高效液相層析儀之分析條件

利用螢光分光光度計(spectrofluorophotometer)掃描6種標準品，選擇 出最佳激發波長(excitation，EX)與發射波長(emission，EM)；DMP、DEP、

DBP、BBP、DEHP、DnOP之激發波長為280 nm和發射波長為330 nm，

以得到最佳分析感度；再利用高效液相層析儀與螢光偵測器進行檢測鄰 苯二甲酸酯類。設備條件(表7)，高效液相層析儀(HPLC)進行標準品與樣 本分析，使用的層析管柱為逆相管柱(5 μm C₁₈ 250×4.6 mm)與螢光偵測器 (fluorescence detector)之波長EX=280 nm和EM=330 nm，且於螢光偵測器 加裝cell temp controller(CTC)，分析過程中可進行螢光偵測器之溫控，以 提高分析時之穩定度，進而其敏感度相對提升。

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表 7、HPLC 儀器分析條件

Instruments System/Conditions Shimadzu system

Pump：LC-20AD HPLC

System controller：SCL-20A auto injector：SIL-20A column oven：CTO-20AC

Detector Fluorescence RF-10AXL cell temp controller：RF-10AXL super

CTC Temp：23 ℃

Column Shiseido 5 μm C18 250*4.6 mm Temp：40 ℃

Mobile phase (gradient system)

acetonitrile/H2O (v/v)=70%：30%(0~10 min)

↓

70%：30%→95%：5% (10~11 min)

↓

95%：5%, (11~24 min)

↓

70%：30%, (24~33 min)

Flow rate 1 mL/min Fluorescence wave EX=280 nm

EM=330 nm Injection volume 20 μL

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第二項、檢量線之建製

本研究選定之6種PAEs物質(DMP、DEP、DBP、BBP、DEHP、DOP)，

以 微 量 天 平 精 秤 後 ， 溶 於 甲 醇(MeOH)溶劑中，作為儲備溶液(stock solution)。以HPLC-Flu.分析獲得其層析圖譜，利用積分軟體積分圖譜，

以相對滯留時間作為定性依據，而波峰面積與標準品濃度來建製檢量線 濃度範圍，其中標準品須配置5點不同濃度，且各檢量線之相關係數(r)皆 均須達0.999以上。

第三項、分析方法之再現性

探討分析方法的可信度，藉由重複分析以證明分析方法之再現性，

本研究利用相同濃度之標準品進行5次的重複分析，針對波峰面積(peak area)與波峰高度(peak height)的變異係數(coefficient of variation；CV%)進 行解釋。同時進行精密度測定，分別為日內精密度(intra-day precision)和 日間精密度(inter-day precision)。日內精密度利用為高中低標準品之3種濃 度，同一天進行重複分析3次，計算高中低三種濃度測量值之平均值 (Mean)、標準差(S.D.)及變異係數(CV%)。日間精密度利用為高中低標準 品之3種濃度，重複分析3次共三天進行，計算高中低三種濃度測量值之 平均值(Mean)、標準差(S.D.)及變異係數(CV%)。

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第四項、方法偵測極限之測試

根據以美國材料試驗協會(American Society for Testing and

Materials，ASTM)的定義，以本系統之分析檢量線最低可定量濃度進行7 次重複分析，利用層析之波峰面積(peak area)進行計量，以其3倍標準差 (S.D.)再除以平均值(Mean)，再乘以分析之絕對濃度所得結果即為方法偵 測極限(Method detection limit，MDL)。

S.D.：標準差

Mean：算數平均數

Concentration：最低可定量濃度 Injection volume：注射體積

MDL = (3 × S.D./mean peak area) × concentration × injection volume

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第五項、樣本分析品質管制

為確保分析過程中實驗數據之可信度，因此以固定濃度之標準品作 為品管樣品，確保儀器穩定度及分析正確性，分析過程中於每分析10個 樣本後，以一個品管樣品進行檢測，待分析結束後，合併計算品管樣品 之滯留時間與波峰面積的變異程度。

第六項、樣本添加回收率

爲確保實驗萃取過程之準確性，因此配置高低不同濃度之標準品進 行樣本添加回收率，且添加樣本數為3個，在樣本中添加已知濃度的標準 品溶液，經萃取步驟後進行分析，計算添加樣本之波峰面積而給予定量 後，求得樣本添加回收率。

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