榼藤之藥理活性討論

本實驗進行了榼藤甲醇萃取物與其各層對 HONE-1（人類鼻咽癌細 胞）與 NUGC（人類鼻胃癌細胞）之體外抗癌作用評估，結果發現氯仿 層、乙酸乙酯層、正丁醇層等對 HONE-1 有抑制活性，而乙酸乙酯層和 正丁醇層等對 NUGC 也有抑制活性，可見榼藤之抗癌活性成分可能為中 高極性之物質，而本實驗在乙酸乙酯層分離到的檞皮素（EA-2）在許多

的文獻⁽¹²⁵⁾中顯示對各類癌細胞的抑制都有不錯之活性，且乙酸乙酯層

對 HONE-1、NUGC 均有抑制活性，所以推測檞皮素可能是榼藤抗癌之 活性成分之一。

二、1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)自由基清除能力之試驗

隨著時代的進步人們對自由基的研究了解亦逐漸深入，也體認到 自由基與許許多多的病理與生理現象密切相關，如衰老、癌症等等，

故不斷尋求阻斷自由基反應的抗氧化劑。也因此自由基清除能力的篩 選也顯的十分重要。一般自由基清除能力的篩選方法⁽¹²⁶⁾主要分為體外 抗氧化與體內抗氧化實驗，而體外抗氧化的特點在於快速、靈敏，以 便進一步再進行體內研究。體外抗氧化之試驗的篩選方法很多，但其 中 DPPH 自由基清除能力實驗方法為最簡便的方法之一，其不需要用

到太貴重的儀器，且 DPPH·為一相當安定的自由基，靈敏也高，故在 抗氧化上的研究，經常使用 DPPH·(C₁₈H₁₂N₆O₅·)來評估抗氧化劑的供 氫能力。原理：DPPH·其甲醇溶液為紫色(purple color)在 516 nm(文獻

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515~517 nm)下有強吸光，當 DPPH 自由基與抗氧化劑反應時，將 會降低吸光值。因而藉此判斷抗氧化劑清除 DPPH 自由基的能力，其 吸光值愈低，表示試樣清除 DPPH 自由基的能力愈強。

DPPH + AH → DPPH2 + A (purple color) (yellow color)

DPPH 自由基的甲醇溶液會隨著 pH 值的不同及時間長短而有所變 化，DPPH 自由基甲醇溶液在 pH 5.0~6.5 比較穩定而有適當的吸收，在 鹼性時則不穩定。此外，DPPH 自由基的甲醇溶液會隨時間的增長而逐 漸劣化，故實驗時需新鮮配置^{(93, 94)}。而榼藤對 DPPH 自由基清除能力試 驗，發現正丁醇層、P 層、甲醇粗抽等對 DPPH 自由基清除能力有明顯 之活性，可見榼藤之抗氧化活性成分可能為中高極性之物質，本實驗有 分離到的檞皮素，而檞皮素本身就具有很好的抗氧化之活性，同時也是 常用的陽性對照試劑之一，所以檞皮素應該是榼藤抗氧化之活性成分之 一。

三、急性毒性

榼藤莖部甲醇粗抽物經腹腔注射鼷鼠後，在 72 小時內之 LD₅₀為 170 mg/kg。中毒症狀：起初鼷鼠之活動量降低，眼睛變為暗紅色，聚集於 角落並有步伐遲緩之現象，死亡前有短暫類痙攣之跳動；當劑量加大 時，活動性減低加劇，死亡之時間縮短。顯示榼藤莖部甲醇粗抽物具有 一定的毒性，而且與文獻^(128~129)的依 LD₅₀之毒性分類比較(詳 Table 5-6) 中發現屬於中等毒性，故其在臨床之運用上需謹慎。

四、福馬林誘發舔足實驗

福馬林舔足實驗最早由 Dubuission 和 Dennis⁽⁹⁶⁾於 1977 年提出，對 許多鎮痛藥物的篩選為一可靠有效的方法，皮下注射稀釋過的福馬林於 大鼠、小鼠、貓或靈長類動物可觀察到兩相痛反應，在小鼠後足掌注入 福馬林，因刺激引起疼痛而有舔足或頓足的行為反應，此一動物模式，

其所產生之舔蹠反應呈雙向（biphasic response）的作用，即其舔足時間 有兩個高峰期，在福馬林注入 0~5 分鐘會造成起痛(initial pain)反應而引 起小鼠舔足，稱之為前期(early phase)，主要因直接刺激痛覺接受體造成 substance P 或 bradykinin 等致痛物質釋放；而在 15~40 分鐘所表現舔足 時間稱之為後期(late phase)，主要因為福馬林溶液引起發炎反應造成化 學傳遞物質，如 histamine、prostaglandin 及 kinin 等有關物質由受損組 織細胞中釋出所引起⁽¹³⁰⁾。

本實驗結果發現榼藤莖部甲醇粗抽物(Ep-M)在 5、10 mg/kg 時，無 論前期或後期均有明顯之抑制作用，且 Ep-M 在劑量 5 mg/kg 時，對於 福馬林所誘導的 late phase 其鎮痛療效比 indomethacin 更明顯；其鎮痛 作用可能與抑制上述發炎介質釋放相關，而確實具有鎮痛之活性成分則 有待進一步探討。

五、抗炎實驗

用於評估抗藥物之眾多篩選方法中，常以注射致炎劑後能產生抑制 浮腫的能力為先決條件，最常用的致炎物包括λ-carrageenin、dextrose、

ablumin、yeast⁽⁹⁷⁾等。其中又以λ-carrageenin 最常用，λ-carrageenin 是 由 Irish sea moss (Chondrus crispus)所衍化出來的一種非刺激性多糖體。

1962 年 Winter 等人⁽⁹⁷⁾使用 0.05 mL，1﹪λ-carrageenin 注射大鼠足蹠，

結果引起足蹠腫脹，並於注射後連續測量 3 小時後浮腫體積；與其他誘 發水腫之致炎劑相較，優點為在發炎過程中為局部刺激引起和抗原反應 無關，且在毒性劑量下反應性佳，無全身性作用，再現性高⁽¹³¹⁾。

事實上，λ-carrageenin 注射足蹠所引起的浮腫是雙向性反應⁽¹³²⁾， 注射λ-carrageenin 後，在不同時間有不同物質釋放而引起發炎，即 0~1.5 小時或 20 分至 1 小時內(first phase) histamine、PAF (platelet activating factor)會游離出來；1.5~2.5 小時(second phase)，kinin 類等物質會釋放；

2.5 小時之後(third phase)，prostaglandin、leukotreins 會釋放出來⁽¹³³⁾。故

本實驗於λ-carrageenin 誘導前先測量大鼠足蹠體積，並於λ-carrageenin 誘導後連續觀察 5 小時，每隔半小時測一次排水體積，計算出每小時蹠 體積與誘導前之蹠體積差(?V)，由本實驗結果發現，腹腔投予榼藤莖部 甲醇粗抽物(Ep-M) 5 mg/kg 在開始的第一個半小時時即可明顯抑制λ -carrageenin 所引起之發炎反應，且到給藥後 5 小時仍有一定的抗炎活 性，由此可知榼藤莖部甲醇粗抽物(Ep-M)確實有抗炎作用，且與其民間 用途相符，而確切的抗炎活性成分則有代進一步研究。