3.4 實驗方法
3.4.3 Anti-5nm GNPs Antiserum 對相同粒徑不同材質之奈米粒子的 QCM 頻
QCM 頻率響應
<實驗三>
使用藥品：去離子水(DD Water)、二氧化鈦(Titanium dioxide，TiO2，
5nm)、氧化鋅(Zinc oxide，ZnO，5nm)、四氧化三鐵(Ferric oxide black)、奈米金粒子(Au，5nm)、1X 生物緩衝劑。
使用儀器：華碩個人電腦(ASUS D670)、ICM 石英震盪器、ICM 10Mhz 振盪器、流體檢測儀(Liquid flow cells)、注射器、KDS 注射針幫 浦、安捷倫計頻器 53132A、樣本注入口。
實驗步驟：
1.配置不同濃度之二氧化鈦、氧化鋅及金奈米粒子溶液備用，其濃度 分別為 1X10-2、1X10-3、1X10-4、1X10-5、1X10-6 mg/ml，稀釋溶劑為 1X 生物緩衝劑，完成備用。
2.取出完成表面修飾前處理的 QCM 晶片，並以去離子水輕輕沖洗 QCM 金電極表面。
3.將 QCM 晶片裝置電極並放置流體檢測儀中。
4.開啟安捷倫計頻器 53132A 與 ICM 10Mhz 振盪器電源。
5.使 QCM 晶片電極兩端接於 ICM 10Mhz 振盪器，若連接成功計頻器
上會顯示約 9.997Mhz 的頻率響應，此為 QCM 晶片自然頻率。
6.設定 KDS 注射針幫浦緩衝劑流量 3ml/Hr，緩衝劑為去離子水。
7.開始 Excel 記錄頻率響應，等待 QCM 晶片動態穩定(±1Hz/60s)。
8.用注射器抽取 20μl 的樣品注入樣本注入口，並旋開開關。
9.記錄樣品注入後的頻率響應反應。
10.重複步驟 2.到步驟 9.，並更換不同濃度、不同材質之奈米粒子的 樣品。
<實驗四>
使用藥品：去離子水(DD Water)、二氧化鈦(Titanium dioxide，TiO2，
5nm)、氧化鋅(Zinc oxide，ZnO，5nm)、奈米金粒子(Au，5nm)。
使用儀器：華碩個人電腦(ASUS D670)、ICM 石英震盪器、ICM 10Mhz 振盪器、流體檢測儀(Liquid flow cells)、注射器、KDS 注射針幫 浦、安捷倫計頻器 53132A、樣本注入口。
實驗步驟：
1.配置不同濃度之二氧化鈦、氧化鋅、四氧化三鐵與奈米 金粒子溶 液備用，其濃度分別為 1X10-4、1X10-5、1X10-6 mg/ml，稀釋溶劑為 1X 生物緩衝劑，完成備用。
2.取出完成表面修飾 Anti-5nm GNPs Antiserum 的 QCM 晶片，並以去 離子水輕輕沖洗 QCM 金電極表面。
3.將 QCM 晶片裝置電極並放置流體檢測儀中。
4.開啟安捷倫計頻器 53132A 與 ICM 10Mhz 振盪器電源。
5.使 QCM 晶片電極兩端接於 ICM 10Mhz 振盪器，若連接成功計頻器 上會顯示約 9.997Mhz 的頻率響應，此為 QCM 晶片自然頻率。
6.設定 KDS 注射針幫浦緩衝劑流量 3ml/Hr，緩衝劑為去離子水。
7.開始 Excel 記錄頻率響應，等待 QCM 晶片動態穩定(±1Hz/60s)。
8.用注射器抽取 20μl 不同濃度之二氧化鈦、氧化鋅、四氧化三鐵及 奈米金粒子的樣品注入樣本注入口，並旋開開關。
9.記錄樣品注入後的頻率響應反應。
10.重複步驟 2.到步驟 9.，並更換不同濃度、不同材質之奈米粒子的 樣品。
3.4.4 奈米金粒子與禽流感 H5N1(peptide) conjugate 的 QCM 頻率響
應
<實驗五>
使用藥品：去離子水(DD Water)、H5N1(Peptide)、1X 生物緩衝劑。
使用儀器：華碩個人電腦(ASUS D670)、ICM 石英震盪器、ICM 10Mhz 振盪器、流體檢測儀(Liquid flow cells)、注射器、KDS 注射針幫 浦、安捷倫計頻器 53132A、樣本注入口。
實驗步驟：
1.配置不同濃度的 H5N1(Peptide)，其濃度比例為 0.01X、0.008X、
0.0067X、0.0057X、0.005X、0.0044X、0.004X、0.0036X、0.0033X，
稀釋溶劑為 1X 生物緩衝劑，保存至 4 ℃冰箱備用。
2.取出完成表面修飾 Anti-H5N1(Peptide)-17nm Antiserum 的 QCM 晶 片，並以去離子水輕輕沖洗 QCM 金電極表面。
3.將 QCM 晶片裝置電極並放置流體檢測儀中。
4.開啟安捷倫計頻器 53132A 與 ICM 10Mhz 振盪器電源。
5.使 QCM 晶片電極兩端接於 ICM 10Mhz 振盪器，若連接成功計頻器 上會顯示約 9.997Mhz 的頻率響應，此為 QCM 晶片自然頻率。
6.設定 KDS 注射針幫浦緩衝劑流量 3ml/Hr，緩衝劑為去離子水。
7.開始 Excel 記錄頻率響應，等待 QCM 晶片動態穩定(±1Hz/60s)。
8.用注射器抽取 20μl H5N1(Peptide) 的樣品注入樣本注入口，並 旋開開關。
9.記錄樣品注入後的頻率響應反應。
10.重複步驟 2.到步驟 10.，並更換不同濃度的 H5N1(Peptide)。
<實驗六>
使用藥品：去離子水(DD Water)、H5N1(Peptide)、奈米金粒子(Au，
17nm)、1X 生物緩衝劑。
使用儀器：華碩個人電腦(ASUS D670)、ICM 石英震盪器、ICM 10Mhz 振盪器、流體檢測儀(Liquid flow cells)、注射器、KDS 注射針幫 浦、安捷倫計頻器 53132A、樣本注入口。
實驗步驟：
1.配置不同濃度的 H5N1(Peptide)，其濃度比例為 0.01X、0.008X、
0.0067X、0.0057X、0.005X、0.0044X、0.004X、0.0036X、0.0033X，
稀釋溶劑為 1X 生物緩衝劑，保存至 4 ℃冰箱備用。
2.取出完成表面修飾 Anti-H5N1(Peptide)-17nm Antiserum 的 QCM 晶 片，並以去離子水輕輕沖洗 QCM 金電極表面。
3.將 QCM 晶片裝置電極並放置流體檢測儀中。
4.開啟安捷倫計頻器 53132A 與 ICM 10Mhz 振盪器電源。
5.使 QCM 晶片電極兩端接於 ICM 10Mhz 振盪器，若連接成功計頻器 上會顯示約 9.997Mhz 的頻率響應，此為 QCM 晶片自然頻率。
6.設定 KDS 注射針幫浦緩衝劑流量 3ml/Hr，緩衝劑為去離子水。
7.開始 Excel 記錄頻率響應，等待 QCM 晶片動態穩定(±1Hz/60s)。
8.將 H5N1(Peptide)與奈米金粒子以體積比 1:1 的方式均勻混合。
9.用注射器抽取 20μl H5N1(Peptide)與奈米金粒子 conjugate 的樣 品注入樣本注入口，並旋開開關。
10.記錄樣品注入後的頻率響應反應。
11.重複步驟 2.到步驟 10.，並更換不同濃度的 H5N1(Peptide) 與奈 米金粒子混合之樣本。