• 沒有找到結果。

(Apoptosis)或壞死(Necrosis)的現象<圖 17>。此外,在每 12 小時所觀 察的細胞數目中,隨著培養天數的增加,玻璃上細胞的數目由10.0±0.5

×103cells/cm2慢慢增加到40.8±3.3 ×103cells/cm2;ITO 上細胞的數目 由10.3±1.1 ×103cells/cm2慢慢增加到46.6±1.1 ×103cells/cm2。將每次 計算的細胞數製作成細胞生長曲線,並將玻璃組與 ITO 組的生長曲線 加以比較,我們發現兩條曲線幾乎是重疊在一起,在前二天的實驗中 並沒有顯著的差異<圖 18>。

在尋找靈敏度較佳的電極中,經幾次實驗測試,我們把每well 不 同天的阻抗測量值減去第1 天的測量值作為變化量。由於電容抗在不 同頻率時於不同天之測量值皆無明顯的變化,而電阻抗測量值有較明 顯的改變,且多在 4000Hz 有最大的測量差異,所以在接下來的實驗

中,我們都以4000Hz 之電阻抗測量值作為我們實驗之數據<圖 19>。

在不同細胞濃度下所測得的 ΔR值,於最高濃度 1×106 cells/mL 可測得平均值89.04±1.32 Ω、於最低濃度 5×102 cells/mL 測得平均值 0.11±2.45 Ω,高低值相差 88.93Ω,其可偵測最低細胞濃度約為 1×104 cells/mL<圖 22>。在不同細胞濃度下所測得的 MTT 吸光值,可於最 高濃度1×106 cells/mL 測得平均值 0.3743±0.0391、於最低濃度 5×102 cells/mL 測得平均值 0.0313±0.0017,高低值相差 0.3430,其可偵測最 低細胞濃度約為1×104 cells/mL<圖 23>。在不同細胞濃度下所測得的 WST-1 吸 光 值 , 可 於 最 高 濃 度 1×106 cells/mL 測 得 平 均 值 0.3160±0.0264 、 於 最 低 濃 度 5×102 cells/mL 測 得 平 均 值 0.1525±0.0064,高低值相差 0.1635,其可偵測最低細胞濃度約為 1×103 cells/mL<圖 24>。

若將 ΔR值與 MTT 吸光值作相關性分析,R2=0.9883,p 值小於 0.005,顯示有極高的線性相關<圖 25>。若將 ΔR值與 WST-1 吸光值 作相關性分析,R2=0.9599,p 值小於 0.001,也顯示有極高的線性相 關<圖 26>。

以我們的晶片觀測MG-63 的生長曲線,記錄長達 11 天的阻抗變 化。當細胞隨生長天數增加時,我們發現ΔR值也隨之明顯的增加,

並在第7 天達到最大值 246.00±29.35 Ω,即細胞在第 7 天時生長達到 飽和。此時 ΔR值也從第 1 天的 57.50±17.69 Ω上升至 246.00±29.35

Ω,此時為最大值,其上升的變化量為 328%;第 7 天後,細胞趨向 獻中的發現(Yeon and Park,2005)。

觀察細胞的貼附行為中,細胞從懸浮狀態慢慢沉降至晶片表面,

並貼附延展開來。ΔR值由細胞接種後從 0Ω 開始慢慢增加,到第 4 個小時達到最大值 126Ω,並趨向緩和,即所有細胞於 4 小時內貼附 且延展完成<圖 29>。

在細胞膜蛋白的偵測實驗中,利用抗體來針對細胞膜上的Integrin β1蛋白作研究。在加入不同稀釋倍數的 mouse anti-human Integrin β1 後24 小時,稀釋 100 倍的 ΔR值最高平均為 88.64±2.25Ω、稀釋 300 倍的 ΔR 值平均為 84.64±1.80Ω、稀釋 500 倍的 ΔR 值平均為 80.18±1.99Ω、不加抗體的 ΔR值為最低,平均為 78.73±2.05Ω。加入 越高濃度的 mouse anti-Integrin β1有越高的 ΔR值<圖 30>。

anti-Mouse IgG-Au)的實驗中,只加二抗的 ΔR值為最高;一抗加二抗 的 ΔR值會比只加二抗低;而只加入一抗的 ΔR值也比只加二抗低;

不加任何抗體的控制組為最低。相同的結果出現在抗體稀釋100 倍的 A 晶片<圖 31>以及抗體稀釋 50 倍的 B 晶片<圖 32>。

若將無法與細胞膜結合的抗體(rabbit anti-Rat Ig)來作比較,

anti-Rat Ig 加上帶金粒子的二抗,ΔR值反而會比只加二抗來得高<圖 33>。一抗為 anti-Integrin 時,加入二抗的 ΔR值會比只加二抗為低,

與<圖 31,32>相同。

進一步將細胞作免疫螢光染色,可以在螢光顯微鏡下清楚看到 FITC 的綠色螢光<圖 34,A>,與光學顯微鏡下的影像<圖 34,B>作比 對,可以發現螢光均勻的分佈在細胞上。

在嘗試對細胞膜 Integrin 蛋白定量的結果中,當培養的細胞濃度 越高時,可測得越高的電阻抗變化量:當初始濃度為 5×105cells/mL 時,於第48 小時測得 37Ω、2.5×105cells/mL 為 20Ω、1.2×105cells/mL 為14Ω、5×104cells/mL 為 11Ω。且細胞隨時間增生,電阻抗變化量也 隨之上升<圖 35>。到了第 48 小時,5×105cells/mL 組的螢光讀值測得 為 229.65±4.52、2.5×105cells/mL 為 224.39±3.93、1.2×105cells/mL 為 221.64±4.33、5×104cells/mL 為 217.51±4.20,即細胞越多有越多的 Integrin 蛋白<圖 36>。將所測得的電阻抗變化量(ΔR)與螢光讀值作線

性迴歸分析,發現兩者間有良好的線性相關(R2=0.9178,p<0.005)<圖 37>。

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