討論

我們研究的結果顯示不論是 OSCC 或 Jurkat T 細胞在持續受到檳榔子 成分的刺激之後，對化療藥物以及在低氧環境的耐受性皆提升。因此使用 檳榔的習慣很可能使原本就有腫瘤的患者，其腫瘤細胞更能於低氧的環境 中存活，並且也對傳統的化療藥物更具抗藥性，而使預後情況欠佳。

從過去研究中已知短期（24 小時）處理 ANE 和 ANE 30-100K 會誘導 細胞進行自體吞噬的方式的死亡；在本文中則可觀察到經長期處理的細胞 在無血清的培養條件下 LC3-II 與 DRAM 的量比未經處理的母株細胞更 高，但是在有血清存在時則無此現象。這可能意味著在經處理的癌細胞面 臨生存條件不利的狀況時，其自體吞噬的運作要比母株細胞更有效率，使 癌細胞存活。關於這點假設未來將以自體吞噬抑制劑來證實（觀察是否可 減弱經處理的細胞對低氧以及化療藥物的耐受性）。

另一方面，我們同時在經 ANE 與 ANE 30-100K 長期處理細胞的培養 液中鑑定出 peroxiredoxin-1 有過量的表現。Peroxiredoxin-1 是屬於一種抗氧 化物的酵素，由於我們過去的研究已知 ANE 與 ANE 30-100K 會使細胞 內 ROS 的量增加^(18,27)，因此細胞可能為了對抗這種持續產生過氧化物的環 境，而大量誘導 peroxiredoxin-1 的表現。由於低氧與我們所使用的抗癌藥 物都能讓細胞產生 ROS，因此有可能過量 peroxiredoxin-1 的表現是使經處 理後的癌細胞有更強的抗藥性與低氧耐受度的原因。為了更進一步地確認

此想法，我們將利用 RNAi 的方式抑制 peroxiredoxin-1，再觀察上述細胞對 低氧與藥物的耐受性是否降低。

事實上，從發現 peroxiredoxin 是一個酵素家族以來，目前已知有六個 家族成員，並且最近開始被視為可能是治療癌症與白血病的標的分子。而 在本文中所觀察到的幾項事實：ANE 與 ANE 30-100K 可在正常的口腔纖維 母細胞中誘導 peroxiredoxin-1 的表現與分泌、腫瘤塊中絕大部分的腫瘤細 胞均表現 peroxiredoxin-1，以及嚼食檳榔者的 OSCC 樣本 中 peroxiredoxin-1 的表現量顯著高於未嚼食者的 OSCC 等現象，證明檳榔的使用可能造成 peroxiredoxin-1 的過度表現，因此設法在嚼食檳榔的口腔腫瘤患者中抑制 peroxiredoxin-1 的表現，有可能可以提供一些治療上的效果。

最後，在進行本文研究的同時，我們曾針對在台灣有使用檳榔習慣的 口腔癌患者之腫瘤進程上，常可見慢性的發炎後產生黏膜下纖維化的現 象，並且在發炎反應持續的存在之下，仍然逐漸形成了良性乃至惡性腫瘤 之情況作探討。我們的假說是檳榔子的成分一方面可刺激發炎反應，但另 一方面卻又能幫助腫瘤細胞免於遭到免疫細胞的擊殺（to escape from immune surveillance）⁽²⁸⁾。

文獻中 ANE 與 arecoline（檳榔子成分中可誘導細胞凋亡的物質）皆被 證實可在口腔角質細胞、口腔癌細胞及周邊血液淋巴細胞誘導介白素-1β

（interleukin 1β, IL- 1β）、介白素-6（interleukin 6, IL-6）、前列腺素

（prostaglandin E2, PGE2）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）等與發炎反應相關的細胞激素的表現^(29,30,31)。我們以細胞激素的套 裝試劑測得：arecoline 與控制組相較之下，確實可刺激 IL-6 的分泌，不同 的是 ANE 30-100K 則可誘導 IL-6, IL-12, IL-13, IL-17A 與 GM-CSF 等與發 炎反應相關的細胞激素產生（圖 7）。

為了躲避免疫細胞的擊殺，有些腫瘤細胞會分泌抑制 T 細胞的細胞激 素，例如 TGF-β與 IL-10，使 T 細胞無法發揮作用。此外，腫瘤細胞也可能 藉由分泌 CCL22 使調節型 T 細胞（regulatory T cells, Tregs）聚集到腫瘤的 周圍並於此處增殖。Tregs 細胞表面的標誌為 CD25 與 CD4，內部則表現了 轉錄因子 FOXP3。在 Tregs 族群擴張之後將導致原本會擊殺腫瘤細胞的白 血球（如毒殺型 T 淋巴細胞與天生殺手細胞）受到抑制⁽³²⁾。另外，腫瘤細 胞 本 身 會 表 現 B7 蛋 白 ， 它 可 以 在 腫 瘤 細 胞 外 圍 形 成 一 種 分 子 屏 障

（molecular shield），以避免腫瘤遭受到毒殺型 T 淋巴細胞的攻擊。Tregs 與抗原呈現細胞（antigen presenting cells, APC）同時也可能表現 B7 進而抑 制其他 T 細胞的作用⁽³³⁾。我們在此假設在經長期 ANE 30-100K（或 ANE）

處理後的 Jurkat T 細胞有可能 B7 或 FOXP3 表現量會增加，透過西方墨點 法分析的結果顯示，經長期處理 ANE 30-100K 的細胞，FOXP3 的表現有稍 微增加，不過經由 Student’s T test 發現並不具有統計上的意義（圖 8(a)），

而 B7 蛋白的表現量則不具有明顯的差異（圖 8 (b)）。有可能是 ANE 與

ANE 30-100K 與腫瘤逃避免疫細胞並無明顯關聯，或者是以 Jurkat T 細胞 為工具並不能得到客觀的結果。