細胞試驗

圖十四、細胞數與 MTT 存活率試驗之 570 nm 吸光值。

Fig. 14. The absorbance at 570 nm of MTT assay on skin fibroblasts.

圖十五、MJP 對人類皮膚纖維母細胞毒性試驗。

Fig. 15. Cytotoxicity of MJP on human skin fibroblasts.

圖十六、AEMJ 對人類皮膚纖維母細胞毒性試驗。

Fig. 16 Cytotoxicity of AEMJ on human skin fibroblasts.

(3) UVA 強度試驗

有加樣、有照射組之螢光強度(experimental) : Inx

表四為不同 UVA 強度照射下細胞之存活率和 ROS 相對產量。可看出 UVA after exposure to different intensities of UVA. (n=3, P<0.05)

UV intensity (J/cm²) 0 5 8 10

cell viability (%) 100±6.70^a 87.99±4.03^b 78.74±5.36^c 74.92±3.28^c RP of ROS (%) 100±1.31^c 106.61±0.98^b 109.79±4.27^b 129.31±2.91^a

圖十七、不同強度 UV 照射後皮膚纖維細胞之存活率。

Fig. 17. Viabilities (%) of skin fibroblasts after exposing to different intensities of UVA.

圖十八、不同強度 UV 照射後皮膚纖維細胞之 ROS 相對產量(%)。

Fig. 18. Relative production (RP) of ROS (%) of skin fibroblasts after exposure to different intensities of UVA.

(4) 桑椹汁及其粗萃物對紫外光刺激細胞保護功效評估 uliginosum) 萃取物 (anthocyanin-rich extract from bog blueberry, ATH-BBe) 抑 制 UVB 照射真皮纖維細胞之光老化，發現其可有效減輕 UVB 造成之細胞毒

B. 細胞內氧化壓力測定

有加樣、有照射組之螢光強度(experimental) : Inx

結果顯示，有處理樣品組別之細胞內 ROS RP (%)顯著較低，指出樣品可

而造成皮膚纖維細胞氧化壓力較劇烈之提升。該試驗使用 UVB 而非 UVA，作 者在文中說明，因為在 UV 的各波段中唯有 UVB 能造成生理傷害，且 UVB 被認為是環境中最強之致癌物。但 Krutmann & Gilchrest (2006) 的文獻中則提 到，UVA 的穿透力較 UVB 強，能穿透表皮刺激真皮層中纖維母細胞使其氧化

C. 細胞內抗氧化酵素活性測定

Lyu & Park (2012) 以两歧五加 (Acanthopanax divaricatus var. albeofructus) 富 含 花 青 素 之 成 熟 漿 果 為 原 料 ， 萃 取 花 青 素 cyanidin-3-galactoside 和 cyaniding-3-lathyroside (CG & CL)，研究其對人類皮膚纖維母細胞光老化之保 護。細胞先與 5、10、50、100 μg/mL 之 CG 和 CL 培養，測定照射 8 J/cm² UVA

D. 細胞內原膠原蛋白 (procollagen I) 含量測定

測定有處理樣品及未處理樣品之皮膚纖維細胞，經 UVA 照射後之細胞內 及細胞所分泌至培養液之 procollagen I 含量，以評估桑椹汁及其花青素對皮 膚纖維細胞光老化之保護能力。

結果顯示，未處理樣品之皮膚纖維母細胞經 UVA 照射後，細胞內 procollagen I 降至未照射組之 24%。而先與 MJP 培養者，細胞內 procollagen I 無顯著降低；先與 50 g/mL AEMJ 培養者，細胞內 procollagen I 含量可回升 甚至高於未照射之組別 (圖二十四)。

以 UVA 照射皮膚纖維母細胞，降低其所分泌至培養液之 procollagen I 含 量。而細胞先以含 MJP 或 AEMJ 之培養液培養後再照射 UVA，其分泌至培養 液之 procollagen I 無法回升至未照射組，但無論有無照射 UVA，先與 MJP 或 AEMJ 培養者皆分泌較多 procollagen I (圖二十五、圖二十六)。由此結果與前 ROS 之結果綜合比較可推測，樣品具有降低細胞內 ROS 能力，藉由降低胞內

E. 皮膚纖維細胞 MMP-1 表現 3-rutinoside 或 cyanidin 3-glucoside 之培養液中 24h (約等於 15-60 g/mL 之 cyanidin 3-rutinoside，或 11-45 g/mL 之 cyanidin 3-glucoside)，接著以明膠酵 素電泳法 (gelatin zymography) 測定細胞 MMP-2 生成量。MMP-2 也是一種基 質金屬蛋白酶，與 MMP-1 不同之處在於，MMP-2 以分解明膠 (gelatin) 為主，

而 MMP-1 則以分解膠原蛋白 (collagen) 為主。該文獻中以 100M 之 cyanidin 3-rutinoside 或 cyanidin 3-glucoside 培養細胞 24h 後，皆可顯著降低 MMP-2 之 活性與 mRNA 表現量，與本試驗中 MJP 可降低人類皮膚纖維母細胞 MMP-1 生成量之結果相似。

圖十九、人類皮膚纖維母細胞與 MJP 培養後於 UVA 照射之存活率。

Fig. 19. Viabilities (%) of fibroblasts incubated with MJP and then irradiated with UVA.

圖二十、人類皮膚纖維母細胞與 AEMJ 培養後於 UVA 照射之存活率。

Fig. 20. Viabilities (%) of fibroblasts incubated with AEMJ and then irradiated with UVA.

圖二十一、人類皮膚纖維母細胞與 MJP 或 AEMJ 培養後之 ROS 相對產量(%)。

Fig. 21. Relative production (RP) of ROS (%) of skin fibroblasts after incubated with MJP or AEMJ.

圖二十二、人類皮膚纖維母細胞與 MJP 或 AEMJ 培養後於 UVA 照射之 ROS 相對產量(%)。

Fig. 22. Relative production (RP) of ROS (%) of skin fibroblasts incubated with MJP or AEMJ and then irradiated with UV.

圖二十三、人類皮膚纖維母細胞與 MJP 或 AEMJ 培養後於 UVA 照射 之 SOD (U/mg protein)。

Fig. 23. SOD (U/mg protein) in skin fibroblasts incubated with AEMJ or then irradiated with UVA (8 J/cm²).

圖二十四、人類皮膚纖維母細胞與 MJP 或 AEMJ 培養，再於 UVA 照 射後，細胞中 procollagen (mg/mL)含量。

Fig. 24. Procollagen (mg/mL) in skin fibroblasts incubated with AEMJ or MJP and then irradiated with UVA.

圖二十五、人類皮膚纖維母細胞與 MJP 培養，再以 UVA 照射後，細胞培養 液中 procollagen (ng/mL)之含量。

Fig. 25. Procollagen (ng/mL) in supernatants of human skin fibroblasts incubated with MJP and then irradiated with UVA (5 J/cm²).

圖二十六、人類皮膚纖維母細胞與 AEMJ 培養，再以 UVA 照射後，細胞培 養液中 procollagen (ng/mL)之含量。

Fig. 26. Procollagen (ng/mL) in supernatants of human skin fibroblasts incubated with AEMJ and then irradiated with UVA (5 J/cm²).

圖二十七、於含不同濃度 MJP 之培養液中培養後，人類皮膚纖維母 細胞中 MMP-1 表現量。

Fig. 27. MMP-1 (nU/mL) in supernatants of human skin fibroblasts incubated with MJP.