本實驗中所使用之月芽藻 (Pseudokirchneriella subcapitata)，為一種單 細胞、成群體但不糾結、不能移動之綠藻 (Chlorophceae），一般細胞體積 為40-60 μm3，如圖2.4.1所示[25]。
圖 2.4.1 月芽藻之圖示[25]
典型的月芽藻體積約為45 μm3、重量10~20 pg/cell，為淡水單細胞藻類，
因體型呈半月型，故稱月芽藻，其優點有：取得容易、培養簡單、容易觀 察、生長期短、可以大量生長、具有地區代表性等實驗用的藻種需具有的 特點，並較大部分生物詴驗來的敏感[26]。此外，當培養過程中缺少營養 鹽或溫度、光線、pH、有毒物質侵害、細菌滋生等環境條件不佳時，母槽 會逐漸呈現明顯的黃綠色，故由外觀上可以容易的去判斷母槽的生長情形。
除了外觀上的判斷，利用顆粒計數器觀察其粒徑的分佈變化，若發現顆粒 數變少、大粒徑的藻類分佈變多時，則可判斷此藻種的健康情形不佳。
2.4.2 藻類生長測定方法
一般藻類生長情況之參數有下列幾種：細胞密度、細胞總體積、乾重、
葉綠素、活體內螢光值、營養基濁度、產氧量、碳源攝取量、ATP 及DNA 等參數。理想的測定方法應具備以下條件：迅速、精確、高敏感度、低偵
測極限、低成本，適合這些條件之藻類生長質量之方法有下列幾種：(1) 顯微鏡計數法 (2)電子顆粒計數法 (3)直接乾重量測法 (4)光學顆粒計數 法 (5)分光光度計測葉綠素A 法 (6)螢光光度計測葉綠素A法 (7)DNA 測 定法 (8)ATP 測定法 (9)14C 輻射標定法(10)溶氧測定法等[27]。
藻類毒性詴驗之標準方法： United States Environmental Protection Agency (U.S. EPA)[28] 、 Organization for Economic Cooperation and Development (OECD)[29] 、 International Organization for Standardization (ISO)(30)、American Society for Testing and Materials(ASTM)[31]、American Public Health Association (APHA)[32]皆於詴驗終點時，測量藻類的生物質 量。量測生物質量最直接的方法為量測生物之乾重，但耗時較久，因此利 algae acutetoxicity test"[28] 、 OECD 所 用 之 "Algal growth inhibition test guideline"[29]、ISO所用之”Water quality-algal growth inhibition test"[30]、
APHA所用之 "Toxicity testing with phyto-plankton"[32]及ASTM所用之
"Standard Guide for Conducting Static 96-h Toxicity Tests with Microalgae"[31]等。
(1) 批次式：
批次式藻類毒性詴驗為藻類暴露於毒性物質一段時間，再測其詴驗終 點，並與無暴露之控制組比較分析。實驗過程中沒有新鮮基質的加入、藻 類之代謝物移出，實驗期間藻經歷完整的成長週期，遲滯期（lag phase）、
指數生長期（exponential phase）、穩定期（stationary phase）及死亡期（death phase）。標準詴驗方法可採用U.S. EPA[9]]所制定之“Fresh Algal Acute Toxicity Test”。
類毒性詴驗，將藻類、營養基質和詴驗毒物加入300 mL的BOD 瓶，蓋子
的遮蔽效應。光照強度應為一常數，並能使藻類呈現指數生長、縮小培養 體積及維持充分的混合有助於達到理想狀態。
(3) 溫度
當溫度逐漸增加時，藻類會呈現指數生長，而當達到其最適生長溫度 後即迅速下降。本研究採用U.S. EPA建議的24℃環境下來培養藻類及進行 實驗，整個培養及詴驗過程中，溫度之變化不可大於2℃。
(4)植種數量與時間
若實驗開始時的植種數量過高，將會造成批次式實驗後期藻類細胞大 量增加造成代謝物累積及水中碳源耗盡，而導致pH升高等問題，進而影響 毒性詴驗結果。生物毒性詴驗隨著時間增加，其敏感度提高而C.V.值減少；
隨著初始植種密度減少，其敏感度提高但變異係數亦提高[5]。改變初始生 物量進行批次詴毒性詴驗，提高實驗初始生物量時，EC50值也顯著提升[38]。
在 兼 顧 兩 者 的 考 量 下 ， 選 定 最 佳 條 件 為 藻 類 初 始 植 種 密 度 1.5×104 cells/ml。
詴驗時間的長短關係到毒性詴驗的敏感性和數據結果。過長的詴驗時 間，會使得BOD瓶內的營養鹽不足，而有藻類有死亡的現象；過長的詴驗 期間，也會使得毒性的反應消失。一般標準的藻類毒性詴驗為96小時，但 有鑑於前述之缺點，因此本研究所選定的時間縮短為48小時。