第五章、 參考文獻
附錄 7、 奈米級鈣離子對番茄植株受細菌性病源菌青枯病菌 Rd4 逆境對莖部 pH
每株 50 mL ， 9 天後於根部澆灌 Rd4 低濃度 50 mL ( 106 CFU/mL ) 與高濃度 50 mL ( 107 CFU/mL ) ，於處理 4、6 天後進行莖部 pH 檢測。利用 SPSS 軟 體經由 ANOVA 進行 Fisher 的最小顯著差異性檢定分析 ( Fisher's protected least significant difference test, LSD test ) ，不同字母代表統計分析結果具有顯著 差異 ( p＜0.05 ) 。平均值+標準誤差。每實驗處理 5 重複 ( n=5 ) 。L 代表 0.2% ; H 代表 2%。 ( A ) 低濃度處理莖部 pH 值、 ( B )高濃度處理莖部 pH 值。
附錄 8、奈米級鈣離子對細菌性病源菌青枯病菌 Rd4 族群菌數生長的影響。將 200 μL Rd4 菌液 ( 105CFU/mL ) 培養於液態 NB 培養基 ( PH:7 ) 、 0.2% 奈米 鈣液態 NB 培養基 ( PH:7.2 ) 、2% 奈米鈣液態 NB 培養基 ( PH:7.5 ) ，於培 養箱 ( 28 ℃ , 150 rpm ) 搖瓶培養，培養 4、8、12、16 hr 後於 NB 培養基塗 盤養菌， 於培養箱 ( 28 ℃ ) 培養 2 天後進行菌落計算。利用 SPSS 軟體經 由 ANOVA 進行 Fisher 的最小顯著差異性檢定分析 ( Fisher's protected least significant difference test, LSD test ) ，不同字母代表統計分析結果具有顯著差異 ( p＜0.05 ) 。平均值+標準誤差。每實驗處裡 3 重複 ( n=3 ) 。L 代表 0.2% ; H 代表 2%。 ( A ) 4、8hr 菌數、 ( B ) 12、16 hr 菌數。
附錄 9、奈米級鈣離子對番茄植株土壤 pH 的影響。番茄植株培養於土壤中，
於 30 天大時處理 0.2%、2% 奈米鈣，每株 50 mL ，於處理 2 天後擠壓淺盆 取土壤溶液約 15 mL 進行土壤 pH 檢測。利用 SPSS 軟體經由 ANOVA 進行 Fisher 的最小顯著差異性檢定分析 ( Fisher's protected least significant difference test, LSD test ) ，不同字母代表統計分析結果具有顯著差異 ( p＜0.05 ) 。平均值 +標準誤差。每實驗處理 5 重複 ( n=5 ) 。L 代表 0.2% ; H 代表 2%。
附錄 10、奈米級鈣離子對番茄植株莖部 pH 的影響。番茄植株培養於土壤中，
於 40 天大時處理 0.2%、2% 奈米鈣，每株 50 mL ，於處理 13 、15 天後進 行莖部 pH 檢測。利用 SPSS 軟體經由 ANOVA 進行 Fisher 的最小顯著差異 性檢定分析 ( Fisher's protected least significant difference test, LSD test ) ，不同字 母代表統計分析結果具有顯著差異 ( p＜0.05 ) 。平均值+標準誤差。每實驗處理 3 重複 ( n=3 ) 。L 代表 0.2% ; H 代表 2%。
附錄 11、奈米級鈣離子對多種病植物源菌的菌絲生長影響。將病原菌株 ( A ) Colletotrichum gloeosporioides ( 1-36-2 ) 、 ( B ) Colletotrichum gloeosporioides ( go-9-1 ) 、 ( C ) Fusarium equiseti ( Le-1 ) 、 ( D ) Colletotrichum
gloeosporioides ( tree-3 ) 、 ( E ) Phoma.sp ( Le19 ) 、 ( F ) Colletotrichum
gloeosporioides ( 53-3-5 ) 、 ( G ) Colletotrichum gloeosporioides ( 53-1-2 ) 、 ( H ) Colletotrichum gloeosporioides ( 7g-3-3 ) 、 ( I ) Fusarium oxysporum ( Lf2 ) 、 ( J ) Colletotrichum gloeosporioides ( 1-39-1 ) 、 ( K ) Alternaria brassicae ( ros2 ) 培 養於 PDA 培養基 28 ℃ 4 天，切下直徑 0.6 cm 之菌絲盤放置 PDA 培養基，
於菌絲盤 1.5 cm 處放置直徑 0.8 cm 之濾紙，將 10 mL DD water 、 0.2 % 奈 米鈣滴至濾紙，將培養基置於 28 ℃ 培養箱，在其菌絲生長至無菌水之濾紙時 觀測，每處理 5 重複 ( n=5 ) 。
附錄 12、奈米級鈣離子對 Colletotrichum gloeosporioides ( 7g-3-3 ) 孢子發芽率 的影響。將真菌培養於 1/5 PDA 30 天， 28 ℃ ，光照 12:12 ，加入 5 mL Ddwater 震盪 5 分鐘洗下孢子計算孢子數量，處理 0.2 % 奈米鈣，於室溫靜置六小時後 計算孢子發芽率。利用 SPSS 軟體經由 ANOVA 進行 Fisher 的最小顯著差異 性檢定分析 ( Fisher's protected least significant difference test, LSD test ) ，不同字 母代表統計分析結果具有顯著差異 ( p＜0.05 ) 。平均值+標準誤差。每實驗處理 3 重複 ( n=3 ) 。L 代表 0.2% 。
附錄 13、奈米級鈣離子對番茄田間移植受損測試。將植株種植於土壤中，生長 至 40 天後移植至田間，適應環境 14 天後，處理 0.2%、2% 奈米鈣， 每株 100 mL，每週處理一次。於處理 2 次 ( 14 天 ) 後進行外觀觀測比較移植受損情況。
植株於植物房生長環境為 26℃ ，光照 12:12 ，光強度 400 μmol m-2s-1 。利用 SPSS 軟體經由 ANOVA 進行 Fisher 的最小顯著差異性檢定分析 ( Fisher's protected least significant difference test, LSD test ) ，不同字母代表統計分析結果 具有顯著差異 ( p＜0.05 ) 。平均值+標準誤差。每實驗處理 20 重複 ( n=20 ) 。 L 代表 0.2% ; H 代表 2%。正常生長番茄 : 植株高度高於 20 cm ，葉片翠綠 且較大，莖條翠綠且較粗。移植受損番茄 : 植株高度低於 20 cm ，葉片淡綠且 較小，莖條紫化且較細。 ( A ) 處理 2 次 ( 14 天 ) 後外觀、 ( B ) 移植受損率、
( C ) 正常生長番茄與受損番茄。
附錄 14、奈米級鈣離子對移植受損番植株生長測試。將植株種植於土壤中，生 長至 40 天後移植至田間，適應環境 14 天後，處理 0.2% 奈米鈣，每株 100 mL ，每週處理一次。於處理 8 次 ( 56 天 ) 及 14 次 ( 98 天 ) 後進行外觀 觀測、高度測量、葉片數測量、花苞數測量、花朵數測量、青果數測量。植株於 植物房生長環境為 26℃ ，光照 12:12 ，光強度 400 μmol m-2s-1 。利用 SPSS 軟 體經由 ANOVA 進行 Fisher 的最小顯著差異性檢定分析 ( Fisher's protected least significant difference test, LSD test ) ，不同字母代表統計分析結果具有顯著 差異 ( p＜0.05 ) 。平均值+標準誤差。控制組實驗處理 10 重複 ( n=10 ) ， 0.2%
純鈣實驗處理 6 重複 ( n=6 ) 。L 代表 0.2% 。 ( A ) 處理 8 次 ( 56 天 ) 及 14 次 ( 98 天 ) 後外觀、 ( B ) 植株高度、 ( C ) 葉片數、 ( D ) 花苞數、 ( E ) 花朵數、 ( F ) 青果數。
附錄 15、奈米級番茄鈣離子田間生長與老化影響測試。將植株種植於土壤中，
生長至 40 天後移植至田間，適應環境 14 天後，處理 0.2% 、2% 奈米鈣， 每 株 100 mL ，每週處理一次。於處理 16 次 ( 119 天 ) 後進行外觀觀測。於處 理 18 次 ( 133 天 ) 後靜置 50 天後待其老化。植株於植物房生長環境為 26℃ ， 光照 12:12 ，光強度 400 μmol m-2s-1 。利用 SPSS 軟體經由 ANOVA 進行 Fisher 的最小顯著差異性檢定分析 ( Fisher‘s protected least significant difference test, LSD test ) ，不同字母代表統計分析結果具有顯著差異 ( p＜0.05 ) 。平均值 +標準誤差。控制組實驗處理 10 重複 ( n=10 ) ， 0.2% 純鈣實驗處理 14 重 複 ( n=14 ) ， 2% 純鈣實驗處理 20 重複 ( n=20 ) 。L 代表 0.2% ; H 代表 2%。
( A ) 處理 16 次 ( 119 天 ) 後外觀、 ( B )處理 18 次 ( 133 天 ) 後植株老化 外觀。
附錄 16、奈米級鈣離子對番茄熟果抵抗 Colletotrichum gloeosporioides ( 1-36-2 ) 的影響。將植株種植於土壤中，生長至 40 天後移植至田間，適應環境 14 天後，
處理 0.2%、2% 奈米鈣，每株 100 mL ，每週處理一次。於處理 16 次 ( 119 天 ) 後將番茄熟果採回表面消毒後進行病原菌接種試驗。將熟果進行果實炭疽病菌孢 子注射接種，每顆果實注射三點，每點注射 10 μL ，孢子濃度為 105 spore/mL ， 接種十天後進行拍照觀測。植株於植物房生長環境為 26℃ ，光照 12:12 ，光 強度 400 μmol m-2s-1 。炭疽病菌 ( 1-36-2 ) 培養條件於斜面 1/5 PDA 培養基於 26℃ ，光照 12:12 培養置產孢，接種前以 0.1% WA ( 含 0.05% Tween 20 ) 震 盪 5 分鐘洗下並利用血球計數器計算孢子數量。利用 SPSS 軟體經由 ANOVA 進行 Fisher 的最小顯著差異性檢定分析 ( Fisher's protected least significant difference test, LSD test ) ，不同字母代表統計分析結果具有顯著差異 ( p＜
0.05 ) 。平均值+標準誤差。每實驗處理 5 重複 ( n=5 ) 。L 代表 0.2% ; H 代 表 2%。 ( A ) 接種外觀、 ( B ) 損傷程度。
附錄 17、番茄莖部鈣離子含量測試。將植株種植於真珠石中，生長至 64 天後 處理 0.2% 、2% 奈米鈣，每株 50 mL 。於 9 天後取番茄莖部去除枝條後，加 入鋼珠以液態氮磨碎，加入 300 μL 超純水以鈣離子測量器進行鈣離子含量測 試 。植株生長環境為 26℃ ，光照 12:12 ，光強度 400 μmol m-2s-1 。利用 SPSS 軟體經由 ANOVA 進行 Fisher 的最小顯著差異性檢定分析 ( Fisher's protected least significant difference test, LSD test ) ，不同字母代表統計分析結果具有顯著 差異 ( p＜0.05 ) 。平均值+標準誤差。每實驗處理 5 重複 ( n=5 ) 。L 代表 0.2% ; H 代表 2%。
附錄 18 、奈米級鈣離子對番茄葉片光合作用效率測試 。植物房植株將番茄植 株培養於土壤中，於 30 天大時處理 0.2%、2% 奈米鈣，每株 50 mL ，於 9 天 後進行光合作用前黑暗處理， 1 天後以光合作用測量器進行葉片光合作用效率 測試。田間植株將番茄植株種植於土壤中，生長至 40 天後移植至田間，適應環 境 14 天後，處理 0.2%、2% 奈米鈣，每株 100 mL ，每週處理一次 。於處理 6 次 ( 42 天 ) 後進行光合作用前黑暗處理， 1 天後以光合作用測量器進行葉 片光合作用效率測試。植株生長環境為 26℃ ，光照 12:12 ，光強度 400 μmol m-2s-1 。利用 SPSS 軟體經由 ANOVA 進行 Fisher 的最小顯著差異性檢定分析 ( Fisher‘s protected least significant difference test, LSD test ) ，不同字母代表統計 分析結果具有顯著差異 ( p＜0.05 ) 。平均值+標準誤差。每實驗處理 10 重複 ( n=10 ) 。L 代表 0.2% ; H 代表 2%。 ( A ) 植物房植株光合作用效率、 ( B ) 田 間植株光合作用效率。
附錄 19、奈米級鈣離子對番茄內 H2O2 含量、 POD 酵素活性與 LePR1、LeCOI1 基因表現量的影響。將番茄植株培養於土壤中，於 30 天大時處理 0.2%、2% 奈 米鈣，每株 50 mL ，於 5、9、13 天後取葉片 ( 約 0.4~0.5 g ) ，進行 H2O2 過 氧化物累積及 POD 酵素活性檢測。基因表現量於 9 天後取頂部第二片葉片抽 RNA 定量後進行 RT-PCR 。以 efla 引子進行 PCR 確認片段。利用 LePR1 及 LeCOI1 與 efla 引子分別進行 Q-PCR 測定。植株生長環境為 26℃ ，光照 12:12 ，光強度 400 μmol m-2s-1 。利用 SPSS 軟體經由 ANOVA 進行 Fisher 的 最小顯著差異性檢定分析 ( Fisher‘s protected least significant difference test, LSD test ) ，不同字母代表統計分析結果具有顯著差異 ( p＜0.05 ) 。平均值+標準誤 差。 H2O2 含量、 POD 酵素活性每實驗處理 5 重複 ( n=5 ) 。 LePR1、LeCOI1 基因表現量每實驗處理 3 重複 ( n=3 ) 。L 代表 0.2% ; H 代表 2%。 ( A ) H2O2 過氧化物累積、 ( B ) POD 酵素活性、 ( C ) LePR1 基因表現量、 ( D ) LeCOI1 基因表現量。