘,如 Fig. 7(b),樣品以 100 psi 進樣 0.1 分鐘,如 Fig. 7(c),再以分離電壓 20 kV 進行電泳,如 Fig.
7(d),電泳完畢以緩衝溶液 1000 psi 1 分鐘將毛細管中殘餘樣品推出。每 天實驗結束,以 0.5 N NaOH 1000 psi 沖提毛細管 5 分鐘,ddH2O 1000 psi 5 分鐘,讓毛細管充滿 ddH2O,即可關機。
肆、真實樣品之製備
(一)茜草萃取液
茜草根之萃取係依照民間傳統方法,流程如 Fig.8,秤取 50.0 g 市售乾 燥印度茜草根,與 0.8 公升的水一同放入不鏽鋼鍋中以瓦斯爐進行加熱,
如 Fig. 11,煮沸後以小火持續加熱 30 分鐘,如 Fig. 9(a)。將第一次萃取液 以紗布簡單過濾後,將茜草根留於鍋內,再加入 0.8 公升水進行第二次萃 取,一共萃取三次,將三次濾液集中即為茜草染液。靜置於塑膠瓶中,如 Fig. 9(b),待隔日進行染色。
分析茜草根萃取液時,將萃取液以 10000×g 離心 10 分鐘,取上清液
- 27 -
以孔徑 0.22 μm 濾膜過濾,再以 ddH2O 稀釋成 0.05 倍即可以 CE-UV 偵 測,並以標準添加法定量茜草素中茜草素(alizarin)和紫草素(purpurin)
之含量。
(二)茜草染織品
茜草染織品之製備係依照民間植物染傳統方法,流程如 Fig.10 所示:
秤取四十支棉布如 Fig.11(a),並在事前泡水使纖維軟化,陰乾後將棉布放
入染液中一起加熱,沸騰後以小火持續加熱使色素可以附著在纖維上,30
分鐘後關火,待冷卻後取出棉布,將多餘的染液清洗乾淨並陰乾,即完成 染色,成品如 Fig.11(b)。
織品上染料之萃取及分析,將上述茜草染成品以剪刀剪成小片,秤取 0.1g 浸泡於一系列濃度之 10 mL SDS 水溶液中:1 mM,5 mM,10 mM 和 50 mM,以超音波震盪進行染料分子之萃取 30 分鐘,將萃取液以移液管吸 取 1 mL,以 2000×g 離心 1 分鐘後取上清液進行 CE-UV 之分析,並對照檢 量線推算纖維含有的茜草素含量。
(三)薯榔塊莖染料之萃取
野生薯榔之塊莖,如 Fig. 6,採集自台東山區,將塊莖以菜刀和剪刀 分解成小塊,秤取 0.1 g 浸泡於 100% ACN 中,以超音波震盪器進行萃取 30 分鐘,將萃取液離心後取上清液進行 CE-UV 之分析。
- 28 -
Fig. 7. Scheme of CE operation.
(a) Flushing capillary with 0.5 N NaOH.
(b) Condition capillary with separation buffer.
(c) Sample injection.
(d) High voltage was applied to separate analytes.
(a) (b)
(d) (c)
- 29 -
Fig. 8. Scheme of madder roots extraction.
Weigh proper amount of dry madder roots.
Put madder roots and water into the stainless steel pot
Heat to boiling and last 30 min.
Gather filtered extract
and stand over night
before dyeing.
- 30 -
Fig. 9. Madder roots extraction.
(a) Madder roots were heating in boiling water.
(b) Madder roots extract was gathered in the bottle.
(a)
(b)
- 31 -
Fig. 10. Scheme of madder dye.
Weigh proper amount of cotton.
Put cotton and madder root extract into the stainless steel pot.
Heat to boiling and last 30 min.
Wash and let
the cotton dried
in the shade.
- 32 -
Fig. 11. Fabric (a) before and (b) after madder dye.
(a)
(b)
- 33 -
Fig. 12. Madder dye cotton immersed in SDS solution.
(a) Cotton before and (b) after ultrasonic extraction (1) 50 mM, (2) 10 mM, (3) 5 mM, (4) 1 mM SDS.
(a)
(b)
- 34 -