將實驗室已建構好的 pKRY1(pcDNA3-tE-HAHis)質體【附圖六】轉形 於 E. coli BL-21 ( DE3 )作表現，所得之轉形菌株(transformants)在 LB broth 中培養，並加入IPTG 誘導(induction) 四小時後，利用 2.2.8 所描述之方法，
把所收取的細胞予以打破，分為上清液及pellet，利用 SDS-PAGE 分析並以 Coomassie blue staining 或 Western blot 偵測蛋白質之表現。此重組基因所轉 譯之DV-2 PL046 truncated E protein 含有 402 amino acid residues，再加上 C 端之HA-His-tag 為 47 amino acid residues，預測 tE-HAHis 蛋白質大小約為 49 kDa。首先以 Coomassie blue 染色時，發現在 pellet 部份可見一條多出來 的band 約為 40 kDa【圖十一-(A) lane 4】，在 pcDNA3 vector 的 pellet 部分
則無【圖十一-(A) lane 3】。接著使用 anti-HA-HRP 抗體及 anti-His-HRP 抗 體 藉 由 Western blot 偵 測 E protein 之 表 現 時 ， 可 看 到 pKRY1(pcDNA3-tE-HAHis)的 pellet 部分在 40 kDa 附近皆有一條明顯的 band【圖十一-(B)(C)】。
3.7.2 全長外膜蛋白（full-length E protein）之表現
將實驗室已建構好的 pcDNA3-E14 質體轉形於 E. coli BL-21 ( DE3 )作 表現，所得之轉形菌株(transformants) 在 LB broth 中培養，並加入 IPTG 誘 導(induction) 四小時後，利用 2.2.8 所描述之方法，把所收取的細胞予以打 破，分為上清液及pellet，利用 SDS-PAGE 分析並以 Coomassie blue staining 或 Western blot 偵測蛋白質之表現。此重組基因所轉譯之 DV-2 PL046 full-length E protein 含有 495 amino acid residues，預測 full-length E protein 大小約為55 kDa。首先以 Coomassie blue 染色時，發現不管在上清液或 pellet 部份與pcDNA3 vector 比較【圖十二-(A)】，在 55 kDa 附近並無觀察到較粗 的band 或多一條 band。接著使用 anti-DV-2-domainⅢ抗體藉由 Western blot 同時偵測細胞帶有pcDNA3-E14 或 pKRY1 (pcDNA3-tE-HAHis)的 E protein 之 表 現 時 ， 可 看 到 在 細 胞 被 轉 形 了 pKRY1(pcDNA3-tE-HAHis)( 帶 有 truncated E protein)的 pellet 部分，在 40 kDa 附近有一條明顯的 band，而在 55kDa 附近因為有背景值存在，所以看不出 55 kDa 附近是否有較粗或是多 出一條band【圖十二-(B)】。
將建構好的 pET-30a(+)-E14 質體轉形於 E. coli Novablue ( DE3 )作表 現，所得之轉形菌株(transformants) 在 LB broth 中培養，並加入 IPTG 誘導 (induction) 四小時後，利用 2.2.8 所描述之方法，把所收取的細胞予以打破，
分為上清液及pellet，利用 SDS-PAGE 分析並以 Coomassie blue staining 或 Western blot 偵測蛋白質之表現。預測此重組基因所轉譯之 full-length E
protein 大小約為 55 kDa，再加上其 N 端的 His-tag、thrombin、S-tag 及 enterokinase 之序列約 7 kDa【圖十三】，共約62 kDa。首先以 Coomassie blue 染色時，發現不管在上清液或pellet 部份與 pET-30a(+) vector 比較【圖十四 -(A)】，在72 kDa 和 55 kDa 中間並無觀察到較粗的 band 或多一條 band。接 著使用anti-His-HRP 抗體藉由 Western blot 偵測在細胞帶有 pET-30a(+)-E14 的E protein 之表現時，可看到在細胞帶有 pET-30a(+)-E14 的 pellet 部分，
在72 kDa 和 33 kDa 中間共有四條明顯的 bands，分別是大小為介於 72 及 55kDa 間、比 55kDa 大些、約 40 kDa 及比 33 kDa 略大，並有二條較弱的 bands 介於 55kDa 及 40kDa 間【圖十四-(B)】。
將建構好的 pcDNA3-His-E14 質體轉形於 E. coli Novablue ( DE3 )作表 現，所得之轉形菌株(transformants) 在 LB broth 中培養，並加入 IPTG 誘導 (induction) 四小時後，利用 2.2.8 所描述之方法，把所收取的細胞予以打破，
分為上清液及pellet，利用 SDS-PAGE 分析並以 Coomassie blue staining 或 Western blot 偵測蛋白質之表現。預測此重組基因所轉譯之 full-length E protein 大小約為 55 kDa，再加上其 N 端的 His-tag、thrombin、S-tag 及 enterokinase 之序列約 7 kDa【圖十三】，共約62 kDa。首先以 Coomassie blue 染色時，發現不管在上清液或 pellet 部份與 pcDNA3 vector 比較【圖十五 -(A)】，在72 kDa 和 55 kDa 中間並無觀察到較粗的 band 或多一條 band。接 著 使 用 anti-His-HRP 抗 體 藉 由 Western blot 偵 測 在 細 胞 帶 有 pcDNA3-His-E14 的 E protein 之表現時，可看到在細胞帶有 pcDNA3-His-E14 的pellet 部分，在 72 kDa 和 33 kDa 中間共有六條明顯的 bands，分別是大 小為介於72 及 55 kDa 間、比 55 kDa 大些、二條介於 55 kDa 與 40 kDa 間 的bands、約 40 kDa 及比 33 kDa 略大的 band【圖十五-(B)】。
將建構好的pET-30a(+)△5T-E14 質體轉形於 E. coli Novablue ( DE3 )作 表現，所得之轉形菌株(transformants) 在 LB broth 中培養，並加入 IPTG 誘
導(induction) 四小時後，利用 2.2.8 所描述之方法，把所收取的細胞予以打 破，分為上清液及pellet，利用 SDS-PAGE 分析並以 Coomassie blue staining 或Western blot 偵測蛋白質之表現。預測此重組基因所轉譯之 full-length E protein 大小約為 55.6 kDa，再加上其 C 端的 His-tag 序列約 0.7 kDa，共約 56.3 kDa【圖十六】。首先以 Coomassie blue 染色時，發現在 pellet 部份約 比55 kDa 大些的位置處可見一條多出來的 band 【圖十七-(A) lane 4】，在 pET-30a(+)△5T vector 的 pellet 部分則無【圖十七-(A) lane 2】。接著使用 anti-His-HRP 抗體藉由 Western blot 偵測在細胞帶有 pET-30a(+)△5T-E14 的 E protein 之表現時，可看到在細胞帶有 pET-30a(+)△5T-E14 的 pellet 部分，
在72 kDa 和 33 kDa 中間共有三條 bands，分別是大小為比 55kDa 大些、比 55kDa 略小及約 40 kDa【圖十七-(B)】。
3.8 登革病毒截短型外膜蛋白（truncated E protein）在 mammalian cell 中