降低體內血脂肪之動物實驗評估

第四章研究結果

第三節降低體內血脂肪之動物實驗評估

表 4-1 深層海水之成分分析

Table 4-1 The analysis of elements of deep sea water.

Elements Concentration

Na 7.71 mg/L

Mg 20.65 mg/L

Ca 5.02 mg/L

K 0.22 mg/L

B 0.37 mg/L

Fe 0.0062 mg/L Ba < 2.42 mg/L Fluoride 0.11 mg/L Chloramines < 0.021 mg/L

SO3 51.86 mg/L NO3 (as N) < 0.1 mg/L

PO4 (as P) 0.0023 mg/L Zn 0.019 mg/L

Al 2.27 μg/L

Pb < 0.53 mg/L Cd < 0.072 mg/L Cu < 0.018 mg/L As < 1.54 mg/L Cr < 0.17 μg/L Hg < 0.017 μg/L

Tl < 0.45 μg/L Sb < 1.11 μg/L Be < 0.068 μg/L

(A) DSW-RMD

(B) RO-RMD

圖 4-1 紅麴次級代謝物 monascin 與 ankaflavin 之紫外光全波長吸收波峰圖譜

Fig. 4-1 The whole wavlenght of absorption peak of monascin, ankaflavin of monascus secondary metabolites in HPLC-PDA.

monascin ankaflavin

(A) DSW-RMD

(B) RO-RMD

圖 4-2 紅麴次級代謝物 monascin、ankaflavin 與 citrinin 之 HPLC 層析圖 Fig. 4-2 The HPLC chromatograms of monascin, ankaflavin and citrinin of monascus secondary metabolites.

monascin

ankaflavin monascin

ankaflavin citrinin

monascin

ankaflavin citrinin

圖 4-3 Monascin 之 HPLC 檢量線

Fig. 4-3 Standard curve of monascin with HPLC R² = 0.9871

(mg/L)

圖 4-4 Ankaflavin 之 HPLC 檢量線

Fig. 4-4 Standard curve of ankaflavin with HPLC R² = 0.9957

(mg/L)

圖 4-5 Citrinin 之 HPLC 檢量線

Fig. 4-5 Standard curve of citrinin with HPLC R² = 0.9945

表 4-2 紅麴次級代謝物成分分析

Table 4-2 Analysis of Monascus secondary metabolites.

Groups Monascin (mg/kg)

Ankaflavin (mg/kg)

Citrinin (ppb) RO-RMD 3820 ± 994 1327 ± 257 2801 ± 166 DSW-RMD 6057 ± 292 1345 ± 124 1999 ± 264

一、試驗動物之血液中 TC 與 TG 濃度變化

高血脂症 (hyperlipidemia) 是心血管疾病及動脈粥狀硬化之致病因子，血液中的 TC、TG、LDL-C 濃度是這些病症的正相關因子；HDL-C 能清除血管中的膽固醇，可降低罹患動脈心臟疾病之機率。

血液中 TC 濃度變化如表 4-3 所示，餵食高膽固醇之 HC 組與餵食一般飼 料 NOR 組相比，HC 組具有顯著提高血液中 TC 濃度之差異 (p<0.05)，則可 證明餵食高膽固醇飲食的 HC 組可作為高膽固醇的試驗動物模式。

在第八週之試驗結果中，發現 DSW-RMD 1X 與 RO-RMD 1X 組之血液中 TC 含量均顯著低於餵食高膽固醇飲食的 HC 組，且 DSW-RMD 1X 組之血液 中 TC 含量也低於 RO-RMD 1X 組 (p<0.05)，證明餵食以深層海水發酵之紅 麴山藥一倍劑量具有降低血清中 TC 之效果，且效果比餵食以 RO 水發酵之紅麴山藥更好。DSW-RMD 1X 與 DSW-RMD 2X 組之血液中 TC 含量無顯著的差異；表 4-3 結果顯示，當提高以深層海水發酵之紅麴攝食量並無法顯著對血液 TC 濃度抑制有劑量效應關係。

本研究之上述結果表 4-2 顯示 DSW-RMD 生成較高量的 monascin，而 monascin 與 ankaflavin 均為紅麴黃色色素，故以 monascin 與 ankaflavin 二者純物質評估降血脂效果。餵食 monacolin K 純物質者為 MK 組，此組為正控制組。餵食 monascin 純物質者為 MS 組，而餵食 ankaflavin 純物質者為 AF 組，MS 與 AF 組皆為試驗組。表 4-3 結果顯示 MK、MS 與 AF 三組之血液 中 TC 含量均顯著低於餵食高膽固醇飲食的 HC 組 (p<0.05)，由此可證實 monascin 與 ankaflavin 此二種純物質皆為降低血液中 TC 之功效性成分。

血液中 TG 濃度變化如表 4-3 所示，餵食高膽固醇之 HC 組與餵食一般飼 料 NOR 組相比，HC 組具有顯著提高血液中 TG 濃度之差異 (p<0.05)，則 可證明餵食高膽固醇飲食的 HC 組可作為高膽固醇的試驗動物模式。

由結果可得知，DSW-RMD 1X 之血液中 TG 含量與 RO-RMD 1X 組不具顯著差異，則證明餵食一倍深層海水發酵之紅麴山藥其降低之血液中 TG 含量與餵食一倍 RO 水發酵之紅麴山藥效果相同。DSW-RMD 1X 組之血液中 TG 含量與 DSW-RMD 2X 組相比較後發現無顯著差異，但 DSW-RMD 2X 具有降低之血液中 TG 含量之趨勢，證實雖提高以深層海水發酵之紅麴山藥攝食量並無法顯著對血液中 TG 濃度抑制有劑量效應關係，但具有顯著降低血清中 TG 含量的趨勢。結果發現，MK、MS 與 AF 三組均具有降低血液中 TG 含量之 顯著差異 (p<0.05)，由此證實 monascin 與 ankaflavin 此二種純物質皆為降低血 液中 TG 含量之功效性成分。

表 4-3 餵食不同試驗物質對倉鼠血清中 TC、TG、HDL-C、LDL-C 含量與 LDL-C/HDL-C 比例之影響

Fig. 4-3 Effect of various samples on the serum cholesterol, triglyceride, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol concentration and LDL-cholesterol/

HDL-cholesterol ratio of experimental hamster.

NOR, normal diet (0% cholesterol); HC, high-cholesterol diet; RO-RMD 1X, RO-RMD powder (1X, 12.49 mg/day 100 g bw) and high-cholesterol diet;

DSW-RMD 1X, DSW-RMD powder (1X, 12.486 mg/day 100 g bw) and high-cholesterol diet; DSW-RMD 2X, DSW-RMD powder (2X, 24.972 mg/day 100 g bw) and high-cholesterol diet; MK, monacolin K powder (1X, 0.240 mg/day 100 g bw) and high-cholesterol diet; MS, monascin powder (2X, 0.245 mg/day 100 g bw) and high-cholesterol diet; AF, ankaflavin powder (2X, 0.036 mg/day 100 g bw) and high-cholesterol diet; Data are presented as means ± SD (n=8).

Mean values within each column with different superscripts are significantly different (p<0.05)

Groups TG (mg/dL)

TC (mg/dL)

HDL-C (mg/dL)

LDL-C (mg/dL)

LDL-C/HDL-C ratio NOR 168.8 ± 35.6 ^c 111.8 ± 10.7 ^a 66.6 ± 6.0 ^a 19.9 ± 2.6 ^a 0.28 ± 0.04 ^a

HC 226.3 ± 76.5 ^d 236.5 ± 18.9 ^d 98.1 ± 8.9 ^b 68.3 ± 9.8 ^e 0.57 ± 0.09 ^f RO-RMD 113.3 ± 14.3 ^ab 191.9 ± 6.2 ^c 108.7 ± 8.5 ^c 51.8 ± 4.4 ^d 0.45 ± 0.05 ^de DSW-RMD 1X 97.8 ± 13.1 ^ab 179.6 ± 25.1 ^bc 116.2 ± 7.3 ^cd 47.5 ± 3.3 ^cd 0.41 ± 0.02 ^cd DSW-RMD 2X 102.9 ± 16.3 ^ab 171.7 ± 17.3 ^bc 114.8 ± 7.4 ^cd 43.8 ± 3.9 ^bc 0.38 ± 0.04 ^bc MK 131.1 ± 36.7 ^b 190.3 ± 25.1 ^c 96.9 ± 8.8 ^b 45.0 ± 7.0 ^bc 0.49 ± 0.05 ^e MS 82.8 ± 9.0 ^a 165.8 ± 10.6 ^b 114.2 ± 9.4 ^cd 45.1 ± 3.4 ^bc 0.42 ± 0.02 ^cd

AF 94.5 ± 18.0 ^ab 168.9 ± 11.5 ^b 118.6 ± 8.1 ^d 39.4 ± 5.8 ^b 0.36 ± 0.05 ^b

二、試驗動物之血液中 HDL-C 與 LDL-C 濃度變化

餵食不同試驗物質八週後血液中 HDL-C 含量如表 4-3 所示，餵食高膽固醇之 HC 組與餵食一般飼料 NOR 組相比，HC 組顯著提高血液中 HDL-C 濃 度之差異 (p<0.05)。

在第八週之試驗結果中，發現 RO-RMD 1X、DSW-RMD 1X、DSW-RMD 2X、MS 與 AF 組均不會導致血液中 HDL-C 含量顯著下降，但餵食 monacolin K 之正控制組與 HC 組具有顯著差異 (p<0.05)。餵食八週深層海水發酵之紅麴 山藥、monascin 與 ankaflavin 不會有降低血液中 HDL-C 含量。

餵食不同試驗物質八週後血液中 LDL-C 濃度含量如表 4-3 所示，餵食高膽固醇之 HC 組與餵食一般飼料 NOR 組相比，HC 組具有顯著提高血液中 LDL-C 濃度之差異 (p<0.05)，則可證明餵食高膽固醇飲食的 HC 組可作為高膽 固醇的試驗動物模式。

在第八週試驗結果中，發現 DSW-RMD 1X 之血液中 LDL-C 含量與 RO-RMD 組不具顯著差異，但具有降低之趨勢，則證明餵食一倍深層海水發酵之紅麴山藥其降低血液中 LDL-C 之效果有較與餵食一倍 RO 水發酵之紅麴山藥佳之趨勢。DSW-RMD 1X 組之血液中 LDL-C 含量與 DSW-RMD 2X 組相比較後發現無顯著差異，但 DSW-RMD 2X 具有降低之血液中 LDL-C 含量之趨勢，證實雖提高以深層海水發酵之紅麴攝食量並無法顯著對血液 LDL-C 濃度抑制有劑量效應關係，但具有顯著降低血清中 LDL-C 含量的趨勢。MK、MS 與 AF 三組均具有降低血液中 LDL-C 含量之顯著差異 (p<0.05) ，由此證實 monascin 與 ankaflavin 此二種純物質皆為降低血清中 LDL-C 含量之功效性成分。

LDL-cholesterol 與 HDL-cholesterol 的比值可以判定罹患動脈粥狀硬化的風險機率，比值越高風險越大。結果顯示，DSW-RMD 1X 較 RO-RMD 1X 雖無顯降低之效果，但具有降低之趨勢。等量的 DSW-RMD 2X 劑量中的 monascin 與 ankaflavin 則具有顯著降低之效果。此結果證明，深層海水發酵之紅麴山藥較 RO 水發酵之紅麴山藥效果雖不顯著，但具有降低之趨勢。此結果證實，降低罹患動脈粥狀硬化的功效成分為 monascin 與 ankaflavin。

三、試驗動物之血液中 AST 與 ALT 活性

AST (Aspartate aminotransferase activity)、ALT (Alanine transferase Activity) 是存在於肝細胞中的酵素，當肝細胞受到損傷或壞死時，這些酵素會被釋放到血中，因此，當血清中的 AST、ALT 活性增加時，表示肝臟受到損傷。

餵食不同試驗物質八週後血液中 AST 活性如表 4-4 所示，在 NOR、

表 4-4 不同試驗物質對倉鼠血清中 AST 與 ALT 活性之影響

Table 4-4 Effect of various samples on the serum Aspartate aminotransferase and Alanine transferase activity of experimental hamster.

AST activity (U/L)

ALT activity (U/L) NOR 0.08 ± 0.03 ^b 0.09 ± 0.02 ^abc

HC 0.09 ± 0.06 ^b 0.12 ± 0.04 ^cd RO-RMD 0.06 ± 0.02 ^ab 0.12 ± 0.02 ^cd DSW-RMD 1X 0.06 ± 0.02 ^ab 0.09 ± 0.01 ^ab DSW-RMD 2X 0.04 ± 0.01 ^a 0.10 ± 0.01 ^abc MK 0.07 ± 0.03 ^ab 0.11 ± 0.03 ^bcd MS 0.08 ± 0.02 ^b 0.13 ± 0.03 ^d

AF 0.06 ± 0.02 ^ab 0.08 ± 0.01 ^a

NOR, normal diet (0% cholesterol); HC, high-cholesterol diet; RO-RMD 1X, RO-RMD powder (1X, 12.49 mg/day 100 g bw) and high-cholesterol diet;

Mean values within each column with different superscripts are significantly different (p<0.05)

RO-RMD 1X、DSW-RMD 1X、MK、MS、AF 組的血液中 AST 活性均與 HC 組無顯著差異 (p>0.05)，則表示無論是給予一般飲食、餵食一倍 RO 水發酵之 紅麴山藥、一倍深層海水發酵之紅麴山藥、monacolin K、monascin 或 ankaflavin 均不具有抑制 AST 活性之效果。RO-RMD 1X、DSW-RMD 1X、MK 與 AF 四組均有降低血液中 AST 活性之趨勢，結果推測餵食一倍深層海水發酵之紅麴山藥、一倍

的 RO 水發酵之紅麴山藥與純物質 ankaflavin 組可能具有穩定肝功能指數 AST 之趨勢。DSW-RMD 2X 血液中 AST 活性顯著低於餵食高膽固醇的 HC 組 (p<0.05)，表示餵食二倍的深層海水發酵之紅麴山藥可降低 AST 活性，故可推 測餵食兩倍劑量之深層海水發酵之紅麴山藥能抑制高膽固醇飲食所造成之肝功能指數上升。

餵食不同試驗物質八週後血液中 ALT 活性如表 4-4 所示，在 NOR、

RO-RMD 1X、DSW-RMD 2X、MK 與 MS 組的血液中 ALT 活性均與 HC 組 無顯著差異 (p<0.05)，則表示給予一般飲食、餵食一倍 RO 水發酵之紅麴山藥、

餵食兩倍深層海水發酵紅麴山藥、monacolin K 或 monascin 均不會對 ALT 有抑制之效果。

DSW-RMD 1X 組之血液中 ALT 活性顯著低於高膽固醇飲食之 HC 組，且 DSW-RMD 1X 組與 RO-RMD 1X 組具有顯著差異，即為餵食一倍的深層海水發酵之紅麴山藥降低 ALT 活性之效果較餵食一倍 RO 水發酵之紅麴山藥好。

DSW-RMD 1X 組與 DSW-RMD 2X 組具有顯著差異，但 DSW-RMD 2X 組與 HC 組無顯著差異，則表示餵食深層海水發酵之紅麴山藥不具劑量效應。MS 組的血液中 ALT 活性與高膽固醇飲食之 HC 組不具顯著差異，以此推估餵食純物質 monascin 不具有抑制 ALT 活性之效果。AF 組的血液中 ALT 活性顯著低 於高膽固醇飲食之 HC 組 (p<0.05)，則結果顯示餵食純物質 ankaflavin 具有穩 定肝功能指數 ALT 活性之效果。

四、試驗動物之血液中脂質過氧化程度

脂質過氧化所產生的次級產物，經裂解後形成丙二醛 (malondialdehyde, MDA)，MDA 常用來做為體內脂質過氧化程度的指標。而凡能與硫代巴比妥酸 (thiobarbituric acid, TBA) 進行反應並產生複合物者均稱為 TBARS (thiobarbituric acid reactive substances)。利用 TBA 之呈色法來測定脂質過氧化 MDA 產量。吸光值愈高表示 MDA 產物愈多，因此若樣品可降低此系統之吸光值，則表示其具有抗氧化效果。

餵食不同試驗物質八週後血液中脂質過氧化程度如圖 4-6 所示，餵食高膽

圖 4-6 餵食不同試驗物質對倉鼠血清中脂質過氧化程度之影響

Fig. 4-6 Effect of difference sample on the serum TBARS amount of experimental hamster.

NOR, normal diet (0% cholesterol); HC, high-cholesterol diet; RO-RMD 1X, RO-RMD powder (1X, 12.49 mg/day 100 g bw) and high-cholesterol diet;

Mean values within each column with different superscripts are significantly different (p<0.05)

固醇之 HC 組與餵食一般飼料 NOR 組相比，HC 組具有顯著提高血液中 MDA 濃度 (p<0.05)。

在第八週試驗結果中，發現 DSW-RMD 1X 與 RO-RMD 1X 組之血液中 MDA 含量與 HC 組具有顯著差異 (p<0.05)，DSW-RMD1X 與 RO-RMD 1X 組亦具有顯著差異 (p<0.05)，則證明餵食一倍深層海水發酵之紅麴山藥其降低之 血液中MDA 含量較餵食一倍 RO 水發酵之紅麴山藥效果好。 DSW-RMD 1X 組之血液中 MDA 含量與 DSW-RMD 2X 組相比較後發現無顯著差異

在文檔中國立台東大學生命科學研究所 (頁 54-71)

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