蛋白質含量測定

CCT GCG G-3’) (Blossom Biotechnologies Inc., Taipei, Taiwan) ( Liu,2009)，1 μl 的 1 μM ITS 4 引 子 (5’-TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3’) (Blossom Biotechnologies Inc., Taipei, Taiwan) (Liu, 2009)，0.01 μl 的 TaqPlusprecision^TM 聚 合酶酵素 (Violet Bioscience, Taipei, Taiwan)，最後添加無菌水，使其最終體積為 30 μl。PCR 反應器的設定如下：預熱反應為 94 ℃ 加熱 5 分鐘，循環反應為 94

℃，60 秒；58 ℃，45 秒；72 ℃，45 秒。此條件循環 30 次，最後再以 72 ℃ 反應 10 分鐘。將所得到 PCR 產物注入於由 0.5 倍的 Tris-acetate-EDTA (TAE) 緩衝溶液與洋菜凝膠粉 (agarose-LE 1200) (Taiwan Agar-Agar, Chiayi, Taiwan) 配 製的 1 % 洋菜凝膠。以 16.67 v cm^-1 條件進行電泳分離。待 DNA 電泳分離後， (Whatman International, England) 過濾。準備 6.25、3.13、1.56、0.78、0.39 及 0.2 μg μl^-1 的小牛血清蛋白 (bovine serum albumin, BSA) 溶液作為標準蛋白溶液。各 取 1 μl 不同濃度的標準蛋白溶液或待偵測蛋白質溶液，分別與 200 μl 的染色試 劑溶液均勻混合，靜置反應 7 分鐘，取出混合液偵測吸光值 (O.D.595)。把標準 蛋白溶液的吸光值對蛋白質濃度作圖，計算出回歸直線公式，再將待偵測蛋白質 溶液的吸光值代入，以內插法算出其蛋白質溶液濃度。

13 搖晃 5 分鐘。將二次抗體 (Peroxidase conjugated affinity purified anti-rabbit IgG [Goat]) (Rockland Immunochemicals,Gilbertsville,USA) 以 1,000 倍稀釋於 1 % 阻圔試劑 (Blocking reagent) 緩衝液，再將轉印膜浸泡於此溶液中並搖晃 60 分 鐘。以磷酸鹽洗滌 (PBS-Tween 20, PBST) 緩衝液清洗 3 次，每次搖晃 5 分鐘。

3. 冷光呈色

將已轉印蛋白的轉印膜利用 Western Lightning^TM Chemiluminescence Reagent Plus Kit (PerkinElmer, USA)， 將 1 ml Western Bright ECL Luminol / enhancer solution 和 1 ml Western Bright Peroxide Chemiluminescent peroxide solution 混 合 均 勻，添 加 至 轉印膜靜置 1 分鐘，利用 Kodak X-Omat Blue Autoradiography Film (Kodak, USA)，覆蓋於轉印膜呈色 1 分鐘，取出浸泡 於 4.5 稀釋的顯影劑 (Kodak, USA) 1 分鐘，取出浸泡於 4.5 稀釋的定影劑

14

15

菌絲塊，放置於馬鈴薯培養，根據真菌的生長速率不同，將培養於 LB 培養基 的芽孢桿菌 HS1 和 HS2 加到距離菌絲塊 1.5-2.5 cm 處，進行芽孢桿菌的對峙 培養，其他液態藥劑則以 10 μl 的體積，添加到濾紙錠之方式進行測試，以 8、

12、16 和 24 小時為相異的時間間距，紀錄真菌生長情形。

2. 孢子接種

利用炭疽病菌培養於 1/5 PDA 斜面培養基 28 ℃ 30 天後，以無菌水清洗 獲得孢子後，使用血球計數器計算孢子濃度，以無菌水稀釋，接種於以 75 % 酒 精表面消毒後，使用 0.0025 % 界面活性劑 (Silwet L-77) 破壞葉面角質層的番 荔枝葉片，保濕培養觀察，以感染面積將接種後葉片分級，感染面積 0 % 為 0 級、

10 % 以下感染面積為 1 級、30 % 以下為 2 級、50 % 以下為 3 級和感染面 積達 50 % 以上為 4 級 (附錄 13)。

陸、 田間病害調查

以病害感染面積將田間葉片分級，感染面積 0 % 為 0 級、25 % 以下感染 面積為 1 級、50 % 以下為 2 級、75 % 以下為 3 級和感染面積達 75 % 以上 為 4 級 (附錄 14)。

16 Botryosphaeria sp.) 真菌相似度達到 99-100 %，編號分別為：L-1 (BR-2-2)、L-2 (BR-2-4)、L-3 (BR-2-7) 與 L-4 (BR-5-3) (附錄 6)，綜合上述研究結果顯示，在本

17 Pentachloronitrobenzene (PCNB)、Ampicillin (Amp)、Rifamycin (Rif) 等藥劑來發 展具有選擇性的培養基，實驗結果發現這 5 株病原菌在含有 5ppm PCNB、100

18

19

20

21 (1-36-2)、C. g-2 (1-39-1)、C. g-3 (7-g 3-3)、黑潰瘍病菌 P-1 (1-33-1)、P-2 (5-2-4)、

黑腐病菌分離株 L-1 (BR-2-2)、L-2 (BR-2-4)、L-3 (BR-2-7) 與 L-4 (BR-5-3) 沒

22

23

黑潰瘍病菌 P-1 (1-33-1)、P-2 (5-2-4)、黑腐病菌 L-1 (BR-2-2)、L-2 (BR-2-4)、L-3 (BR-2-7) 與 L-4 (BR-5-3) 則均沒有明顯抑制菌絲生長的作用 (圖 17、附錄 11)。

24

25

26

27

28

29 小叢殼屬 (Colletotrichum gloeosporioides) 病原菌、兩株形成黑潰瘍病害的擬莖 點黴屬 (Phomopsis sp.) 真菌與四株引起黑腐病害的毛球雙孢菌屬

芒果、柑橘、酪梨、香蕉和辣椒等多年生作物 (Marulanda, Lopez, Isaza, & Lopez, 2014; Than et al., 2008)，炭疽病菌也對採收後 (postharvest) 作物造成嚴重危害 同的感染能力 (Barcelos, Pinto, Vaillancourt, & Souza, 2014)。

30

Damm, 2012)。在抗生素抑制菌絲生長測試結果，發現 PCNB、Ampicillin 和 Rifamycillin 抗生素對這五株真菌皆無抑制作用，根據之前研究的結果發現 PCNB 主要是用來抑制木黴菌屬 (Trichoderma sp) 的真菌 (Williams, Clarkson, Mills, & Cooper, 2003)，而 Ampicillin 和 Rifamycillin 多數是用來抑制葛蘭氏陰 性細菌 (Akova, 2008; Campbell et al., 2001)，因此對炭疽病菌沒有抑制菌絲生長 的效果，但是可以藉由 Ampicillin 和 Rifamycillin 的效果去除多數的細菌性微

31 究結果相同 (李惠鈴，1998)。而在本研究中還有發現黑腐病菌 (Lasiodiplodia sp.)，

可以造成番荔枝葉部與其他植物莖部的感染，在前人的研究中，也發現這個菌屬 的病原菌可以造成不同的植物部位，如：芽點、莖部和果實的傷害 (Abdollahzadeh, Javadi, Mohammadi Goltapeh, Zare, & Phillips, 2010)，且宿主範圍也非常廣泛，如：

龍舌蘭、薔薇、懸鉤子、桃樹、芒果、葡萄、莓果、白蠟樹、鐵木、胡楊、橄欖、

雲杉、柳樹、紫檀、苦参和櫟樹 (Phillips et al., 2013)、相思樹 (Slippers et al., 2014)、

柑橘、桃、酪梨、松木 (Burgess, Mohali & Wingfield, 2005) 等作物。在菌絲生長 溫度測試的結果發現這四株黑腐病菌生長在 PDA 培養基的溫度範圍是 22-37

℃，而在高溫環境 L-1 (BR-2-2) 和 L-4 (BR-5-3) 受到的抑制影響較小於 L-2 (BR-2-4) 和 L-3 (BR-2-7)，此結果與前人對 Lasiodiplodia sp. 的研究結果相似，

在該研究結果顯示 Lasiodiplodia sp. 的生長溫度範圍可在 5-35 ℃ 之間

(Slippers et al., 2014)，在菌絲生長方面的結果顯示 Lasiodiplodia sp. 的生長速率 非常快速，在 28 ℃ 黑暗培養時，兩天即可長滿 9 cm 培養皿，此結果與番荔 枝黑腐病菌的研究結果相似 (李惠鈴，1998)。

32

其他在本實驗尚未發現的病害有：細菌型病害的青枯病 (Ralstonia

solanacearum)、主要發生於冬季低溫的番荔枝輪斑病（Cristulariella sp.）、在果 實為害的疫病 (Phytopthora sp.) 和在根莖部感染的赤衣病 (Corticium

salmonicolor)、褐根病 (Phellinus noxius) 和根朽病 (Ganoderma applanatum) (黃，

2012)，雖然在實驗過程中未分離到上述病害的病原菌，但在番荔枝田間病害年

33 子是具有傳遞訊號與加厚細胞壁的能力 (Waldmann, Jeblick, & Kauss, 1988)，以 促進番荔枝提升離子滲漏率，這代表植物的過敏性反應被啟動，是與之前的研究 中發現的現象相似，當植物感受到逆境時，會產生過敏性反應，利用鬆散細胞膜，

促使部分細胞死亡導致離子滲漏率被高度提升 (Programmed cell death, PCD) (Choi & Hwang, 2015)，有研究發現出現離子滲漏率提升的訊號是可以誘導植物 產生過氧化物 (Ngo, Vogler, Lituiev, Nestorova, & Grossniklaus, 2014)。但本實驗 發現鈣離子對番荔枝體內的過氧化氫含量沒有促進的效果，也導致 POD 活性不

34 (Kim, Li, & Kolattukudy, 1998)，因此複合性的植物保護添加劑，才無法具有抑制 孢子發芽的效果。因此將兩種植物保護添加劑處理番荔枝葉錠後，提升番荔枝的 抗性反應來抑制炭疽病菌的孢子感染，NTTU 001 可以降低 41 % 的感染率、

NTTU 002 則可以降低 64 %，兩種植物保護添加劑的效果相較之下，以 NTTU 002 效果好於 NTTU 001。

35

36

37

第五章、 參考文獻

（一） 中文部分

安寶貞、蔡志濃、胡瓊月與鄭秀芳 (2006) 。抑制三種果樹炭疽病菌之化學藥劑 篩選。Plant Pathology Bulletin, 15, 39-54.

李惠鈴 (1995) 。台灣農家要覽農作篇。第 3 版。臺灣：葉瑩 (頁 101) 。 and ornamental trees caused by Phellinus noxiusin Taiwan. Plant Pathology Bulletin, 8, 51-60.

38

Aamir, J., Kumari, A., Khan, M. N., & Medam, S. K. (2013). Evaluation of the

Combinational Antimicrobial Effect of Annona Squamosa and Phoenix Dactylifera Seeds Methanolic Extract on Standard Microbial Strains.

International Research Journal of Biological Sciences, 2(5), 68-73.

Alahakoon, P. W., & Brown, A. E. (1994). Host range of Colletotrichum

gloeosporioides on tropical fruit crops in Sri Lanka. International Journal

of Pest Management, 40, 23-26.

Abdollahzadeh, J., Javadi, A., Mohammadi Goltapeh, E., Zare, R., & Phillips, A. J.

(2010). Phylogeny and morphology of four new species of Lasiodiplodia from Iran. Persoonia, 25, 1-10.

Akova, M. (2008). Sulbactam-containing beta-lactamase inhibitor combinations. Clin Microbiol Infect, 14 Suppl 1, 185-188.

Avdeeva, L. V., Dragovoz, I. V., Korzh Iu, V., Leonova, N. O., Iutinskaia, G. A., Berezhnaia, A. V., Kolomiets, E. I. (2014). [Antagonistic activity of Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum IMV B-7404 and BIM B-439D strains towards pathogenic bacteria and micromycetes]. Mikrobiol Z, 76(6), 27-33.

Babalola, O. O. (2010). Beneficial bacteria of agricultural importance. Biotechnol Lett, 32(11), 1559-1570.

Burgess, T. I., Mohali, S. & Wingfield, M. J. (2005). Diversity and host association of the tropical tree endophyte Lasiodiplodia theobromae revealed using simple sequence repeat markers. Path. 35, 385–396.

Bussaman, P., Namsena, P., Rattanasena, P. & Chandrapatya, A. (2012). Effect of Crude Leaf Extracts on Colletotrichum gloeosporioides (Penz.) Sacc. Psyche.

1, 1-6.

39

Barcelos, Q. L., Pinto, J. M., Vaillancourt, L. J., & Souza, E. A. (2014).

Characterization of Glomerella strains recovered from anthracnose lesions on common bean plants in Brazil. PLoS One, 9(3)

Campbell, E. A., Korzheva, N., Mustaev, A., Murakami, K., Nair, S., Goldfarb, A., &

Darst, S. A. (2001). Structural mechanism for rifampicin inhibition of bacterial rna polymerase. Cell, 104(6), 901-912.

Choi, H. W., & Hwang, B. K. (2015). Molecular and cellular control of cell death and defense signaling in pepper. Planta, 241(1), 1-27.

Choudhary, D. K., Prakash, A., & Johri, B. N. (2007). Induced systemic resistance (ISR) in plants: mechanism of action. Indian J Microbiol, 47(4), 289-297.

Dark, A., Demidchik, V., Richards, S. L., Shabala, S., & Davies, J. M. (2011). Release of extracellular purines from plant roots and effect on ion fluxes. Plant Signal Behav, 6(11), 1855-1857.

del Rio, L. A., Sandalio, L. M., Corpas, F. J., Palma, J. M., & Barroso, J. B. (2006).

Reactive oxygen species and reactive nitrogen species in peroxisomes.

Production, scavenging, and role in cell signaling. Plant Physiol, 141(2), 330-335.

Deshmukh, A. B., & Patel, J. K. (2011). Aqueous extract of Annona squamosa (L.) ameliorates renal failure induced by 5/6 nephrectomy in rat. Indian J Pharmacol, 43(6), 718-721.

Dolai, S., Yadav, R. K., Pal, S., & Adak, S. (2009). Overexpression of mitochondrial Leishmania major ascorbate peroxidase enhances tolerance to oxidative stress-induced programmed cell death and protein damage. Eukaryot Cell, 8(11), 1721-1731.

Ger, M. J., Louh, G. Y., Lin, Y. H., Feng, T. Y., & Huang, H. E. (2014). Ectopically expressed sweet pepper ferredoxin PFLP enhances disease resistance to

40

Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum affected by harpin and protease-mediated hypersensitive response in Arabidopsis. Mol Plant Pathol, 15(9), 892-906.

Gaikwad, A. P., Sawant, D. M. & Nimbalkar, C. A. (2005). Perennation of

Colletotrichum gloeosporioides, a causal agent of anthracnose of custard apple.

Indian Phytopath. 58(2), 237-239

Gong, M., Wang, J. D., Zhang, J., Yang, H., Lu, X. F., Pei, Y., & Cheng, J. Q. (2006).

Study of the antifungal ability of Bacillus subtilis strain PY-1 in vitro and identification of its antifungal substance (iturin A). Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai), 38(4), 233-240.

Guo, S., Li, X., He, P., Ho, H., Wu, Y., & He, Y. (2015). Whole-genome sequencing of Bacillus subtilis XF-1 reveals mechanisms for biological control and multiple beneficial properties in plants. J Ind Microbiol Biotechnol.

Hanke, G., & Mulo, P. (2013). Plant type ferredoxins and ferredoxin-dependent metabolism. Plant Cell Environ, 36(6), 1071-1084.

Huang, H. E., Liu, C. A., Lee, M. J., Kuo, C. G., Chen, H. M., Ger, M. J., Feng, T. Y.

(2007). Resistance enhancement of transgenic tomato to bacterial pathogens by the heterologous expression of sweet pepper ferredoxin-I protein.

Phytopathology, 97(8), 900-906.

Katz, E., & Demain, A. L. (1977). The peptide antibiotics of Bacillus: chemistry, biogenesis, and possible functions. Bacteriol Rev, 41(2), 449-474.

Kempf, K., Herder, C., Erlund, I., Kolb, H., Martin, S., Carstensen, M., Tuomilehto, J.

(2010). Effects of coffee consumption on subclinical inflammation and other risk factors for type 2 diabetes: a clinical trial. Am J Clin Nutr, 91(4), 950-957.

Kim, Y. K., Li, D., & Kolattukudy, P. E. (1998). Induction of Ca2+-calmodulin signaling by hard-surface contact primes Colletotrichum gloeosporioides

41

conidia to germinate and form appressoria. J Bacteriol, 180(19), 5144-5150.

Kadir, J. B., Mahmodi, F., Puteh, A., Pourdad, S. S., & Soleimani, N. (2014). Genetic Diversity and Differentiation of Colletotrichum spp. Isolates Associated with Leguminosae Using Multigene Loci, RAPD and ISSR. Plant Pathol J. 30(1),

Kumar, S. N., Nambisan, B., & Mohandas, C. (2014). Purification and identification of two antifungal cyclic dipeptides from Bacillus cereus subsp. thuringiensis associated with a rhabditid entomopathogenic nematode especially against Fusarium oxysporum. J Enzyme Inhib Med Chem, 29(2), 190-197.

Liau, C. H., Lu, J. C., Prasad, V., Hsiao, H. H., You, S. J., Lee, J. T., Chan, M. T.

(2003). The sweet pepper ferredoxin-like protein (pflp) conferred resistance against soft rot disease in Oncidium orchid. Transgenic Res, 12(3), 329-336.

Lin, A., Wang, Y., Tang, J., Xue, P., Li, C., Liu, L., Chu, C. (2012). Nitric oxide and protein S-nitrosylation are integral to hydrogen peroxide-induced leaf cell death in rice. Plant Physiol, 158(1), 451-464.

Ma, F., Lu, R., Liu, H., Shi, B., Zhang, J., Tan, M., Jiang, M. (2012). Nitric oxide-activated calcium/calmodulin-dependent protein kinase regulates the abscisic acid-induced antioxidant defence in maize. J Exp Bot, 63(13), 4835-4847.

Marulanda, M. L., Lopez, A. M., Isaza, L., & Lopez, P. (2014). Microsatellite isolation and characterization for Colletotrichum spp, causal agent of anthracnose in Andean blackberry. Genet Mol Res, 13(3), 7673-7685.

42

Mehmood, M. A., Latif, M., Hussain, K., Gull, M., Latif, F., & Rajoka, M. I. (2015).

Heterologous expression of the antifungal beta-chitin binding protein CBP24 from bacillus thuringiensis and its synergistic action with bacterial chitinases.

Protein Pept Lett, 22(1), 39-44.

Mehta, R., Arya, R., Goyal, K., Singh, M., & Sharma, A. K. (2013). Bio-preservative and therapeutic potential of pediocin: recent trends and future perspectives.

Recent Pat Biotechnol, 7(3), 172-178.

Namukwaya, B., Tripathi, L., Tripathi, J. N., Arinaitwe, G., Mukasa, S. B., &

Tushemereirwe, W. K. (2012). Transgenic banana expressing Pflp gene confers enhanced resistance to Xanthomonas wilt disease. Transgenic Res, 21(4), 855-865.

Ngo, Q. A., Vogler, H., Lituiev, D. S., Nestorova, A., & Grossniklaus, U. (2014). A calcium dialog mediated by the FERONIA signal transduction pathway controls plant sperm delivery. Dev Cell, 29(4), 491-500.

Niu, D. D., Liu, H. X., Jiang, C. H., Wang, Y. P., Wang, Q. Y., Jin, H. L., & Guo, J. H.

(2011). The plant growth-promoting rhizobacterium Bacillus cereus AR156 induces systemic resistance in Arabidopsis thaliana by simultaneously activating salicylate- and jasmonate/ethylene-dependent signaling pathways.

Mol Plant Microbe Interact, 24(5), 533-542.

Patui, S., Peresson, C., Braidot, E., Tubaro, F., Colussi, A., Bonnlander, B., . . . Vianello, A. (2007). Lipoxygenase distribution in coffee (Coffea arabica L.) berries. J Agric Food Chem, 55(20), 8223-8230.

Prusky,D. (1996). Pathogen quiescence in postharvest diseases. Annu Rev Phytopathol. 34, 413-434.

Phillips, A. J., Alves, A., Abdollahzadeh, J., Slippers, B., Wingfield, M. J., Groenewald, J. Z., & Crous, P. W. (2013). The Botryosphaeriaceae: genera and

43

species known from culture. Stud Mycol, 76(1), 51-167.

Ranf, S., Eschen-Lippold, L., Frohlich, K., Westphal, L., Scheel, D., & Lee, J. (2014).

Microbe-associated molecular pattern-induced calcium signaling requires the receptor-like cytoplasmic kinases, PBL1 and BIK1. BMC Plant Biol, 14(1),

Soltani, J., Haghighi, M. Y. P. & Nazeri, S. (2014). Light, temperature, and aging dependent vegetative growth and sporulation of Colletotrichum

gloeosporioides on different culture media. J. Med. Plants Res. 8(4),208-216.

Slippers, B., Roux, J., Wingfield, M. J., van der Walt, F. J., Jami, F., Mehl, J. W., &

Marais, G. J. (2014). Confronting the constraints of morphological taxonomy in the Botryosphaeriales. Persoonia, 33, 155-168.

Stiles, M. E. (1996). Biopreservation by lactic acid bacteria. Antonie Van Leeuwenhoek, 70(2-4), 331-345.

Sugimoto, K., Okegawa, Y., Tohri, A., Long, T. A., Covert, S. F., Hisabori, T., &

Shikanai, T. (2013). A single amino acid alteration in PGR5 confers resistance to antimycin A in cyclic electron transport around PSI. Plant Cell Physiol, 54(9), 1525-1534.

Than, P. P., Prihastuti, H., Phoulivong, S., Taylor, P. W., & Hyde, K. D. (2008). Chilli anthracnose disease caused by Colletotrichum species. J Zhejiang Univ Sci B, 9(10), 764-778.

Vasconcelos, E. A., Santana, C. G., Godoy, C. V., Seixas, C. D., Silva, M. S., Moreira, L. R., Grossi-De-Sa, M. F. (2011). A new chitinase-like xylanase inhibitor

44

protein (XIP) from coffee (Coffea arabica) affects Soybean Asian rust (Phakopsora pachyrhizi) spore germination. BMC Biotechnol, 11, 14.

Velasco, P., Lema, M., Francisco, M., Soengas, P., & Cartea, M. E. (2013). In vivo and in vitro effects of secondary metabolites against Xanthomonas campestris pv. campestris. Molecules, 18(9), 11131-11143.

Waldmann, T., Jeblick, W., & Kauss, H. (1988). Induced net Ca(2+) uptake and callose biosynthesis in suspension-cultured plant cells. Planta, 173(1), 88-95.

Wang, J., Zhao, D., Liu, Y., Ao, X., Fan, R., Duan, Z., Wan, Y. (2014). [Antagonism against Beauveria bassiana by lipopeptide metabolites produced by entophyte Bacillus amyloliquefaciens strain SWB16]. Wei Sheng Wu Xue Bao, 54(7), 778-785.

Weir, B. S., Johnston, P. R., & Damm, U. (2012). The Colletotrichum gloeosporioides species complex. Stud Mycol, 73(1), 115-180.

Williams, J., Clarkson, J. M., Mills, P. R., & Cooper, R. M. (2003). A selective medium for quantitative reisolation of Trichoderma harzianum from Agaricus bisporus compost. Appl Environ Microbiol, 69(7), 4190-4191.

Winterberg, B., Du Fall, L. A., Song, X., Pascovici, D., Care, N., Molloy, M., Solomon, P. S. (2014). The necrotrophic effector protein SnTox3 re-programs metabolism and elicits a strong defence response in susceptible wheat leaves.

BMC Plant Biol, 14, 215.

Yang, Y. X., Wang, M. M., Yin, Y. L., Onac, E., Zhou, G. F., Peng, S., Zhou, Y. H.

(2015). RNA-seq analysis reveals the role of red light in resistance against Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000 in tomato plants. BMC Genomics, 16, 120.

45

46

47

48

49

50

圖 1、5 株炭疽病菌 C. gloeosporioides 分離株之菌絲外觀。採摘於台東地區第 1、

7 和 53 號番荔枝園區之罹病葉片，分離培養於水培養基、在 28 ℃培養 2 天 後，移至馬鈴薯培養基、在 28 ℃培養 2 天後，拍照觀察，(A) C. g-1 (1-36-2)、

(B) C. g-2 (1-39-1)、(C) C. g-3 (7-g 3-3)、(D) C. g-4 (53-1-2) 和(E) C. g-5 (53-3-5) 。 每組處理 5 重複 (n = 5) 。

51

圖 2、溫度對 5 株炭疽病菌 C. gloeosporioides 分離株之影響。將病原菌株培養 於 PDA 培養基 28 ℃ 2 天後，取(A) C. g-1 (1-36-2)、(B) C. g-2 (1-39-1)、(C) C.

g-3 (7-g3-3)、(D) C. g-4 (53-1-2) 和 (E) C. g-5 (53-3-5) 分離株之直徑 0.8 cm 菌 絲塊放置於 PDA 培養基，將培養基置於 22、28 和 37 ℃培養箱，每隔 12 小 時記錄其菌絲生長速度，每處理 4 重複(n=4)，利用 SPSS 軟體經由 Duncan 氏 檢定法分析(p＜0.05)，星號(*) 代表現統計分析具顯著差異。

52

圖 3、4 株炭疽病菌 C. gloeosporioides 分離株之孢子外觀型態。將炭疽病菌分離 株(A) C.g-1 (1-36-2)、(B) C.g-3 ( 7-g3-3)、(C) C.g-4 (53-1-2) 和(D) C.g-5 (53-3-5) 培養於 1/5 倍馬鈴薯培養基，在 28 ℃培養 30 天後，利用無菌水處理獲得孢

圖 3、4 株炭疽病菌 C. gloeosporioides 分離株之孢子外觀型態。將炭疽病菌分離 株(A) C.g-1 (1-36-2)、(B) C.g-3 ( 7-g3-3)、(C) C.g-4 (53-1-2) 和(D) C.g-5 (53-3-5) 培養於 1/5 倍馬鈴薯培養基，在 28 ℃培養 30 天後，利用無菌水處理獲得孢

在文檔中 利用硫鐵蛋白誘導型芽孢桿菌及農業 (頁 28-0)