結果 ( Results )

一、 在

IV5 鼠類纖維母細胞中，薑黃素降低 Src 與 FAK 激酶活性，

並抑制細胞生長。

為篩選具抑制 Src、FAK 活性的中草藥，我們以有 v-Src 表達的 老鼠纖維母細胞（IV5）為研究材料。根據以往的研究指出，薑黃素 可以降低 Src 與 FAK 激酶活性，並抑制癌細胞增生。因此我們使用 不同濃度（20、50、100 μM ）的薑黃素對 IV5 做不同時間（24、48

小時）的處理。由Fig 1. 觀察到隨著薑黃素濃度或處理時間的增加，

總體蛋白酪胺酸（tyrosine）磷酸化有下降的趨勢，代表著 Src 與 FAK 酵素活性的降低 (Leu et al., 2003)，當薑黃素濃度為 100 μM，作用 24 小時，即可明顯降低 Src 與 FAK 蛋白活性，並降低 IV5 鼠類纖維 母細胞的生長。故後續的篩藥實驗，我們選擇以100 μM 的薑黃素處 理IV5 細胞 24 小時做為 positive control。

二、 在

IV5 鼠類纖維母細胞初步篩選 320 種中草藥對於總體蛋白酪胺

中草藥具有抑癌、抗癌的效果一直是學術界引人興趣的未知領域。

為有系統地找出可能具有治療癌症療效的中草藥，我們收集了320 種

中草藥的萃取物進行篩選。由於 Src 與其受質的 FAK，在其活性增高 下均會促進細胞增生、位移，故我們以能降低二者活性者為選取標的。

我們以1 % 的中草藥萃取物加入 IV5，處理 48 小時。我們以能降低 IV5 總體蛋白 tyrosyl phosphorylation，減少 Src Pi-Y416 與 FAK Pi-Y861 為判別標準。其間我們以 100 μM 薑黃素處理 24 小時的 IV5

做為 positive control，至於沒有任何藥物處理的 IV5 則做為 negative control。在整個篩選過程中，我們自 320 種中草藥中發現有十二種可 以有效降低IV5 總體蛋白的 tyrosyl phosphorylation。由 Fig 2. 至 Fig 11.

得到這十二種中草藥分別是 No.29、No.30、No.78、No.51、No.86、

No.139、No.195、No.232、No.249、No.250、No.273 與 No.96。

三、

12 種中草藥改變 IV5 鼠類纖維母細胞型態與個數。

因為 IV5 是 v-Src transform 鼠類纖維母細胞，亦是癌細胞的一種，

故細胞過度增生是其特徵。我們欲明瞭No.29、No.30、No.78、No.51、

No.86、No.139、No.195、No.232、No.249、No.250、No.273 與 No.96 對於癌細胞生長是否造成影響，因此在IV5 鼠類纖維母細胞加入 1%

中草藥處理48 小時後觀察細胞生長狀況。由 Fig 12. 至 Fig 17. 可知 這 12 種中草藥對於 IV5 鼠類纖維母細胞的生長有抑制的效果，其細 胞型態與沒有加藥處理的組別作比較，可發現細胞周圍的偽足消失，

外觀由原先多角形轉變成圓形，且附著能力明顯降低。

四、

12 種中草藥於 IV5 鼠類纖維母細胞中可抑制 Src 與 FAK 的蛋白

經過去的文獻指出，Src 與許多癌症生成有關，其中在結腸癌與 乳癌中已經有被證實 Src 的活化參與在其中。IV5 是 v-Src transform 鼠類纖維母細胞，在此株細胞中會過度表現活化的 Src，FAK 是 Src 的基質，故FAK 在此株細胞中也呈現過度活化的狀態，且 Src 與 FAK 均為non-receptor tyrosine kinase。由於 Src 的自體磷酸化其 Y416 可 增加其酵素活性，故我們以Src Pi-Y416 的多寡做為 Src 活性的指標。

此外，Src 可磷酸化 FAK 於其 Y576/577、861 及 925。而 FAK-Y861 的磷酸化可提高FAK 酵素活性，故我們以 FAK Pi-Y861 的多寡做為 FAK 活性的指標。我們選擇在 IV5 鼠類纖維母細胞中加入 1%的中草

藥處理48 小時；另外採用薑黃素（100 μM）做為 positive control，

處理 24 小時；以及沒有處理任何藥物的細胞做為 negative control，

三者比較其 Src 與 FAK 磷酸化程度。結果亦是上述降低 IV5 總體蛋 白 tyrosyl phosphorylation 的 12 種藥物能顯著降低 IV5 細胞的 Src Pi-Y416 與 FAK Pi-Y861，同時也降低了 Src 與 FAK 的蛋白量（Fig 18.）。