貳、 BALB/c 小鼠活體實驗方法
第二節 CCY1a-E2 於活體動物之抗癌實驗的結果
（1）WEHI-3/BALB/c 血癌動物模式建立
將WEHI-3 細胞以 5x10
6
、1x106
、2x105
等不同細胞數，以尾部靜脈注射方 式（i.v.）轉植入 BALB/c 小鼠體內，於 0-28 天期間，每週根據血癌之臨 床特徵檢測是否順利誘發血癌病變並犧牲一批小鼠。對照於正常小鼠，注射WEHI-3 細胞（5x10
6
）之小鼠於第14 天後體重開始持續下降；注射 WEHI-3 細胞（1x106
）之小鼠於第21 天後體重開始持續下降（表三）。同 時其活動力降低，毛色光澤度差，有身體蜷曲之現象。癌細胞（5x106
、 1x106
、2x105
）注射後 28 天之小鼠，其脾臟有腫大的現象。由 H-E 染色 之脾臟組織切片觀察到WEHI-3（1x106
）轉植後28 天，其脾臟紅漿區內 有明顯的癌細胞浸潤（圖十六）。以免疫螢光染色分析小鼠週邊血之白 血球細胞族群，對照正常小鼠，發現WEHI-3（1x106
）轉植28 天後之小 鼠其表面抗原 CD45+
（leukocyte）、CD11b+
（natural killer cell、monocyte、granulocyte）、CD14
+
（monocyte）的細胞族群有增加的趨勢；CD3+
（T lymphocyte）、CD19+
（B lymphocyte）、Mac-3+
（mononuclear phagocyte）的細 胞族群則無明顯變化（圖十七）。因此推論以尾部靜脈注射5x106
或1x106
WEHI-3 細胞的小鼠，能在第 28 天後成功地誘導血癌病變生成。（2）CCY1a-E2 之七天毒性試驗
受到 CCY1a-E2 的最高溶解度及靜脈注射的體積限制，每隻小鼠每次可 注射的最高劑量為100 mg/kg。因此我們分別以 100、50、5 mg/kg/day 三 種劑量連續注射七天進行毒性試驗，並以注射同體積 2-glycofurol（賦型 劑）之小鼠為對照組。實驗結果顯示：與對照組及正常小鼠相比，注射 CCY1a-E2 的小鼠活動力及毛色光澤均無明顯差異（圖十八），其脾臟及 肝臟與正常老鼠一樣並無腫大或變形；但是所有給藥及賦型劑小鼠之體 重有增加的現象（表四）。血清之生化檢查值顯示，實驗組小鼠與對照 組小鼠之LDH（lactate dehydrogenase）、ALB（albumin）、PRO（total protein）、
AST/GOT（aspartate aminotransferase）、ALT/GPT（alanine aminotransferase）、
CRE（creatinine）、BUN（blood urea nitrogen）等數值並無差異；但是所有 給藥及賦型劑小鼠之血清GLC（glucose）濃度均顯著提高（表五）。
（3）CCY1a-E2 之二十八天毒性試驗
根據上述結果，我們亦以 100 mg/kg/day 之 CCY1a-E2 進行二十八天毒性 試驗。BALB/c 小鼠以尾部靜脈注射連續投予藥物或賦型劑 7 天，再經 21 天（即第 28 天）將小鼠犧牲。注射 CCY1a-E2、賦型劑之小鼠與正常 小鼠三者間的體重、脾臟及肝臟改變（表六），活動力及毛色光澤均無 明顯差異。實驗組小鼠與對照組小鼠之LDH、ALB、GLC、PRO、GOT、
GPT、CRE、BUN 等八項血清生化檢查值除了 LDH 顯著下降外其餘無差 異（表七）。因此推論CCY1a-E2 在 100 mg/kg/day 劑量下對 BALB/c 小鼠並 無明顯的毒性。
（4）以 WEHI-3/BALB/c 血癌動物模式評估 CCY1a-E2 的抗癌作用
給予 BALB/c 小鼠 CCY1a-E2（100 mg/kg/day）連續七天，觀察七天及二十 八天並無明顯的毒性，且離體實驗中亦證實其能有效地抑制 WEHI-3 細 胞增殖，於是我們根據圖十九的實驗設計流程圖，以 WEHI-3/BALB/c 小 鼠來評估CCY1a-E2 治療血癌效能。
第28 天時各組小鼠存活率（圖二十）分別為：A 組正常小鼠為 100%（8/8）； B 組注射 WEHI-3（1x10
6
）的小鼠為 75%（6/8）；C 組給予 CCY1a-E2 的小 鼠為 87.5%（7/8）；D 組注射 WEHI-3 細胞且同時連續七天給予 CCY1a-E2 的小鼠為 100%（8/8）；E 組給予 WEHI-3 細胞一週後再連續七天給予 CCY1a-E2 的小鼠為 75%（6/8）。然而 D 組或是 E 組小鼠其平均體重下降 的程度比 B 組小鼠顯著減緩，且和正常小鼠體重無明顯差異（表八）。C 組、D 組或 E 組小鼠之毛色光澤及活動力皆較 B 組小鼠佳（圖二十一、
A）。對照 B 組小鼠發現，D 組或是 E 組小鼠其鼠蹊及腸繫膜淋巴結、脾 臟及肝臟腫大的情形有明顯降低至與正常小鼠無顯著差異（表九；圖二 十一、B,C,D）。以螢光免疫染色法分析週邊血液之白血球細胞表面抗原
發現：對照B 組小鼠，D 組或 E 組小鼠之其表面抗原 CD45
+
（leukocyte）、CD11b
+
（natural killer cell、monocyte、granulocyte）、CD14+
（monocyte）的細 胞族群增加的趨勢降低至與正常小鼠無顯著差異；D 組或 E 組小鼠之其 表面抗原 Mac-3+
（mononuclear phagocyte）的細胞族群有顯著地增加；E 組小鼠之CD3+
（T lymphocyte）、CD19+
（B lymphocyte）的細胞族群有增加 的趨勢（圖二十二）。根據以上結果推論，連續 7 天靜脈注射 CCY1a-E2（100 mg/kg/day）給予 WEHI-3/BALB/c 血癌小鼠確實具有減緩血癌病變的 功效。