第二章 材料與方法
第二節 青剛櫟化學成分之萃取與分離
一、植物來源
農委會林業試驗所 洪昆源 助理研究員於台北縣採集並鑑定，其 樹莖乾重16.2 Kg。
二、青剛櫟萃取與分離流程
青剛櫟莖部乾重16.2 Kg，以95%酒精加熱萃取三次，經減壓濃縮 後得到510 g的酒精粗萃物Ⅰ (crude extract Ⅰ)；再以55%酒精加熱萃取，
經減壓濃縮後得到800 g的酒精粗萃物Ⅱ (crude extract Ⅱ)。將粗萃物Ⅰ及
Ⅱ分別與水進行液-液分配萃取(partition)，得到正己烷(n-Hexane)萃取 物88 g、乙酸乙酯(Ethyl Acetate)萃取物220 g和正丁醇(n-Butanol)萃取 物330 g。
將乙酸乙酯層進行中壓管柱色層分析(Silica gel 0.063-0.2 mm, column 100×460 mm, 3 mL/min)，利用氯仿-甲醇(CHCl3/MeOH)以 100%氯仿至100%甲醇進行梯度沖提，經由TLC點片合併共分得12個 部分(Fr. 1~12)。Fr. 4經由Sephadex LH-20 (80×900 mm)管柱色層分 析，以甲醇進行沖提，共分得4個部分(Fr. 4-1~4)。Fr. 4-1經由矽膠管 柱色層分析(Silica gel 0.040-0.063 mm, column 60×300 mm)，以氯仿/甲 醇 (100/0至20/1)進行梯度沖提，得到化合物1 (899.2 mg)。
Fr. 4-2利用矽膠管柱色層分析(0.040-0.063 mm, 45×300 mm)，以 氯仿/甲醇/乙酸(Chloroform/Methanol/Acetic acid) 20/1/0.03至2/1/0.03進 行梯度沖提，分得6個部分(Fr. 4-2-1~6)，Fr. 4-2-4用Sephadex LH-20 (35×900 mm)管柱色層分析，甲醇進行沖提，再以矽膠管柱色層分析
(0.040-0.063 mm, 35×470 mm)，以氯仿/甲醇(100/0至20/1)進行梯度沖 提，得到化合物2 (1098 mg)。在Fr. 4-2-4-3使用逆向高效液相層析儀 (HPLC, C-18, 10×250 mm, 2 mL/min, UV 254 nm, RI)，35 %乙腈 (CH3CN in H2O)進行沖提，得到化合物3 (2.9 mg)。Fr. 4-2-4-6利用製 備型薄層色層分析板(PTLC)，以氯仿/甲醇/乙酸(8/1/0.01)作為展開 液，得到化合物4 (1.2 mg)。Fr. 4-2-5用Sephadex LH-20 (35×900 mm)管 柱色層分析，甲醇進行沖提得到化合物5 (65.2 mg)。
Fr. 4-3利用矽膠管柱色層分析(0.063-0.2 mm, 40×380 mm)，以氯 仿/甲醇(20/1至5/1)進行梯度沖提分得12個部分(Fr. 4-3-1~12)，Fr. 4-3-6 用Sephadex LH-20 (40×90 mm)管柱色層分析，二氯甲烷/甲醇(1/4)進行 沖提，再使用逆向高效液相層析儀(HPLC, C-18, 10×250 mm, 2 mL/
min, UV 254 nm, RI)，22 %乙腈(CH3CN in H2O)進行沖提，得到化合 物6 (5.3 mg)和化合物7 (1.2 mg)。Fr. 4-3-9用Sephadex LH-20 (40×90 mm)管柱色層分析，二氯甲烷/甲醇(1/4)進行沖提，得到化合物8 (34.5 mg)。
Fr. 7經由Sephadex LH-20 (80×900 mm)管柱色層分析，以甲醇進 行沖提，再用矽膠管柱色層分析(0.063-0.2 mm, 50×240 mm)，以二氯 甲烷/甲醇(100/0至0/100)進行梯度沖提，反覆使用Sephadex LH-20 (40×900 mm)管柱色層分析，以甲醇進行沖提，共分得5個部分(Fr.
7-4-7-1~5)；Fr. 7-4-7-2， 利 用 逆 向 高 效 液 相 層 析 儀(HPLC, C-18, 10×250 mm, 2 mL/min, UV 254 nm, RI)，30 %乙腈(CH3CN in H2O)進行 沖提，得到化合物9 (11.3 mg)、化合物10 (3.0 mg)和化合物11 (3.2 mg)。Fr. 7-4-7-4，使用逆向高效液相層析儀(HPLC, C-18, 10×250 mm, 2 mL/min, UV 254 nm, RI)，15 %乙腈(CH3CN in H2O)進行沖提，得到 化合物12 (7.3 mg)、化合物13 (1.3 mg)和化合物14 (4.0 mg)。
Fr. 7-4-7-3，利用逆向高效液相層析儀(HPLC, C-18, 10×250 mm, 2 mL/min, UV 254 nm, RI)，24 %乙腈(CH3CN in H2O)進行沖提，得到化 合物15 (12.6 mg)和化合物16 (8.4 mg)。
Stem of Quercus glauca (16.2 Kg)
Extracted at 55℃ with 95% ethanol (80 L 3) crude extract (1.25 Kg)
n-Hexane and H2O (1:1) partition
n-Hexane layer (88 g) H2O layer
EtOAc and H2O (1:1) partition
EtOAc layer (220 g) H2O layer
Butanol and H2O (1:1) partition
Butanol layer (330 g) H2O layer MPLC silica gel, 30 mL/min, gradient,
100% CHCl3 to 100% MeOH
Silica gel, 50 240 mm, gradient, CH2Cl2/MeOH (100/0~0/100)
7-4-7
Fig. 2-1. Quercus glauca之化學成份萃取與分離流程（一）
LH-20, 35 900 mm, MeOH Fr. 4-2-4-3
Fr. 4 LH-20, 80 900 mm, MeOH Fr. 4-1 Silica gel, 60 300 mm, gradient, CHCl3/MeOH (100/0~20/1) 1(899.2 mg)
Fr. 4-2 Silica gel, 45 300 mm, gradient, CHCl3/MeOH/Acetic acid (20/1/0.03~2/1/0.03) Fr. 4-2-4 2 (1098 mg)
Fr. 4-2-5 Fr. 4-2-4-4 HPLC C18, CH3CN 35%, V 254 nm, RI, 2 mL/minSilica gel, 35 470 mm, gradient, CHCl3/MeOH (100/1~20/1) 3 (2.9 mg) 4 (1.2 mg)
Fr. 4-2-4-6 P. TLC, CHCl3/MeOH/Acetic acid (8/1/0.03)
Fr. 4-2-1~6 Fr. 4-2-4-1~6
LH-20, 35 900 mm, MeOH 5 (65.2 mg)
Fr. 4-3 Silica gel, 40 380 mm, gradient, CHCl3/MeOH (20/1~5/1) Fr. 4-3-1~10 LH-20, 40 90 mm, CH2Cl2/MeOH (1/4)
Fr. 4-3-6Fr. 4-3-9 Fr. 4-3-6-1~7
LH-20, 40 90 mm, CH2Cl2/MeOH (1/4) 8 (34.5 mg) Fr. 4-3-6-6 HPLC C18, CH3CN 22%, UV 254 nm, RI, 2 mL/min 6 (5.3 mg) 7 (1.2 mg)
Fr. 4-3 Fig. 2-2. Quercus glauca 之化學成份萃取與分離流程（二）
O
β-sitosterol glucoside (1) bartogenic acid (2)
dihydrodehydrodiconiferyl alcohol (3) naringenin-7-O-glucoside (4)
trachelosperogenin A (5) ethyl gallate (6)
3-β-hydroxynaringenin (7) 3,4-dihydroxybenzoic acid (8)
Fig. 2-3. Quercus glauca分離出之化合物（一）
HO
paradrymonoside (9) 24-epi-pinfaensin (10) OH
rosamultin (11) (+)-lyoniresino 9'-O-α-L-rhamnoside (12) O
Fig. 2-4. Quercus glauca分離出之化合物（二）
第三章、化合物之結構證明
利用核磁共振儀(NMR)測定化合物，透過其氫譜(1H NMR)、碳譜 (13C NMR)、DEPT及二維圖譜如：HMQC、HMBC、1H-1H COSY及 NOESY等，並使用低及高解析電灑式質譜(ESI-MS、HRESI-MS)測量 化合物的分子量並進而給出分子式，及其他物理參數和文獻比對，以 確定化合物之結構。
本實驗從青剛櫟(Quercus glauca)乙酸乙酯層萃取物中，分離得到 16個 化 合 物 ， 包 括2個lignans類 新 化 合 物 ， 分 別 為5'-methoxy-(+)-isolariciresinol-9'-O-α-L-rhamnoside(13) 、 d ihydrodehydrodiconiferyl alcohol 4-β-D-xyloside(16)以及14個已知化合物，包括2個aromatics類化 合 物 分 別 是ethyl gallate (6)、3,4-dihydroxybenzoic acid (8)；2個 flavonoids類化合物分別是3-β-hydroxynaringenin (7)、naringenin-7-O-glucoside (4) ； 5 個 triterpenoids 類 化 合 物 分 別 是 batrogenic acid (2)、trachelosperogenin A (5)、paradrymonoside (9)、24-epi-pinfaensin (10) 、 rosamultin (11) ； 以 及 4 個 lignans 類 化 合 物 分 別 是 dihydrodehydrodiconiferyl alcohol (3) 、 (+)-lyoniresino-9'-O-α-L -rhamnoside (12)、5-methoxy-(+)-isolariciresinol-9'-O-α-L-rhamnoside (14)、(+)-acviculin (15)和β-sitosterol glucoside (1)。
第一節、化合物 1 之結構解析
(C-3)，推測為母核連氧之碳訊號為醣基連接位置。其1H、13C光譜數 據，經由文獻62比對，與β-sitosteryl glucoside完全ㄧ致。
綜合以上光譜數據並參閱文獻61,62，確定此化合物為β-sitosteryl glucoside，是植物中廣泛存在的已知化合物。
Table 3-1. 13C and 1H NMR chemical shifts in pyridine-d5 ; 1H multiplicities and coupling constants for 1.
Position δ13Ca δ1Hb
Glu.-2 75.25 4.03 m
Glu.-3 78.51 4.26 m
Glu.-4 71.63 4.22 m
Glu.-5 78.73 3.94 m
Glu.-6 62.77 4.41 dd (J = 5.2, 11.6)
4.56 dd (J = 1.6, 11.6)
a Spectrum recorded at 100 MHz in pyridine-d5 b Spectrum recorded at 400 MHz in pyridine-d5
Fig. 3-1. Compound 1之1H NMR光譜
Fig. 3-2. Compound 1之13C NMR光譜
Fig. 3-3. Compound 1之IR圖譜
Fig. 3-4. Compound 1之ESIMS圖譜
第二節、化合物 2 之結構解析
核磁共振氫光譜(pyridine-d5; Fig. 3-2-1, Table 3-2)顯示6個methyl質 子吸收訊號δH 1.72 (3H, s)、δH 1.04 (3H, s)、δH 1.15 (3H, s)、δH 1.60
38.97、δC 42.14、δC 45.94、δC 35.58，1個δC 144.55雙鍵四級碳，2個δC
180.76羰基四級碳；推測此化合物屬於triterpene類型結構。
綜合以上1H、13C光譜數據，經由文獻63-65比對，確定compound 2 為bartogenic acid。
Table 3-2. 13C and 1H NMR chemical shifts in pyridin-d5 ; 1H multiplicities and coupling constants for 2.
Position δ13Ca δ1Hb
a Spectrum recorded at 100 MHz in pyridine-d5 b Spectrum recorded at 400 MHz in pyridine-d5
Fig. 3-2-1. Compound 2之1HNMR光譜
Fig. 3-2-2. Compound 2之13CNMR光譜
Fig. 3-2-3. Compound 2之DEPT圖譜
Fig. 3-2-4. Compound 2之HMQC圖譜
Fig. 3-2-5. Compound 2之HMBC圖譜
Fig. 3-2-6. Compound 2之COSY圖譜
Fig. 3-2-7. Compound 2之IR光譜
Fig. 3-2-8. Compound 2之ESIMS圖譜
第三節、化合物 3 之結構解析
1
3
O
7OH O
HO
HO O
1' 3'
7'
Compound 3為 淡 黃 色 粉 末 ， 比 旋 光 度[α]25D −26.3° (c 3.8, MeOH)。電灑式質譜(ESIMS) (Fig. 3-3-9)分析顯示，其分子離子峰為 m/z 383.2 [M + Na]+，同時結合13C, 1H data推算其分子式為C20H24O6。 紅外線光譜(Fig. 3-3-8) IR νmax 3390 cm-1顯示有OH的訊號，1606, 1519, 1455 cm-1為苯環上的C=C之訊號。紫外光吸收光譜(Fig. 3-3-7)顯示UV (MeOH) λmax 282, 227 nm。
核磁共振氫及碳光譜(methanol-d4; Fig. 3-3-1, 2, Table 3-3)發現芳 香族質子區有ABX系統的質子吸收訊號δH 6.93 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2)、δH 6.74 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5)、δH 6.81 (1H, dd, J = 2.0, 8.0 Hz, H-6)其碳值分別為δC 110.48 (C-2)、δC 116.11 (C-5)、δC 119.69 (C-6)，
由此推之A環為1, 3, 4三取代之苯環。另外兩個單峰質子訊號δH 6.71 (2H, s, H-2', 6')，其碳光譜吸收訊號為δC 114.03 (C-2')、δC 117.90 (C-6’) 推測B環為1, 3, 4, 5四取代之苯環；除此之外還有兩個甲氧基質子吸收 訊號δH 3.80 (3H, s, OCH3-3)、δH 3.84 (3H, s, OCH3-3')，1H, 13C NMR和 HMBC (Fig. 3-3-5)顯示有兩組C3 units，其中一組-CH2CH2CH2OH氫碳
訊號分別為δH 2.61 (2H, t, J = 7.2 Hz, H-7')、δC 32.91 (C-7')、δH 1.80 (2H, m, H-8')、δC 35.84 (C-8')、δH 3.55 (2H, t, J = 6.4 Hz, H-9')、δC
62.22 (C-9')另一組為-CHCHCH2OH氫碳訊號δH 5.47 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-7)、δC 88.98 (C-7)、δH 3.45 (1H, m, H-8)、δC 55.47 (C-8)、δH 3.74 (1H, dd, J = 7.2, 11.2 Hz, H-9a)、δH 3.86 (1H, m, H-9b)、δC 64.98 (C-9) 由此推測此化合物為lignan66。
HMBC圖譜(Fig. 3-3-5)顯示δH 2.61 (H-7')和δC 114.03 (C-2')、δC
117.90 (C-6')有3J的關連，所以1-propanol與phenyl的C-1'連接；δH 6.71 (H-2')和δC 147.51 (C-4')有3J的關連，δH 6.70 (H-6')和δC 129.86 (C-5')有2J 的關連；且從碳譜化學位移δC 147.51 (C-4')得知與氧連接，另外從氫 碳訊號δH 5.47 (H-7)、δC 88.46 (C-7)得知其有氧連接，並且HMBC圖譜 上δH 5.47 (H-7)和δC 111.20 (C-2)、δC 119.24 (C-6)、δC 147.51 (C-4')、δC
129.58 (C-5')有3J的關連，由此推知C-4'-O-7與C-5'-8形成二氫呋喃環，
同時可知C-1與C-7連接；另外兩個甲氧基質子訊號δH 3.80、δH 3.84分 別與δC 56.33 (C-3)和δC 56.71 (C-3')有3J的關連，確定兩個甲氧基連接 位置為C-3和C-3'；另一苯環上的質子訊號δH 7.02 (H-2)和δC 147.20 (C-4)有3J的關連，δH 7.05 (H-5)和δC 138.63 (C-1)有3J的關連，δH 6.91 (H-6)和δC 147.20 (C-4)有3J的關連，表明A環上，C-4有羥基取代。可 推 知 該 化 合 物 為benzofuran type neolignan的 骨 架 ， 平 面 結 構 與 dihydrodehydrodiconiferyl alcohol一致67。
此化合物的比旋光度[α]25D − 26.3° (c 3.8, MeOH)。NOESY光譜 (Fig. 3-3-6)顯示，δH 5.47 (H-7)與δH 3.74 (H-9)有1H-1H相關；而δH 3.45 (H-8)與δH 6.93 (H-2)也有1H-1H相關，由此可知H-7、H-8為trans的構 型。
綜合以上光譜數據，並透過文獻66-68比對，確定compound 3為 dihydrodehydrodiconiferyl alcohol，是一已知化合物。
Table 3-3. 13C and 1H NMR chemical shifts in methanol-d4 ; 1H multiplicities and coupling constants for 3.
Position δ13Ca δ1Hb
1 134.80
2 110.48 6.93 d (J = 2.0)
3 149.08
4 147.51
5 116.11 6.74 d (J = 8.0)
6 119.69 6.81 dd (J = 2.0, 8.0)
7 88.98 5.47 d (J = 6.4)
8 55.47 3.45 m
9 64.98 3.74 dd (J = 7.2, 11.2)
3.86 m
1' 136.91
2' 114.03 6.71 s
3' 145.01
4' 147.51
5' 129.86
6' 117.90 6.71 s
7' 32.91 2.61 t (J = 7.2)
8' 35.84 1.80 m
9' 62.22 3.55 t (J = 6.4)
3-OMe 56.33 3.80 s
3'-OMe 56.71 3.84 s
a Spectrum recorded at 100 MHz in methanol-d4 b Spectrum recorded at 400 MHz in methanol-d4
Fig. 3-3-1. Compound 3之1H NMR光譜
Fig. 3-3-2. Compound 3之13C NMR光譜
Fig. 3-3-3. Compound 3之DEPT光譜
Fig. 3-3-4. Compound 3之HMQC光譜
Fig. 3-3-5. Compound 3之HMBC光譜
Fig. 3-3-6. Compound 3之NOEY光譜
200 300 400nm 42443344
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
Abs
Fig. 3-3-7. Compound 3之UV光譜
Fig. 3-3-8. Compound 3之IR光譜
Fig. 3-3-9. Compound 3之ESIMS圖譜
第四節、化合物 4 之結構解析
一個與苯環共軛的C=O δC 197.94 (C-4)，此為dihydroflavnone的特徵訊 號；δH 3.49~δH 5.08發現糖的特徵吸收訊號，推知為dihydroflavnone glycoside的結構。藉由1H NMR圖譜得知，芳香族質子區有一組A2B2型質子吸收訊號δH 7.39 (2H, d, J = 8.4 Hz)、δH 6.90 (2H, d, J = 8.4 Hz)，推測為flavanone B環上之H-2', 6'與H-3', 5'之質子吸收訊號，其碳 值分別為δC 129.07 (C-2', 6')、δC 116.19 (C-3', 5')、δC 158.80 (C-4')由此 推知flavanone B環為對位羥基取代之苯環。而δH 6.14 (1H, s)、δH 6.16
(1H, s)為H-6及H-8之質子吸收訊號，其碳光譜吸收訊號分別為δC 97.61 (C-6)、δC 96.44 (C-8)；除此之外，核磁共振氫譜中顯示δH 12.07 (1H, s)，為典型5-OH與C-4位上的C=O形成分子內氫鍵所造成，近一步確 認A環為5, 7二羥基取代。由此推之化合物3的flavanone屬於naringenin 的骨架；其1H、13C光譜數據，經由文獻72比對，完全ㄧ致。
醣基訊號峰由anomeric質子訊號δH 5.08 (1H, d, J = 7.2 Hz, Glu-H-1) 推 知 其 為β-構 型 ， 碳 譜 顯 示δC 101.02、δC 74.45、δC 77.86、δC
71.08、δC 77.74、δC 62.47推知其為六碳糖；經文獻69-71比對發現其
1H、13C光譜數據與β-D-glucose 完全ㄧ致；除此外藉由HMBC圖譜(Fig.
3-4-5)得知δH 5.08 (Glu-H-1)與flavanone上δC 164.70 (C-7)有3J的關連，
因此確認β-D-glucoside以C-1位置與flavanone之C-7相連；連接方式為 Glu-1-O-7。
綜 合 以 上 光 譜 數 據 ， 並 透 過 文 獻72比 對 ， 確 定compound 4為 naringenin-7-O-glucoside，是一已知化合物。
Table 3-4. 13C and 1H NMR chemical shifts in acetone-d6 ; 1H multiplicities and coupling constants for 4.
Position δ13Ca δ1Hb
Glu.-2 74.45 3.55 m
Glu.-3 77.86 3.59 m
Glu.-4 71.08 3.49 m
Glu.-5 77.74 3.50 m
Glu.-6 62.47 3.85 m
3.70 m
5-OH 12.07 s
a Spectrum recorded at 100 MHz in acetone-d6 b Spectrum recorded at 400 MHz in acetone-d6
Fig. 3-4-1. Compound 4之1H NMR光譜
Fig. 3-4-2. Compound 4之13C NMR光譜
Fig. 3-4-3. Compound 4之DEPT光譜
Fig. 3-4-4. Compound 4之HMQC光譜
Fig. 3-4-5. Compound 4之HMBC光譜
Fig. 3-4-6. Compound 4之UV光譜
Fig. 3-4-7. Compound 4之IR光譜
Fig. 3-4-8. Compound 4 之 ESIMS 圖譜
第五節、化合物 5 之結構解析
核磁共振氫光譜(pyridine-d5; Fig. 3-5-1, Table 3-5)顯示6個methyl質 子吸收訊號δH 1.73 (3H, s)、δH 1.16 (3H, s)、δH 1.09 (3H, s)、δH 1.69
38.73、δC 42.06、δC 48.18，1個雙鍵四級碳δC 139.71，2個羰基四級碳 δC 180.51，1個連氧四級碳δC 72.45；推測此化合物屬於triterpene類型 結構。
該化合物1H、13C光譜數據與compound 2非常類似，差別僅在於 化合物2中的一個siglet methyl，變為doublet methyl，同時一個連氧的 methine轉變為一個連氧四級碳。由此經數據比對合理推測化合物2之 29-CH3位移至C-19，即為compound 5。
經與文獻63,64,73,74比對，確定compound 5為trachelosperogenin A是 一已知化合物。
Table 3-5. 13C and 1H NMR chemical shifts in pyridine-d5 ; 1H multiplicities and coupling constants for 5.
Position δ13Ca δ1Hb
a Spectrum recorded at 100 MHz in pyridine-d5 b Spectrum recorded at 400 MHz in pyridine-d5
Fig. 3-5-1 Compound 5 之 1HNMR 光譜
Fig. 3-5-2 Compound 5之 13CNMR 光譜
Fig. 3-5-3. Compound 5 之 DEPT 圖譜
Fig. 3-5-4. Compound 5之IR光譜
Fig. 3-5-5. Compound 5 之 ESIMS 圖譜
第六節、化合物 6 之結構解析
OH
OH
O O
1 4
3
7
HO
Compound 6 為褐色結晶固體，由電灑式質譜(ESIMS) (Fig. 3-6-5) 分析顯示，其分子離子峰為m/z 197.1 [M − H]−，同時結合13C, 1H data 推算其分子式為C9H10O4。紅外線光譜(Fig. 3-6-4) IR νmax 3335 cm-1顯 示有OH的訊號，1683 cm-1為C=O之訊號，1616, 1540, 1447 cm-1為苯 環上C=C之訊號。紫外光吸收光譜(Fig. 3-6-3)顯示UV (MeOH) λmax 276 nm。
核磁共振氫光譜(methanol-d4; Fig. 3-6-1, Table 3-6)顯示此化合物 苯環上有質子吸收訊號於δH 7.04 (2H, s, H-2, H-6)， 4.26 (2H, q, J = 7.2 Hz, H2-8)，1.33 (3H, t, J = 7.2 Hz, 9-CH3)。而13C NMR (Fig. 3-6-2)顯 示 ， 於δC 146.47、139.86有 苯 環 上 連 氧 碳 之 吸 收 訊 號 ， 推 測 其 C-3、C-4、C-5位上連有hydroxyl group；δC 168.56有C=O之吸收訊 號，推測為C-7位上的carboxyl group。
綜合以上論述，推測compound 6為ethyl gallate，其1H、13C光譜數
據，經由文獻75,76比對，完全ㄧ致，為已知化合物。
Table 3-6. 13C and 1H NMR chemical shifts in methanol-d4 ; 1H multiplicities and coupling constants for 6.
Position δ13Ca δ1Hb
1 121.76
2 109.99 7.04 s
3 146.47
4 139.68
5 146.47
6 109.99 7.04 s
7 168.56
8 61.67 4.26 q (J = 7.2)
9 14.64 1.33 t (J = 7.2)
a Spectrum recorded at 150 MHz in methanol-d4 b Spectrum recorded at 600 MHz in methanol-d4
Fig. 3-6-2. Compound 6 之 13C NMR 光譜
Fig. 3-6-3. Compound 6 之 UV 光譜
Fig. 3-6-4. Compound 6 之 IR 光譜
Fig. 3-6-5. Compound 6 之 ESIMS 圖譜
第七節、化合物 7 之結構解析
Compound 7 為褐色結晶固體，由電灑式質譜(ESIMS) (Fig. 3-7-5) 分析顯示，其分子離子峰為m/z 287.1 [M − H]−，同時結合13C, 1H data dihydroflavonol的特徵吸收訊號有二組連氧methine碳氫吸收訊號δC
84.94 (C-2)、δH 4.97 (1H, d, J = 12.0 Hz, H-2)、δC 73.63 (C-3)、δH 4.53 (1H, d, J = 12.0 Hz, H-3)；以及一個與苯環共軛的C=O δ C 198.48 (C-4)，推知為dihydroflavonol的結構。藉由1H NMR圖譜得知，芳香族 質子區有一組A2B2型質子吸收訊號δH 7.35 (2H, d, J = 8.4 Hz)、δH 6.82 (2H, d, J = 8.4 Hz)，推測為dihydroflavonol B環上之H-2', 6'與H-3', 5'之 質子吸收訊號，且其碳 (Fig. 3-7-2, Table 3-7)分別為δC 130.37 (C-2', 6 ')、δC 116.14 (C-3', 5')、δC 159.23 (C-4')，由此推之dihydroflavonol B環 為對位羥基取代之苯環。而δH 5.87 (1H, d, J = 1.8 Hz)、δH 5.91 (1H, br s)為H-6及H-8之質子吸收訊號，其碳光譜吸收訊號分別為δC 165.33
(C-5)、δC 97.35 (C-6)、δC 168.88 (C-7)、δC 96.32 (C-8)近一步確認A環 為5, 7 二羥基取代，由此推之化合物7屬於dihydroflavonol的骨架。
綜合以上光譜數據，並透過文獻81,95比對確定compound 7為3-β-hydroxynaringenin，是一已知化合物。
Table 3-7. 13C and 1H NMR chemical shifts in methanol-d4 ; 1H multiplicities and coupling constants for 7.
Position δ13Ca δ1Hb
2 84.94 4.97 d (J = 12.0)
3 73.63 4.53 d (J = 12.0)
4 198.48
5 165.33
6 97.35 5.87 d (J = 1.8)
7 168.88
8 96.32 5.91 br s
9 164.56
10 101.81
1' 129.83
2' 130.37 7.35 d (J = 8.4)
3' 116.14 6.82 d (J = 8.4)
4' 159.23
5' 116.14 6.82 d (J = 8.4)
6' 130.37 7.35 d (J = 8.4)
a Spectrum recorded at 150 MHz in methanol-d4 b Spectrum recorded at 600 MHz in methanol-d4
Fig. 3-7-1. Compound 7 之 1H NMR 光譜
Fig. 3-7-2. Compound 7 之 13C NMR 光譜
Fig. 3-7-3. Compound 7 之 UV 光譜
Fig. 3-7-4. Compound 7 之 IR 光譜
Fig. 3-7-5. Compound 7 之 ESIMS 圖譜
第八節、化合物 8 之結構解析
OH
OH
OH O
1 4
3
7
Compound 8 為褐色結晶固體，由電灑式質譜(ESIMS) (Fig. 3-8-5) 分析顯示，其分子離子峰為m/z 153.2 [M − H]−，同時結合13C, 1H data 推算其分子式為C7H6O4。紅外線光譜(Fig. 3-8-4) IR νmax 3123 cm-1顯示 有OH的訊號，1670 cm-1為C=O 之訊號，1602, 1522, 1423 cm-1為苯環 上C=C之訊號。紫外光吸收光譜(Fig. 3-8-3)顯示UV (MeOH) λmax 295, 260 nm。
核磁共振氫光譜(methanol-d4; Fig. 3-8-1 , Table 3-8)顯示此化合物 有ABX苯環質子吸收訊號δH 7.48 (1H, d, J = 1.6 Hz, H-2)、δH 6.82 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5)、δH 7.44 (1H, dd, J = 1.6, 8.4 Hz, H-6)。而13C NMR (Fig. 3-8-2)顯示，於δC 151.20、δC 145.68有苯環上連氧碳之吸收訊號，
推測C-3、C-4位上連有hydroxyl group；δC 170.57有C=O之吸收訊號，
推測為C-7位上的carboxyl group。
綜合以上光譜數據，並透過文獻78比對，確定compound 8為3,4-dihydroxybenzoic acid，是一已知化合物。
Table 3-8. 13C and 1H NMR chemical shifts in methanol-d4 ; 1H multiplicities and coupling constants for 8.
Position δ13Ca δ1Hb
1 123.98
2 117.68 7.48 d (J = 1.6)
3 145.68
4 151.20
5 115.77 6.82 d (J = 8.4)
6 123.06 7.44 dd (J = 1.6, 8.4)
7 170.57
a Spectrum recorded at 100 MHz in methanol-d4 b Spectrum recorded at 400 MHz in methanol-d4
Fig. 3-8-1. Compound 8 之 13H NMR 光譜
Fig. 3-8-2. Compound 8 之 13C NMR 光譜
Fig. 3-8-3. Compound 8 之 UV 光譜
Fig. 3-8-4. Compound 8 之 IR 光譜
Fig. 3-8-5. Compound 8 之 ESIMS 圖譜
第九節、化合物 9 之結構解析
Compound 9 為白色粉末固體，由電灑式質譜(ESIMS) (Fig. 3-9-9) 分析顯示，其分子離子峰為m/z 687.4 [M + Na]+，同時結合13C, 1H data
個四級碳訊號δC 49.96、δC 39.81、δC 38.97、δC 42.14、δC 45.94、δC
35.58，1個雙鍵四級碳訊號δC 144.24，1個羰基四級碳訊號δC 177.85。
推測此化合物屬於triterpene類型結構。
推測此化合物屬於triterpene類型結構。