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使用天然物和它們的衍生物當做治療的藥劑，其歷史來源已經不可考。事 實上，已經有許多天然物對骨質具有有益的效用（Putnam et al, 2007）。例如前文 所述之 emodin（Lee et al, 2008）、icariine（Yin et al, 2007）、resveratrol（Patrice et al, 2005）和 daidzein（Pan et al, 2005）等，都具有直接刺激造骨細胞的增生和分
化作用。本實驗所使用的中草藥為冇骨消（SF），是忍冬科接骨木屬的植物，屬
osteoprotegerin (OPG)、鹼性磷酸酶(ALP)，而且 OPN 和 ALP 與骨基質成熟與礦 化的過程相關性極高。
ALP 為造骨細胞的一個表現指標，礦化過程的基本酵素，ALP 的活性增加 表示造骨細胞的分化能力增加。所以本實驗首先將冇骨消的氯仿層萃取物做 ALP activity assay。實驗發現 SF-C 在 ALP 的增長上最為明顯，並且以細胞存活率來 看，在濃度 1、5、10、15、20、25μg/ml 幾乎毫無細胞毒性的殺傷力。隨著作 用濃度的增加 ALP 的表現也隨之增加，10μg/ml 的 SF-C 具有增強 2 倍 ALP 活 性的能力。SF-C-5, C-6, C-7 三個有效作用分劃物發現，SF-C-5 在濃度 2.5μg/ml 具有增加 ALP 的作用；SF-C-6 同樣在 10μg/ml 具有明顯的增加 ALP 活性的能力；
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SF-C-7 則在 20μg/ml 有明顯的 ALP 活性反應，但是卻有細胞毒性的產生。或許 這暗示著 SF-C 增加 ALP 活性作用的能力是這三個分劃物綜合起來的作用。然而 分離純化 SF-C-6 同樣得到三個有效作用的次分劃物, SF-C-6-4、SF-C-6-5、
SF-C-6-6 其有效作用濃度皆集中在 10μg/ml 以上，但在細胞存活率偵測中都有 細胞毒性的抑制作用。
OPN 是一種酸性蛋白質，出現在造骨細胞的晚期分化階段，可以使造骨細 胞吸附氫氧化磷酸鈣（Young et al, 1992），具有與鈣結合的能力，可沉澱骨質。
OPG 是一個可溶性的蛋白質可以抑制蝕骨細胞的形成和骨蝕損作用，以及可以調 節骨密度和骨質量（Simonet et al, 1997），然而 OPG 扮演一個誘餌接受器，可以 阻止 RANKL 結合到 RANK 上。RANKL 已經被確認為是調節蝕骨細胞生成作用 和骨蝕損作用的重要角色，隨後，RANKL 也被指出能夠結合並活化跨膜接受器 RANK（Anderson et al, 1997）。所以 OPG 和 RANKL 的表現，可以調節骨蝕損作 用和骨密度的多寡，並且可以控制 RANK 在蝕骨細胞上的活化狀態（Boyle et al,
- 72 - 如:osthole（Kuo et al, 2005）和 fraxetin（Kuo et al, 2006）。根據本實驗的研究結 果發現 BMPs 的受體抑制劑, noggin 確實可以抑制 SF-C 所刺激 MC3T3-E1 產生 的 ALP 的活性。另外，SMAD 的磷酸化作用也明確的在 SF-C 處理後的細胞中被 發現。這些結果顯示 BMPs/SMAD signaling 系統在 SF-C 調節的細胞成熟和造骨 細胞分化作用裡扮演著重要的角色。
BMPs 已經被報導出在造骨細胞分化作用裡不只會活化 SMAD signaling 而 且也會磷酸化 p38 kinase 路徑，以及 SMAD 和 p38 kinase signaling 之間是呈現正
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相關（Nohe et al, 2004）。另外，BMPs 誘導造骨細胞骨基質基因的表現和 ALP 活化作用裡，包含了 p38 和 SMAD 訊號之間的交互作用（Guicheux et al, 2003）。 化增加有關（Shepherd et al, 1998）。而且 PI3K 在細胞訊息傳遞內會引導細胞生 長和抑制細胞凋亡（Toker et al, 1997）。然而在 2002 年 Choudhury 等人首先發現 了 PI3K 在骨生成作用裡的作用與 BMPs 的關係。他們也發現了 SMAD 與 PI3K/Akt signaling cascade 在誘導轉錄因子調節造骨細胞骨生成作用時，彼此之間會有互相 影響的關係。根據本論文結果發現，PI3K 抑制劑, wortmannin 會抑制 SF-C 誘導 的 ALP 活性作用，並且在 western blot 的實驗也觀察到 SF-C 的確可以明顯的造 成 PI3K 下游因子 Akt 的磷酸化。同樣推測在 SF-C 刺激 MC3T3-E1 細胞的分化 作用下，SMAD 和 PI3K/Akt signaling cascade 具有彼此交叉作用並促使造骨細胞 的成熟和調節分化作用的能力。不過其詳細的機制仍然不清楚。
綜合上述的討論，冇骨消的氯仿層萃取物, SF-C 在細胞實驗中已經明確的
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發現可以促進 ALP 的活化能力、骨基質蛋白 OPN 的生成、增加蝕骨抑制因子 OPG 的表現以及增加礦化作用的能力。並且在初步的機轉作用中也發現會對 BMPs/SMAD signaling pathway、p38 MAPK 和 PI3K/Akt signaling cascade 具有刺 激磷酸化的作用。未來可以進一步的純化分離冇骨消取得純物質，探討對於造骨 細胞分化作用的能力，或者更深入的研究明確的作用機轉以及彼此之間的交互作 用。
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