• 沒有找到結果。

複製並延伸

目 的:

取適量植物 DNA,利用OPB-08、OPB-15、OPD-08、OPD-15、OPE-08、OPE-12、

OPE-15、OPW-09 等八個核酸引子進行 PCR 分析,擬初步了解並建立台灣 產石松科植物之核酸指紋分析圖譜。

植物 D N A 材料:

1.L.1:長柄千層塔(線浸) 9.L.9:木賊葉石松(卓社)

2.L.2:玉柏(小風口) 10.L.10:杉葉蔓石松(合歡山)

3.L.3:玉山石松(小風口) 11.L.11:垂枝石松(百草谷藥園)

4.L.4:多穗石松(榛山)

12.L.12:覆葉石松(新社)

5.L.5:玉山地刷子(九九山莊) 13.L.13:福氏石松(龍雲山莊)

6.L.6:偽石松(卓社)

14.L.14:杉葉石松(太魯閣)

7.L.7:日本石松(小風口) 15.L.15:相馬氏石松(榛山)

8.L.8:垂穗石松(凌霄殿) 16.L.16:反捲葉石松(登山口)

台灣產石松科植物之核酸分析指紋圖譜

依據本實驗結果顯示下列八個核酸引子 1. OPB-08 2.OPB-15 3.OPD-08 4.OPD-15 5.OPE-08 6.OPE-12 7.OPE-15 8.OPW-09 將有助於本科之偵測與 辨識。茲引用 OPE-15 之核酸指紋分析圖譜說明如下:

圖 3 台灣產石松科之核酸指紋圖譜(OPE-15)

本指紋圖譜之核酸引子為 OPE-15,電泳跑道 L. 100bp、M.1kb(標準核酸分子量標誌), 電泳跑道: 1.長柄千層塔(線浸) 2.玉柏(小風口) 3.玉山石松(小風口) 4.多穗石松 (榛山) 5.玉山地刷子(九九山莊)6.偽石松(卓社) 7.日本石松(小風口) 8.垂穗石松 (凌霄殿) 9.木賊葉石松(卓社) 10.杉葉蔓石松(合歡山) 11.垂枝石松( 百草谷藥園)

12. 覆葉石松(新社)13. 福氏石松(龍雲山莊)14. 杉葉石松(太魯閣)15. 相馬氏石松 (榛山)16.反捲葉石松(馬達拉溪登山口)

使用 OPB-08、OPB-15、OPD-08、OPD-15、OPE-08、OPE-12、OPE-15、OPW-09 等八個核酸引子跑 PCR,PCR 產物經電泳後,進行核酸條帶分析,結果顯示十六 種石松科植物彼此間有其共同性和差異性(詳見下列各圖表說明)。若配合分子 標誌,該核酸指紋圖譜可作為石松科植物鑑定之客觀輔助依據。

表 18 台灣產石松科植物之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPE-15)

表 19 台灣產石松科植物之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPD-15)

表 19 續 台灣產石松科植物之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPD-15)

表 20 台灣產石松科植物之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPB-08)

表 21 台灣產石松科植物之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPW-09)

電泳條帶

植物材料 300bp 400bp 500bp 600bp 700bp 800bp 900bp 1000bp 1100bp 1170bp 1250bp 1340bp 1500bp 1600bp 1730bp 2000bp

1.長柄千層塔

表 22 台灣產石松科植物之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPE-08)

表 23 台灣產石松科植物之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPB-15)

表 24 台灣產石松科植物之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPE-12)

表 25 台灣產石松科植物之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPD-08)

表 25 續 台灣產石松科植物之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPD-08)

三、台灣產相馬氏石松和反捲葉石松之 R A P D 標誌分析 目 的:

取適量植物 DNA,利用 OPB-15、OPD-08、OPD-15、OPE-08 及 OPE-15 等 五個核酸引子進行 PCR 分析,擬初步了解台灣產相馬氏石松和反捲葉石 松之核酸指紋圖譜,及其客觀輔助鑑別方法。

植物 D N A 材料:

1.L.1:杉葉石松(太魯閣) 2.L.2:相馬氏石松(榛山)

3.L.3:反捲葉石松(登山口) 4.L.4:覆葉石松(新社)

台灣產相馬氏石松和反捲葉石松之核酸分析指紋圖譜

依據本實驗結果顯示下列五個核酸引子:1.OPB-15 2.OPD-08 3.OPD-15 4.OPE-08 5.OPE-15 將有助於二者之偵測與辨識。茲引用 OPD-15 之核 酸分析指紋圖譜說明如下:

甲、實驗組:

1. 實驗組包含相馬氏石松和反捲葉石松。

2. 條帶類型(band type)顯現多型性(polymorphism)。

3. 條帶類型相似性低。

乙、對照組:

1.對照組包含杉葉石松和覆葉石松 2.條帶類型顯示多型性。

3.條帶類型與實驗組不同。

圖 4 台灣產相馬氏石松和反捲葉石松之核酸指紋圖譜(OPD-15)

本核酸指紋圖譜之核酸引子為 OPD-15,電泳跑道 L.100bp、M.1kb (標準核酸分子量標誌), 電泳跑道 1.杉葉石松(太魯閣) 2.相馬氏石松(榛山) 3.反捲葉石松(登山口)4.覆葉石松 (新社),2.、3.為實驗組,1.、4.為對照組。

丙、台灣產相馬氏石松與反捲葉石松之核酸指紋圖譜

表 28 相馬氏石松與反捲葉石松之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPE-15)

帶 相 馬 氏 石 松反 捲 葉 石 松

1.600bp + +

2.1250bp + +

3.1700bp + +

1.750bp - +

2.900bp + + -

3.1000bp + + -

符號說明:1.bp 為 base pair(鹼基對)之簡稱,為表示 DNA 片段長度之單位 2.+表示有條帶存在、++明顯、-無條帶

由圖 3 表 28 顯示出相馬氏石松和反捲葉石松之核酸指紋圖譜條帶之差異性 與共同性相當;於 750bp、900bp、1000bp 二者之表現不同,可以區別。於 600bp、

1250bp、1700bp 二者均有條帶。

表 29 相馬氏石松與反捲葉石松之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPB-15)

帶 相 馬 氏 石 松反 捲 葉 石 松

1.300bp + -

2.800bp + -

3.1173bp + + -

4.1330bp + + -

5.600bp ± ±

符號說明:1.bp 為 base pair(鹼基對)之簡稱,為表示 DNA 片段長度之單位 2.+表示有條帶存在、++明顯、±不明顯、-無條帶

由圖 16 及表 29 顯示出相馬氏石松和反捲葉石松之核酸指紋圖譜條帶之差 異性較多,共同性較少;於 300bp、800bp、1170bp、1330bp 二者之表現不同,

可以區別。於 600bp、二者之條帶均不明顯。

表 30 相馬氏石松與反捲葉石松之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPD-08)

帶 相 馬 氏 石 松反 捲 葉 石 松 1.1100bp - -

相 似

2.1250bp ± ± 1.700bp - + +

相 異

2.900bp + + -

符號說明:1.bp 為 base pair(鹼基對)之簡稱,為表示 DNA 片段長度之單位 2.++表示條帶明顯、±不明顯、-無條帶

由圖 19 及表 30 顯示出相馬氏石松和反捲葉石松之核酸指紋圖譜條帶之差異 性與共同性相當;於 700bp、900bp 二者之表現不同,可以區別。 於 1100bp、1250bp 二者均無條帶或條帶不明顯。

依據核酸引子 OPD-15、OPE-08、OPE-15、OPB-15、OPD-08 所作之核酸分析 指紋圖譜及表 2 6 、2 7 、2 8 、2 9 、3 0 等顯示出,相馬氏石松和反捲葉石松之條帶 相似性不高,此點印證了二者外部形態分類之論點,也就是說,相馬氏石松和反 捲葉石松應是不同種之植物,其核酸指紋圖譜自然也就有差異。

四、台灣產玉柏和玉山石松之 R A P D 標誌分析 目 的:

取適量植物DNA,利用 OPB-08、OPB-15、OPD-08、OPD-15、OPE-08、OPE-12

OPE-15 及 OPW-09 等八個核酸引子進行 PCR 分析,擬初步了解台灣產玉 柏和玉山石松之核酸指紋圖譜,及其客觀輔助鑑別方法。

植物 D N A 材料:

1.L.1:千層塔(線浸) 2.L.2:玉柏(小風口)

3.L.3:玉山石松(小風口) 4.L.4:多穗石松(榛山)

台灣產玉柏和玉山石松核酸分析指紋圖譜

依據本實驗結果顯示下列八個核酸引子:1.OPB-08、2.OPB-15 3.OPD-08 4. OPD-15 5.OPE-08、6.OPE-12、7.OPE-15、8.OPW-09 將有助於玉柏和 玉山石松之偵測與鑑識。茲提供 OPW-09 之核酸指紋圖譜說明如下:

甲、實驗組:

1.實驗組包含玉柏和玉山石松。

2.條帶類型(band type)顯現多型性(polymorphism)。

3.條帶類型相似性低。

乙、對照組:

1.對照組包含長柄千層塔和多穗石松。

2.條帶類型顯示多型性。

3.條帶類型與實驗組不同。

圖 5 台灣產玉柏和玉山石松之核酸指紋圖譜(OPW-09)

本核酸指紋圖譜之核酸引子為 OPW-09,電泳跑道 L.100bp、M.1kb(標準核酸分子量標誌), 電泳跑道 1.長柄千層塔(線浸) 2.玉柏(小風口) 3.玉山石松(小風口) 4.多穗石松 (榛山),2.、3.為實驗組,1.、4.為對照組。

丙、台灣產玉柏與玉山石松之核酸指紋圖譜

圖 7 及表 32 顯示,二者核酸條帶幾無共同性( 1000bp 除外,二者均有條

圖 21 及表 34 顯示,玉柏和玉山石松之共同性小、差異性較大,其共同性為:

帶 玉 柏 玉

1.400bp - +

2.500bp - +

3.1100bp - +

4.1170bp + + -

5.1600bp + -

符號說明:1.bp 為 base pair(鹼基對)之簡稱,為表示 DNA 片段長度之單位 2.+表示有條帶存在、++明顯、-無條帶

圖 15 及表 37 顯示,玉柏和玉山石松之核酸條帶差異性很大,幾無共同性,

二者似應為不同之種類。其差異性說明如下:於400bp、500bp、1100bp,玉柏皆 無條帶,而玉山石松則有條帶。於 1170bp、1600bp 玉柏均有條帶或條帶明顯,

而玉山石松則均無條帶。

表 38 玉柏與玉山石松之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPB-15)

帶 玉 柏 玉

1.600bp + + + +

2.700bp + + +

3.900bp + -

4.1000bp - ±

5.1100bp + -

符號說明:1.bp 為 base pair(鹼基對)之簡稱,為表示 DNA 片段長度之單位 2.+表示有條帶存在、+++很明顯、++明顯、±不明顯、-無條帶

圖 16 表 38 顯示,玉柏和玉山石松之差異性較大,二者似應為不同之種類。

其共同性為:於 600bp、700bp 二者均有條帶或條帶很明顯。於 900bp、1100bp 玉柏有條帶,而玉山石松則無條帶。於 1000bp 玉柏無條帶,而玉山石松則條帶 不明顯。

綜合上列核酸分析圖譜 ( OPB-08、OPB-15、OPD-08、OPD-15、OPE-08、

OPE-12、OPE-15、OPW-09 等八個核酸引子)得知,玉柏和玉山石松之核酸指紋圖 譜差異性很大(尤其是 OPB-08、OPD-15、OPE-08、OPE-12 之核酸指紋圖譜幾無 共同性,偵測效果最好),此點與以外部形態學作為分類之依據相吻合,亦即是 玉柏和玉山石松之外部形態差異性較大,其核酸指紋圖譜相對地差異性亦較大,

二者可以區別。

五、台灣產杉葉石松和反捲葉石松之 R A P D 標誌分析

目 的:

取適量植物 DNA,利用 OPB-08、OPD-15、OPE-08 及 OPE-12 等四個核酸 引子進行 PCR 分析,擬初步了解台灣產杉葉石松和反捲葉石松之核酸指 紋圖譜,及其客觀輔助鑑別方法。

植物 D N A 材料:

1.L.1:覆葉石松(新社) 3.L.3:杉葉石松(太魯閣)

2.L.2:福氏石松(奮起湖) 4.L.4:反捲葉石松(登山口)

台灣產杉葉石松和反捲葉石松之核酸分析指紋圖譜

就外部形態而言,台灣產杉葉石松與反捲葉石松很不相同,然其核酸指紋 圖譜卻很相似。 依據本實驗結果顯示下列四個核酸引子: 1.OPB-08、

2.OPD-15、 3.OPE-08、4.OPE-12 將有助於玉柏和玉山石松之偵測與鑑識。

茲提供 OPB-08 之核酸指紋圖譜說明如下:

甲、實驗組:

1.實驗組包含杉葉石松和反捲葉石松。

2.條帶類型(band type)顯現多型性(polymorphism)。

3.條帶類型相似性大、差異性小。

乙、對照組:

1.對照組包含覆葉石松和福氏石松。

2.條帶類型顯示多型性。

3.條帶類型與實驗組不同。

圖 6 台灣產杉葉石松和反捲葉石松之核酸分析指紋圖譜(OPB-08)

本核酸指紋圖譜之核酸引子為 OPB-08,電泳跑道:L. 100bp、M.1kb(標準核酸分子量 誌),

電泳跑道: 1.覆葉石松(新社)、2.福氏石松(奮起湖)、3.杉葉石松(太魯閣)、4.反捲葉石松

(登山口),3.4.為實驗組,1.2.為對照組。

丙、台灣產杉葉石松和反捲葉石松之核酸指紋圖譜

表 39 杉葉石松和反捲葉石松之核酸指紋圖譜(核酸引子 OPB-08)

帶 杉 松 反

1.400bp + +

2.500bp ± ±

3.550bp + +

4.600BP + +

5.700bp ± ±(7 5 0 )

6.1000bp ± ±

7.1170bp + +

符號說明:1.bp 為 base pair(鹼基對)之簡稱,為表示 DNA 片段長度之單位 2.+表示有條帶存在、±不明顯、

符號說明:1.bp 為 base pair(鹼基對)之簡稱,為表示 DNA 片段長度之單位 2.+表示有條帶存在、±不明顯、