（一）總蛋白質之分析
檢測工具為 BCA protein assay kit (Pierce, USA)，參考操作手冊之步驟，每一 唾液樣本均作三重複測定，其方法如下：先將 reagent A、B 以 50：1 比例混合成 working reagent，在 96 孔盤中分別加入 BCA albumin 標準品及不同唾液樣本，
albumin 標準品以 working reagent 稀釋為 250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, 7.81, 3.91 (ug/ml)，再以 working reagent 稀釋不同唾液樣本 1: 25，接著每孔加入 200 μl，
在 37℃反應 30 分鐘後，以酵素免疫分析儀測量波長 540 nm 之吸光值，依 albumin 標準品之標準曲線以內插法計算出檢體中蛋白質濃度。
（二）sIgA 之分析
sIgA 以酵素連結免疫吸附法 (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 測得。步驟依序為：每一唾液樣本均作三重複測定，以 coating buffer 稀釋 anti-human IgA (Sigma : I9889) 1: 800，每孔加入 100 μl 於 96 孔盤，於 4 ℃冰箱 中靜置一夜，使抗體附著於盤底。接著以 washing buffer 沖洗後，每孔加入牛血 清白蛋白 (bovine serum albumin, BSA) 溶液 150 μl，於室溫 25 ℃靜置 10 分鐘，
再以 washing buffer 沖洗。接著加入抗體標準品 human IgA (Sigma : I2636) 及不 同唾液樣本，human IgA 以硫酸鹽緩衝鹽水 (phosphate buffered saline, PBS) 稀釋 為 500, 250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, 7.81 (ug/l)，以 PBS 稀釋不同唾液樣本 1: 500，
每孔加入 100 μl，於室溫 25 ℃靜置 90 分鐘後以 washing buffer 沖洗。接著加入 anti-human IgA peroxidase conjugate (Sigma : A3062)，以 PBS 稀釋抗體 1: 5000，
每孔加入 100 μl，於室溫 25 ℃靜置 90 分鐘後以 washing buffer 沖洗。最後加入 100 μl 呈色試劑，試劑為 alkaline phosphatase yellow (Sigma : P7998)，於室溫下 反應 30 至 40 分鐘。以酵素免疫分析儀測量波長 405 nm 之吸光值，依抗體標準 品之標準曲線以內插法計算出 sIgA 濃度。
（三）乳鐵蛋白之分析
乳鐵蛋白以 ELISA 測得。步驟依序為：每一唾液樣本均作三重複測定，以 coating buffer 稀釋 sheep anti-human lactoferrin (ABcan : ab35303) 1: 1000，每孔加 入 100 μl 於 96 孔盤，於 4 ℃冰箱中靜置一夜，使抗體附著於盤底。接著以 washing buffer 沖洗後加入 BSA 溶液，每孔 200 μl，於室溫 25 ℃靜置 60 分鐘，再以 washing buffer 沖洗。接著加入標準品 human lactoferrin (Sigma : L0502) 及不同唾液樣 本，human lactoferrin 以 PBS 稀釋為 2000, 1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25
(pg/ml)，以 PBS 稀釋不同唾液樣本 1: 2000，每孔加入 100 μl，於室溫 25 ℃靜置 90 分鐘後以 washing buffer 沖洗。接著加入 rabbit anti-lactoferrin (ABcan :
ab15811)，以 PBS 稀釋抗體 1: 500，每孔加入 100 μl，於 4 ℃冰箱中靜置一夜後 以 washing buffer 沖洗。再加入 goat anti-rabbit IgG conjugated with alkaline phosphatase (ZYMED : 816122)，以 PBS 稀釋抗體 1: 10000，每孔加入 100 μl，於 室溫 25 ℃靜置 120 分鐘後以 washing buffer 沖洗。最後加入 100 μl 呈色試劑，試 劑為 alkaline phosphatase yellow (sigma : P7998)，於室溫下反應 40 至 50 分鐘。
以酵素免疫分析儀測量波長 405 nm 之吸光值，依標準品之標準曲線以內插法計 算出乳鐵蛋白濃度。
（四）澱粉酶之分析
檢測工具為 Salivary α-amylase assay kit (Salimetrics, USA)，參考操作手冊之 步驟，其方法如下：先將澱粉酶基質溶液以及分析儀預熱至 37℃，持續 20 分鐘，
以澱粉酶稀釋溶液稀釋不同唾液樣本 1: 20。在 96 孔盤中加入 8 μl 不同的稀釋唾
液及標準品溶液 (high control, low control)，接下來同時加入 320 μl 澱粉酶基質 溶液，最後以酵素免疫分析儀波長 405 nm 讀取第 1 分鐘以及第 3 分鐘之吸光值，
進行計算。
活性計算公式如下
Abs./min = Absorbance difference per minute
△
TV = Total assay volume (0.328 ml) DF = Dilution factor (20x)
MMA = Millimolar absorptivity of 2-chloro-p-nitrophenol (12.9) SV = Sample volume (0.008 ml)
LP = Light path = 0.97 (specific to plate received with kit)
（五）清除自由基能力 (free radical scavenging activity, FRSA) 之分析
取 100 μl 溶於甲醇的 0.5 mM 之 DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 加入 96 孔盤中，再於每孔中分別加入 100 μl 的 PBS 和唾液，混合均勻後避光靜置 30 分鐘後，以 540 nm 的波長偵測吸光值，將所測得之吸光值依下列公式計算其清 除自由基能力。
FRSA (%) = (Ac － As) ÷ Ac) × 100 % Ac = Absorbance with the addition of PBS
As = Absorbance with the addition of saliva samples
二、血液樣本
（一）血球計數 (complete blood count)
將全血放至全自動血液分析儀進行分析，所得數據採用 Dill 與 Costill (1974) 的公式進行校正。
（二）不同淋巴細胞亞群之分析
先分離出周邊血液單核球細胞 (peripheral blood mononuclear cells,
PBMCs)，全血以 1500 rpm、25 ℃離心 5 分鐘後，吸去 plasma，加入等量的 PBS 稀釋。於 15 ml 離心管中加入適量的 Ficoll-Hypaque 後，再緩緩加入稀釋後的血 液，以 3500 rpm、25 ℃離心 30 分鐘後會呈現三層液相，吸取中間乳白色的液體，
放入 15 ml 離心管，再加入適量的 PBS 混合均勻，以 3500 rpm、25 ℃離心 20 分 鐘後倒掉上清液，沉澱物即為 PBMCs。取 106個 PBMCs 至 FACS tube，再加入 100 μl PBS 及 1 μl 抗體，抗體分別為 CD4、CD8、CD25、CD69、CD14 以及 TLR2 (BD Biosciences, USA)，避光静置於 4 ℃30分鐘，再加入 2 ml PBS 以 1800 rpm、
4 ℃離心 3 分鐘，倒掉上清液，再加入 0.5 ml PBS，以流式細胞儀測得淋巴細胞 亞群所佔百分比及螢光強度。
（三）白血球吞噬能力之分析
以全血加入 10 μl E.coil-FITC mix，於 37 ℃反應 10 分鐘後，再立刻置於 4 ℃ 終止反應，之後加入 50 μl quenching solution 及 1.5 ml washing solution，以 1500 rpm、4 ℃離心 5 分鐘後倒掉上清液，再加入 1 ml lysing solution 於室溫靜置 30 分鐘，接著以 1500 rpm、4 ℃離心 5 分鐘後倒掉上清液，加入 0.5 ml PBS，以流 式細胞儀測得吞噬細胞所佔百分比及螢光強度。
（四）肌酸激酶 (creatine kinase, CK) 之分析
檢測工具為 EnzyChrom Creatine Kinase Assay Kit (BioAssay Systems,
USA)，參考操作手冊之步驟，其方法如下：先將 100 μl Assay buffer、10 μl Substrate solution 和 1 μl Enzyme mix 混合配成反應試劑，預熱至 37 ℃，持續 10 分鐘。第 一、二孔分別加入 110 μl 的水以及 110 μl Calibrator，其餘每孔加入 10 μl 不同唾 液樣本和 100 μl 反應試劑，於 37 ℃靜置，最後以酵素免疫分析儀波長 340 nm 讀 取第 10 分鐘以及第 40 分鐘之吸光值，進行計算。
肌酸激酶活性計算公式如下：
（五）乳酸脫氫酶 (lactate dehydrogenase, LDH) 之分析
檢測工具為 QuantiChrom Lactate Dehydrogenase Kit (BioAssay Systems, USA)，參考操作手冊之步驟其方法如下：先將 170 μl Substrate buffer、14 μl MTT solution、8 μl NAD solution 以及 8 μl PMS solution 混合配成反應試劑。第一、二 孔分別加入 200 μl 的水以及 200 μl Calibrator，其餘每孔加入 10 μl 不同唾液樣本 和 190 μl 反應試劑，置於室溫，分別在第 0 分鐘以及第 25 分鐘以酵素免疫分析 儀讀取波長 565 nm 之吸光值。再以下列計算公式計算出其活性。
乳酸脫氫酶活性計算公式如下：