補骨脂為一已知傳統中藥，早期補骨脂萃取物已經被做為治療骨折
（Lim et al., 2009）的藥物 ，除此之外也有滋陰補陽的效用。本實驗使用中 醫所董明兆老師實驗室所萃取出的四個化合物；NBIF 為 isoflavones （異 黃酮）類化合物，psoralidin 則為 coumestan 類化合物，psoralen 、isopsoralen 皆為 coumarins （香豆素）類化合物。Isoflavones、coumestan、coumarins 被 指出可能有 phytoestrogen （植物性雌激素）作用。植物性雌激素可與受體 結合，進行雙向調節，平衡雌激素作用。近年來對植物性雌激素的研究，尤 其是異黃酮，的確可以取代部分傳統荷爾蒙（Glazier & Bowman, 2001），增 強組織的健康，以及防止一些常見的疾病，如控制停經後（Faure et al., 2002）
症狀、預防骨質疏鬆（Alexandersen et al., 2001）、降低心血管（冠狀動脈）
疾病（Wong et al., 1998），減少乳癌（Yamamoto et al., 2003）等。文獻指出 這些補骨脂化合物具有抗癌、抗發炎活性或是造骨新生的活性 （Chiou et al.,
但僅有（5-20μM）NBIF 具有顯著增加 ALP 活性的能力，而在 20μM 濃度 下也不具明顯細胞毒性。
造骨細胞分化過程中的三個基本過程：細胞增生 （proliferation）、骨基 質成熟 （matrix maturation） 與礦化 （mineralization）（Aubin et al.,1995）。
因此利用 ARS 染色法觀察 NBIF 在不同濃度下，對於造骨細胞株
MAPKs 為（絲胺酸/蘇胺酸）serine/threonine kinase 家族的一員，在細 胞中扮演非常重要的腳色，參與調控細胞的生理作用，包括細胞增生、分化、
發炎反應及凋亡。許多天然物，如： osthole 等，被報導會透過誘導 p38 MAPK 訊息傳遞路徑，誘發造骨細胞分化（Chiou et al., 2010; Kuo et al., 2005）。目 前的結果表明，處理 NBIF 會誘導 MC3T3-E1 細胞 p38 磷酸化。給予 p38
抑制劑也會顯著抑制 NBIF 所誘發的 ALP 活性及礦化作用。而處理 ERK 及 JNK 抑制劑卻無法顯著抑制 NBIF 所誘導的 ALP 活性。這暗示著 MC3T3-E1 受到 NBIF 刺激所增加的 ALP 活性及礦化作用可能是透過 p38 MAPK 訊息傳遞路徑，而與 ERK MAPK 及 JNK MAPK 無直接關係。
PI3K 在細胞訊息傳遞內會引導細胞生長、調節細胞骨架的結構和抑制 細胞凋亡（Toker & Cantley, 1997）。有文獻指出透過 PI3K/Akt 訊息傳遞路 徑會增加 BMP-2 的表現（Wu et al., 2008），本實驗結果發現給予 PI3K/Akt 細胞質轉移到細胞核中調控造骨的基因表現（Chiou et al., 2010）。根據實驗 結果發現，處理 NBIF 有濃度相關增加 Runx2 的 mRNA 表現。另外，OSX
PI3K/Akt 訊息傳遞路徑調控 Runx2 及 OSX 基因表現。
NBIF 刺激 MC3T3-E1 細胞增加骨基質 OCN 及 BSP、 BMP-2 的 mRNA 表現會被 p38 或 PI3K/Akt 抑制劑分別抑制。這暗示 NBIF 增加骨 基質 OCN 及 BSP、 BMP-2 的表現可能經由 p38 MAPK 或 PI3K/Akt 訊息 傳遞路徑。
綜合上述討論，NBIF 在細胞實驗中已發現可以促進 ALP 活性以及礦 化作用，刺激轉錄因子 Runx2 及 OSX 的表現，甚至刺激骨細胞分泌骨基 質 OCN、BSP 及 BMP-2。而這些可能都是因為 NBIF 活化 p38 MAPK 或 PI3K/Akt 訊息傳遞路徑，誘導造骨細胞走向成熟分化的階段。