臺灣地區家禽場飼料污染沙門氏桿菌調查

3-2.1 試驗設計

本調查以兩階段進行，先經由前預備試驗之北部 20 場次、中部 12 場次、南部 23 場次與東部 12 場次得到場陽性率結果後，再根據農委會統計室 97 年度各地區總雞場 數得知符合統計學要求之場數後進行逢機採樣，實驗設計與流程圖請見圖二。並為因 應不同地區之雞場有相當程度的雞隻品種差異故採不同之採樣策略。

3-2.1.1 採樣策略

本研究之實施方法為因應不同地區所飼養的雞隻品種分佈差異，故採不同的採樣 策略。

(一) 北部地區

北臺灣地區包括台北縣市、新竹縣市、桃園縣、宜蘭縣、基隆市，由於此區域所 飼養的家禽種類主要以白肉雞場為主，故以白肉雞料作為調查樣本，並連續性採樣方 式於 3 至 4 個時間點進行調查。並依據 97 年度農委會第三季白肉雞場落於場規模大 於 10,000 隻的飼養戶數為 144 場，以前預備試驗之場陽性率 70 %，推論在符合 10 % 精密度、90 % 信心水準下北部採樣場次應達 41 場。

(二) 中、南部地區

包括苗栗縣、台中縣市、彰化縣、南投縣、雲林縣、嘉義縣市；南部地區則包含 台南縣市、高雄縣市、屏東縣。中南部是家禽產業之重鎮，根據農委會 97 年度第三 季統計結果，彰化縣乃全臺飼養蛋雞場數最高 (797/1637，48.7 %)、雲林縣則為全臺 肉雞飼養戶數最高 (689/4364，15.8 %)，且肉種雞場之在養數亦為全臺之冠 (748,600 /3705,802，20.2 %) 。由於中南部具備高密度的養禽場且飼養禽種較多的特性，故飼 料之採樣方法依據採樣禽種之分佈與飼養特性，採檢禽場多樣化的包括了種雞、有色

肉雞、蛋雞與白肉雞，單一時間點的隨機於各雞場選取一個雞舍進行採樣。

依據 97 年度農委會第三季中部肉雞與蛋雞場共 3,163 戶、南部 2,063 戶，與前預 備試驗之場陽性率分別為 8.7 %、7.5 %，推論在符合 10 %精密度、95 % 信賴區間之 條件下，中、南部採樣場次各應達 31、27 場次。

(三) 東部地區

包含花蓮縣、台東縣，此地區飼養禽種以有色肉雞與白肉雞為主，本調查之採樣 方法等同中南部地區以非連續追蹤式的單批單次採樣進行，由於該地區於前預備試驗 中的場陽性率為 0 % (0/12)，故引用中、南部場陽性率之平均值 8.1 %，推論在符合 10 % 精密度、95 % 信賴區間之條件下應調查 26 場次。

另因種雞場具備可達 70 週之長期飼育，且飼養期間易於不同時間點內使用一種 以上品牌飼料等特性，故針對種雞飼料於北部與中部長期調查 5 場次，以連續性採樣 作法為分別採取 5 個時間點之飼料進行檢測，時間點可分別為：1 日齡至 1 週齡間 (種 小雞料)、6 週齡以上至 12 週齡間（種中雞料）、18 週齡以上至 24 週齡間（種雞初產 料）、28 週齡以上至 30 週齡以上（種雞產蛋料）以及 30 週齡以上（種雞產蛋料），並 於每個時間點各採樣 1 至 2 次。

綜合以上各地區符合統計需求之場數，本調查之全省採樣場預期應達 130 場次，

最後實際採樣場數為 154 場次。

3-2.1.2 飼料檢體之採樣方法

於各雞場選定一雞舍進行飼料採樣，分別採取各雞舍之飼料塔（桶）、飼料斗、

飼料槽（盤）之飼料檢體，以密封袋於各個採樣點中以不同區域分散採集 3 至 5 處飼 料混合成一份飼料檢體，每個檢體至少採取約 50 g 的飼料，約 5 號密封袋三分之二滿 即可。採樣同時應紀錄各場次資料，包括飼料品牌、雞種、採樣點、採樣時間點等。

3-2.2 沙門氏桿菌之分離與鑑定

採得之飼料皆以低溫冷藏方式寄送至實驗室，未立即進行分離之檢體以低溫冷藏 保存待驗。進行實驗前先將飼料均勻混合後，取 25 克進行沙門氏桿菌之分離。根據 ISO 6579:2002 之標準選擇培養液與培養基，操作簡述如下：(1) 前培養 (非選擇性增 殖，pre-enrichment) : 將飼料置入 225 ml 之 buffered peptone water (BPW；Merck) 充 分震盪混合後培養於 37 ℃，18±2 小時；(2) 選擇性增殖 (selective enrichment) :吸取 培養後的 BPW 上層液各 0.1 ml 與 1 ml 分別加入 10 ml 之 Rapport-Vassiliadis medium with soya broth (RVS；Merck) 與 9 ml 之 Muller-Kauffmann tetrathionate / novobiocin broth (MKTTn；Merck)，分別依 41.5±1℃與 37±1 ℃下培養 24±3 小時; (3) 分離繼代 ( plating-out ) : 約 45 度角傾斜上述之培養液之培養管，以 10μl 接種環調取表面菌 液，接種於 xylose lysine deoxycholate agar (XLD；Merck) 與 brilliant-green phenol-red lactose sucrose agar (BPLS；Merck) 於 37 ±1℃下培養 24 ±3 小時。另針對飼料槽之檢 體，因經前預備試驗分離結果推論可能有較高環境常在菌的污染，故參照 ISO 6579:2002/Amd.1:2007 之方法，增加使用 CHROMagar Salmonellae medium (CAS；

CHROMagar Company, France) 進行分離。

當有可疑菌落生長時，於每個檢體挑選 3-5 個單一菌落繼代至 tryptic soy agar (TSA；Merck, USA) 後進行生化鑑定與血清型分型，請參酌 3-1.1.3。

3-2.3 統計分析方法

使用統計軟體 SAS^® system 9.1 進行數據分析，對於各項影響沙門氏桿菌分離率 的變項包括雞隻品種、區域、飼料採樣位置、飼料廠牌、培養基與培養液搭配效果等，

以卡方分析 (chi-square test) 進行單變項統計學分析，但若樣本數小於 5 時則以費雪 精確檢定 (Fisher’s exact test)進行。

第四章 結果

第一節 北臺灣地區白肉雞場污染沙門氏桿菌風險因子調查

4-1.1 前預備試驗結果

根據問卷調查回覆結果得到初步北臺灣地區白肉雞場之各項基本環境、衛生設 備、常規管理與飼養計畫之資料，也因此瞭解臺灣之養殖條件與環境與國外相當的差 異。前預備試驗採樣以連續四個時間點、配合三種採樣檢體種類執行，順利找出最適 於臺灣地區進行白肉雞場風險因子調查之採樣時間點與檢體種類，統計結果與討論詳 述於下：

(一) 雞場的基本環境條件

開放式雞場較集中於 10,000~19,999 隻規模間(6/11)，水簾式雞場則較多於 60,000 至 69,999 隻規模間(3/9)；水簾式雞場（8/9，88.9 %）可能因較常大規模生產飼育的關係，

場陽性率有高於開放式雞場（6/11，54.5 %）的趨式，但仍未達統計學上顯著差異(P

=0.0954)，詳請參酌表二。陽性場之縣市別與飼養型態分佈，分別為桃園縣市 8/13 (61.5

%)、宜蘭縣市 6/6 (100 %)，詳請參酌表三。調查場與其他雞場之距離大多有超過 300 公尺以上的距離（70 %），而雞場內各棟雞舍的距離經常在 10 公尺以內（80 %），

部分雞舍外圍有小於 2 公分的鐵絲網杜絕野鳥入侵（70 %），雞場入口大多無門鎖裝 置來控制門禁（70 %）但雞舍門總是緊閉（100 %），大多數在雞場內養寵物或或有 野貓犬鳥（85 %），而多數雞場附近沒有畜養其他種類家畜（70 %），詳請參酌表四。

(二) 雞場之衛生設備層面

調查場雞舍內皆無手部消毒器裝置（100 %），且大多數未具備鞋浴池設備（90 %），

大多數雞場未具備專用的儲藏室作為斃淘死雞隻的暫時儲存場所（75 %），雞隻飲用 水大多非自來水（70 %），工作人員用水亦同（65 %），清洗消毒雞舍使用的水源多為 地下水（70 %），大多會添加消毒劑（85 %），進雛前清潔消毒較易忽略而偏低的區域 是風扇等通風設備（55 %）;各雞場皆具備滅鼠設施，較常使用毒餌（85 %），相較之

下定期消滅蒼蠅害蟲的雞場較少（55 %），詳請見表五。

(三) 調查場的常規性管理

近半數的雞場工作人員同時在一個以上的雞場工作（45 %），工作服/鞋的清潔經常是 每日清洗（75 %）;在進入雞舍前執行率最高的是換穿雨鞋或工作長靴（85 %），確實 換穿工作服、手部消毒或洗手的執行率較低（15 %，15 %）且戴工作帽的習慣偏低（5

%），以上詳請參酌表六。

(四) 各雞場的飼養計畫

呈現較一致之處在於墊料種類全為穀糠（100 %）、不分日齡，每次進料至吃完接大約 在一週至十日內（100 %）、飼料皆為飼料廠以車輛運送並現場填充至飼料桶，故沒有 存放飼料在雞舍內的習慣（100 %）。雞場內幾乎所有雞隻採統進統出（80 %），半數 以上雞場有一個以上的種雞來源（65 %）且雛雞運送至雞舍時所使用的容器多為塑膠 籠（85 %），有少數雞場會將不同來源的雛雞飼養於同一棟雞舍內（10 %）; 於飼養 過程中最容易發生雞隻生病或死亡的階段一般認為是進雛時與出雞前兩週（65 %，45

%），當場內有不合理之死亡或發病數發生時最常見之第一處理方式是自行剖檢（70

%）;雞舍完成清潔消毒後一般間隔兩週內即再進雛（80 %），墊料的厚度大多未大於 7 公分（90 %），使用前會先移除發霉或結塊的墊料的雞場偏低（35 %），以上詳請參 酌表七。

(五) 採樣時間點與檢體種類

各採樣檢體種類佔分離菌株比例依序為雞隻/內臟(50 %)、飼料(38.5 %)、鞋套(11.5

%)，不同採樣檢體種類對於分離結果有顯著差異( p <0.05)。最常分離到沙門氏桿菌的 採樣時間點為出雞前兩週時 (46.2 %，p <0.05)。詳請參酌表八。

(6) 結論

控制措施在商業白肉雞場由於必須考量各個可能導致的污染源而顯得複雜，而影響家 禽感染沙門氏桿菌的特異性風險因子又往往與飼養之經營管理方式與衛生條件有 關，經 20 場次之前預備試驗已得到最有效採樣方法評估結果。

4-1.2 北臺灣地區調查結果整合 問卷調查

(1) 雞場的基本環境條件

針對北臺灣地區飼養規模大於 10,000 隻以上之白肉雞場進行採樣調查，調查場數 共 41 場。以雞場型態區分，開放式雞場共 14 場且較集中於 10,000~49,999 隻飼養規 模 (12/14，85.7 %)；水簾式雞場共 27 場次，較多於 30,000-99,999 隻規模間 (21/27，

77.8 %)，詳請見表九。

多數調查場之雞舍為自有而非租用 (80.0 %)，雞場入口具有需以鑰匙開啟之門鎖 (58.5 %)，雞舍形式以水簾式居多（65.9 %），約半數的水簾式為單層雞舍型態（55.6

%）; 雞場內雞舍的數量經常為 3 間以上（61.0 %），調查場與附近雞場的距離多數 大於 100 公尺 (90.2 %)，調查場內之雞舍與雞舍間距多數大於 10 公尺（70.7 %）；

近半數的雞場具有圍牆與外界隔離 (51.2 %)，部分雞舍外圍具有小於 2 公分的鐵絲網 以杜絕野禽進入 (75.6 %)；調查場與通往外面之主要道路的距離多數大於 100 公尺

（65.9 %），雞場附近 500 公尺以內經常有池塘或河流（63.4 %）；而多數雞場附近 100 公尺內沒有畜養其他種類家畜 (73.1 %)，但經常在雞場內飼養犬貓伴侶動物 (97.6

%)，但不到半數會定期的清掃雞場內的犬貓糞便 (44.0 %)，以上請見表十。

(2) 雞場的衛生設備

部分雞場在進入雞舍前有一獨立的室內空間可供工作人員更換工作服與清潔雙 手 (63.4 %)，有些雞場會定期清掃此空間 (61.0 %)。部分雞場內沒有專用儲藏室供存

放斃死之雞隻 (65.9 %)，多數雞場於雞舍入口處沒有鞋浴池 (70.7 %)，且雞舍內經常

放斃死之雞隻 (65.9 %)，多數雞場於雞舍入口處沒有鞋浴池 (70.7 %)，且雞舍內經常