觀察 C6 神經膠瘤細胞對粒線體相關轉錄因子基因表現之

由以上實驗結果得知多元不飽合脂肪酸處理可降低粒線體膜電位的 喪失，因此進一步探討多元不飽和脂肪酸是否會影響上游調控粒線體之 轉錄因子 Tfam 及 PGC-1α啟動子之轉錄活性及基因表現之影響。

(一) 投予多元不飽和脂肪酸對 C6 神經膠瘤細胞轉錄因子基因表現影響 觀察處理多元不飽和脂肪酸 24 小時，並以轉染 pGL3-basic 做為負控 制組。藉由報導基因分析，負控制組之 luciferase 活性為控制組之 0.01 ± 0.35 倍。

首先觀察 PGC-1α啟動子活性結果，在二十碳五烯酸組之 luciferase 活性部分發現25 μM、50 μM、100 μM 分別為控制組 1.56 ± 0.20、1.60 ± 0.21、1.83 ± 0.21 倍 (圖 20A)，顯示給予二十碳五烯酸處理其 PGC-1α啟

動子活性皆顯著高於控制組。在二十碳四烯酸組之部分亦發現 25 μM、

50 μM、100 μM 分別為控制組 1.75 ± 0.20、1.69 ± 0.21、1.62 ± 0.21 倍 (圖 20A)，其結果與二十碳五烯酸組相似。

在 Tfam 啟動子活性結果方面，投予二十碳五烯酸之 luciferase 活性，

25 μM、50 μM、100 μM 則分別為控制組 2.19 ± 0.37、1.88 ± 0.19、1.72 ± 0.22 倍 (圖 20B)，其 Tfam 啟動子活性皆顯著高於控制組。

在二十碳四烯酸組之結果方面，顯示 25 μM、50 μM、100 μM 其 luciferase 活性相較於控制組分別為 1.84 ± 0.16、2.11 ± 0.06、1.06 ± 0.08

倍 (圖 20B)，由結果得知 25 μM、50 μM 組別顯著高於控制組，而 100 μM 則無顯著差異。

(二) Pre-treatment 組對於 C6 神經膠瘤細胞轉錄因子基因表現之影響 將細胞轉染 PGC-1α之報導質體，再預先處理多元不飽和脂肪酸，之 後進行 ceramide 傷害。結果顯示 ceramide 組與控制組相較為 1.15 ± 0.20 倍，且無顯著差異 (圖 21A)，顯示處理 ceramide 不影響 PGC-1α啟動子 之活性。而預處理二十碳五烯酸之組別，在預先處理25 μM 與控制組相 較為 1.32 ± 0.11 倍，與控制組相較無顯著差異。而預先處理 50 μM、100 μM 為控制組之 1.58 ± 0.20、2.52 ± 0.18 倍 (圖 21A)，表示其 PGC-1α轉 錄活性顯著高於控制組。接著觀察二十碳四烯酸組之結果，發現預先處 理25 μM、50 μM 為控制組之 1.11 ± 0.09、1.49 ± 0.05 倍 (圖 21A)，與控 制組皆無顯著差異。而預先處理 100 μM 為控制組之 1.82 ± 0.20，且 PGC-1α轉錄活性顯著高於控制組。

利用細胞轉染 Tfam 啟動子之報導質體，再預先處理多元不飽和脂肪 酸 24 小時。由結果發現，ceramide 組與控制組相較為 0.53 ± 0.28 倍，但 無顯著差異 (圖 21B)，顯示 ceramide 之傷害不影響 Tfam 啟動子之活性。

而預先處理二十碳五烯酸之組別，顯示預先處理 25 μM、50 μM 時，

luciferase 活性為控制組之 8.58 ± 0.24、11.03 ± 0.46 倍 (圖 21B)，則顯示 其 Tfam 之轉錄活性明顯高於控制組。在二十碳四烯酸組之結果顯示，預

先處理25 μM、50 μM、100 μM 之 luciferase 活性與控制組相較分別為 2.60

± 0.19、2.92 ± 0.45、2.74 ± 0.40 倍 (圖 21B)，且 Tfam 啟動子活性皆顯著 高於控制組。

在 Tfam 蛋白質表現結果部分，結果顯示 ceramide 組與控制組相較為 1.03 ± 0.59 倍 (圖 21C)，且無顯著差異。觀察預處理二十碳五烯酸組發 現，預先處理50 μM 其蛋白質表現量為控制組之 3.63 ± 0.36 倍。而濃度 25 μM 與 100 μM 之二十碳五烯酸 (圖 21C)，與控制組相較雖無顯著差異

但具有上升的趨勢。另外再二十碳四烯酸組之結果，預處理濃度 25 μM

與50 μM 其蛋白質表現為控制組之 1.72 ± 0.54、1.90 ± 0.29 倍，與控制組 相較雖無顯著差異但亦有上升的情形。然而給予100 μM 之二十碳四烯酸 與控制組無顯著差異 (圖 21C)。

(三) Co-treatment 組對於 C6 神經膠瘤細胞轉錄因子基因表現之影響 觀察 PGC-1α蛋白質表現之結果，發現 ceramide 組與控制組相較為 0.79 ± 0.34 倍 (圖 22A)。而同時投予二十碳五烯酸組之結果，顯示處理 25 μM、50 μM、100 μM 蛋白質表現分別為控制組之 5.86 ± 1.18、6.06 ± 1.33、5.65 ± 0.96 倍 (圖 22A)。另外二十碳四烯酸組之結果，發現處理 25 μM、50 μM、100 μM 蛋白質表現分別為控制組之 2.03 ± 1.35、1.09

±0.97、1.46 ± 1.17 倍 (圖 22A)。

接著觀察 Tfam 啟動子之報導質體部分，首先觀察二十碳五烯酸組之

結果，發現處理25 μM、50 μM、100 μM luciferase活性為控制組之 4.58 ± 0.04、3.76 ± 0.09、1.85 ± 0.37 倍 (圖 22B)，表示二十碳五烯酸之介入其 Tfam 之轉錄活性顯著高於控制組。在二十碳四烯酸組之結果，投予 25 μM、50 μM 其 luciferase 活性顯著增加為控制組之 3.98 ± 0.14、2.73 ± 0.25 倍 (圖 22B)。顯示其 Tfam 之轉錄活性較高於控制組之情形。而 100 μM 之 二十碳四烯酸處理後，與控制組相較無顯著差異 (圖 22B)。