本研究分析全血中微量元素,參考 2004 年美國疾病管制局 編定之 ITB001A 之血中鉛、鎘與汞感應式耦合電漿質譜覆動態反
應室方法(H55H),以酒精、TMAH、Trition X-100 配成含 10 μL 金之 溶液,稀釋50倍後,再以感應式耦合電漿質譜儀(ICP-MS)進行鉛、
汞等微量元素分析。
本研究使用之 ICP-MS 具有將樣品原子化與游離化的特 性,分析能力強,且ICP具有相當高的游離效率,卻又不會過度激 烈反應,只有少數離子會產生二次游離的現象,此特性用來分析無 機物質相當理想,搭配質譜儀分析同位素比的優越能力,使得 ICP-MS能夠廣泛且精準的運用於研究中。
ICP-MS具有絕佳的靈敏度,分析快速、精確度和穩定性高,
並可得到相當低的偵測極限,分析複雜的樣本時,大部分的元素都 可得到低於 0.01 ng/mL 的偵測極限,特別是稀土元素這一類較重 的元素,更可迅速的由溶液樣本中測得同位素比,背景質譜相較之 下也較為簡單,因主要游離元素為一價離子,分析物元素所得到的 質譜圖也相當簡單,其他物質造成的干擾可以明顯預測。
2.1 儀器裝備與材料
a. 感應式耦合電漿質譜儀(ICP-MS):(Perkin Elmer SCIEX
DRC II ICP-MS)
b. 高速離心機(Centrifuger):Eppendorf Model 5806
c. 轉動混合器(Vortex mixer):Scientific Industries Vortex-2 d. 純水製造機:Millopore Milli-Q Plus
e. 抽氣櫃
f. 離心管: 15mL、50 mL g. 定量吸管:10 mL
h. 微量分注器與 tip:Eppendorf 10~100 μL、100~1000μL i. 定量瓶:Pyrex 玻璃製 100 mL 定量瓶
j. 塑膠瓶:100 mL,附內蓋
k. 容器皆經由 1:1 硝酸溶液浸泡 24 小時後以去離子水沖 洗晾乾備用。
2.2 試劑
a. 去離子水 b. Triton X-100 c. 70% 硝酸 d. 95% 優質酒精
e. Tetramethy lammonium hydroxid
f. 標準品:ICP multi-element standard solution IV (23
elements in 1 mol / L nitric acid, 1000 ± 10 mg / L,
(tetramethylammonium hydroxide, TMAH)、Trition X-100、含 10μg/L 金之稀釋液
3. 上機(ICP-MS)檢測血液中重金屬元素鉛、汞
2.5 空白溶液製備(Reagent blank)
取滅菌之去離子水於離心管中,再加入樣品稀釋溶液
(含 0.1% (v/v) Triton X-100)稀釋50倍,充分混合後,進 行空白值之測定。
2.6 品管標準(Quality control)
1. 查核樣品(Quality Check Sample):每批次執行一次濃度 經過確認的標準樣品(standard reference material, SRM)進
行查核樣品分析,而每次皆以相同方法,以達到對照濃度 確認,確認分析結果準確度。
SeromormTM Trace Elements Whole Blood REF: 201605 LOT: MR9067xy
Element Reference (μg/L) Observation (μg/L) SRM recovery (%)
Pb 395 391 99 ± 0.03
Hg 15.2 14.6 96 ± 0.01
2. 添加樣品分析(Spiked Sample):將血液樣品添加適當濃 度之標準溶液,再進行樣品前處理、分析步驟進行分析,
由是否添加標準品之測定值差異可計算添加標準品之回收 率。
3. 重覆樣品分析(Replication):每批次進行一次重複樣品分 析,以分析 10 個樣品作為一批次,將相同血液樣品以相 同前處理與分析步驟重複分析後,計算數值相對百分差異 CV %,而 CV % 應小於其平均值,藉此確認操作程序之 精密度。
4. 空白測試及偵測極限:取空白溶液分析、計算最低濃度連 續檢測7次之檢量線,取 3 倍標準差作為儀器偵測極限。
本研究全血檢量線與儀器偵測極限
Element Concentration Range (μg/L) R2 MDL (μg/L)
Pb 0.25 ~ 60 (μg/dL) 0.999 0.012 (μg/dL) Hg 0.16 ~ 40 (μg/L) 0.999 0.16 (μg/L)
5. 檢量線製備:使用 1000 μg / mL 鉛、汞之標準溶液,以 1
% HNO3 稀釋成 1 μg / L (ppb),配製六點以上不包含空 白零點已知濃度之標準液,對照其相對應之儀器感應訊號 值,並計算相關係數,R2 > 0.995 以上方可進行實驗。
6. 檢量線起初校正:使用不同來源廠牌之標準溶液,濃度取 檢量線中間點,進行起初校正(Initial Calibration)。樣品 至少分析三次,再取平均值計算回收率。回收率介於 95 ~ 105 % 之間方可進行下一步驟之分析工作。若未在範圍 內,則需檢查儀器條件與檢量線溶液,直至校正完成。
第七節 資料整理與統計分析
新移民女性健康調查問卷以 Microsoft Access 2007 軟體建檔,再 以 SPSS 18 統計軟體進行資料分析,分析社會人口學特徵、新移民女 性及新移民兒童血中重金屬濃度與 DNA 損害程度之相關性及健康狀 況。斯皮爾曼相關係數及 chi-square 卡方檢定探討血中重金屬濃度、
DNA 損害與影響因子的相關性,母子配對利用 McNemar 檢定其差異 性,並以多變項線性迴歸分析 (Multiple liner regression)比較居住環 境、飲食偏好、社經條件等各類別變數評估其對 DNA 損害程度與血 中重金屬濃度之影響。
第四章 研究結果
第一節、研究族群人口學資料與血中鉛、汞濃度及 DNA 損害之描述