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示劑：溶解 0.1 g 乾燥粉末狀 Calmagite 於 100 ml 去離子水中，此溶液在滴 定終點顏色變化較 Erichrome Black T 靈敏。每 50 ml 被滴定溶液加入 1 ml 此指示劑，必要時可調整用量。
(3) EDTA 滴定溶液，0.01 M：加入 3.723 g 之含二個結晶水之 EDTA 二鈉鹽於 少量去離子水中，再以去離子水定容至 1000 ml，並以標準鈣溶液標定 1 ml EDTA 溶液可滴定多少碳酸鈣濃度。由於此溶液能自普通玻璃容器中萃取一 些含有總硬度之陽離子，因此應儲存於 PE 塑膠瓶或硼矽玻璃瓶內。
(4) 標準鈣溶液：取 1.0 g 無水碳酸鈣粉末，置入燒瓶中，緩緩加入 1：1 鹽酸 溶液至所有碳酸鈣溶解，加入 200 ml 去離子水，加入幾滴甲基紅指示劑，
以 3 M 的氫氧化銨 (NH4OH)或 1：1 的鹽酸溶液將鈣溶液調整至變色過程 中的橙色 (如圖 3. 12)，加水至 1000 ml。此時 1 ml 碳酸鈣標準溶液內含 1.0 mg 碳酸鈣。
以上試劑配製量會隨實驗所需做調整。
二、待測樣本製備與測定
(1) 將培養菌之培養液用離心機以 12,000 rpm 離心 30 分鐘，使培養液與細菌分 離並確保游離於培養液中之碳酸鈣沉澱。
(2) 為得到碳酸鈣沉澱物，去掉離心出來的培養液，取下方的菌體沉澱塊，此時 菌體內含碳酸鈣沉澱物，加入適量 1：1 鹽酸使碳酸鈣溶解，加去離子水至 2.0 ml。
(3) 以 3 M 的氫氧化銨 (NH4OH)或 1：1 的鹽酸溶液將鈣溶液調整至變色過程中 的橙色後，加入去離子水至 5.0 ml。
(4) 於待測溶液內加入 0.1 ml 緩衝溶液、0.02 ml Calmagite 指示劑，再以 EDTA 二鈉鹽溶液滴定待測溶液，使溶液顏色由酒紅色轉為藍色，當顏色由紅轉為 紫時，滴定時間間隔約 3 至 5 秒，值至達滴定終點。
記錄滴定
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3.1.5 革蘭氏染色
由於細菌之細胞壁主要成分不同，革蘭氏染色法 (gram stain)可藉由此差異 將細菌染色分成兩大類，藍色的革蘭氏陽性菌與紅色的革蘭氏陰性菌 (其分別構 造如圖如圖 3. 13)，革蘭氏染色主要是以結晶紫 (crystal violet)染劑以及碘液使細 菌之細胞壁上色，革蘭氏陽性菌細胞壁脂質含量較少，單層結構且較厚，染劑會 附著於細胞壁上不易被 95 % 酒精脫色，而革蘭氏陰性菌細胞壁脂質含量較多，
三層結構且較薄，染劑不易附著於細胞壁經由酒精脫色呈無色。加入番紅 (safranin)進行複染可將革蘭氏陰性菌染成紅色。
一、革蘭氏染色步驟
(1) 取菌液或培養基上的菌於載玻片上，若從培養基上取菌做革蘭氏染色，則需 先於載玻片上滴約 10 μl 的無菌水，再將菌均勻在水面上塗開。
(2) 待風乾後以酒精燈於載玻片背面過火，使菌固定於載玻片上。
(3) 於在波片上加入適量的結晶紫 (crystal violet)，待一分鐘後沖洗載玻片背面，
避免將菌沖掉。
(4) 加入適量碘液待一分鐘後，沖洗載玻片背面。
(5) 以酒精緩緩沖洗約十秒，進行脫色動作，若為革蘭氏陰性菌，其細胞壁上之 染劑會被酒精脫色，陽性菌則不會。
(6) 最後以番紅 (safranin)進行複染，此步驟會使已脫色之革蘭氏陰性菌呈紅色，
陽性菌則不會。
A extraction 剩下微生物 merase chain 細胞壁較厚， n reaction，
不易破壞，
的 solution I 37℃水槽內 取 (Chromos
細胞質分解