CATGCA Y N N Seed-specific
E-box Y Y Y Seed-specific
ACACNNG Y Y Y Embryo-specific
SEF3 Y Y N Embryo-specific
SEF4 N N Y Embryo-specific
AGAAA Y N N Pollen-specific
ASF1-motif Y Y Y Auxin and/or SA-responsive
CATATG Y Y Y Auxin-responsive
W-box Y Y Y JA-responsive
ABRE Y Y Y ABA-responsive
MYB1AT Y Y N Drought, ABA-responsive
MYC Y Y Y Drought, ABA-responsive
ELRE Y Y N Elicitor-responsive
GT1 Y Y Y Pathogen and salt-responsive
LTRE Y N Y Low temperature-responsive
圖九、Osm10 抗血清的效價分析結果。
取 80%飽和濃度硫酸銨沉澱的水稻細胞分泌性蛋白質樣品（2 μg），注入樣品槽 為 6.8 cm 寬的 SDS 膠片中，經電泳分離後，將蛋白質轉漬到硝化纖維膜上。再 以解剖刀將硝化纖維膜切成 3 mm 寬的膜條，估計每片膜條各有 30 ng Osm10，
隨後將兔 A 與兔 B (Osm10 抗血清生產兔) 的抗血清進行一系列稀釋，作為免疫 染色的一級抗體，N 表 non-immune rabbit 的血清；圖中的 lane 1~4 分別代表兔抗 血清經 3 x 104、1 x 105、3 x 105、1 x 106等倍數的稀釋液，圖右側箭頭指示 10 kDa 的位置。
A.
B.
圖十、Osm10 抗血清的專一性測試結果。
A. 將 80%飽和濃度硫酸銨沉澱的 total Osm proteins 樣品及 cytochrome C 樣品，
進行電泳分離與 CBB 染色的結果。圖中標示「1」表加入 2.63 μg total Osm proteins；
標示「2」表加入 1 μg cytochrome C；標示「3」表加入 3 μg cytochrome C。B. 將 80%飽和濃度硫酸銨沉澱的 total Osm proteins 樣品及 cytochrome C 樣品，進行電 泳分離與免疫染色分析，圖中「O1」表加入 210 ng total Osm proteins (約有 80 ng Osm10)；「C1」表加入 80 ng cytochrome C；「C3」表加入 240 ng cytochrome C。
此分析所使用的 1 級抗體為本研究生產的 RA-Osm10 抗血清和當作負對照組的 NIR 血清。圖右側箭頭標記 Osm10 的分子量位置。
A.
B.
圖十一、水稻成熟植株蛋白質 Osm10 含量分析。
A. 水稻植株不同組織以及種子的蛋白質樣品（10 μg）進行電泳分離與 CBB 染 色的結果。「R」表示根，「S」表示莖，「L」表示葉，「Em」表示胚，「En」表示
胚乳，「M」表示培養基，MW 為蛋白質分子量標準品。B. 水稻植株不同組織以
及種子的蛋白質樣品（0.3 μg）與水稻細胞培養基蛋白質樣品（0.1 μg）進行 Osm10
抗血清免疫轉漬分析，「R」表示根，「S」表示莖，「L」表示葉，「Em」表示胚，
「En」表示胚乳，「M」表示培養基。此分析所使用的 1 級抗體為本研究生產的 RA-Osm10 抗血清和當作負對照組的 NIR 血清。圖右側箭頭標記 Osm10 的分子 量位置。
A.
B.
圖十二、水稻幼苗蛋白質 Osm10 含量分析。
A. 水稻乾燥種子與發芽三天後的幼苗蛋白質樣品（10 μg）進行電泳分離與 CBB 染色的結果。「Em」表示胚，「En」表示胚乳，「C」表示幼苗胚芽鞘 (coleoptile)，
「R」表示胚根 (primary root)，MW 為蛋白質分子量標準品。B. 水稻種子發芽 三天後的幼苗蛋白質樣品（0.3 μg）與水稻細胞培養基蛋白質樣品（0.1 μg）進行
Osm10 抗血清免疫轉漬分析，「C」表示幼苗胚芽鞘，「R」表示胚根，「En」表示
胚乳，「M」表示培養基。此分析所使用的 1 級抗體為本研究生產的 RA-Osm10
抗血清和當作負對照組的 NIR 血清。圖右側箭頭標記 Osm10 的分子量位置。
A. B.
圖十三、水稻花與乳熟期種子蛋白質 Osm10 含量分析。
A. 水稻花與授粉後 14 天的乳熟期種子蛋白質樣品（10 μg）進行電泳分離與 CBB 染色的結果。「F」表示花，「I」表示授粉後 14 天的乳熟期種子 (immature seed)，
MW 為蛋白質分子量標準品。B. 水稻花與授粉後 14 天的乳熟期種子蛋白質樣品
（0.3 μg）與水稻細胞培養基蛋白質樣品（0.1 μg）進行 Osm10 抗血清免疫轉漬
分析，「F」表示花，「S」表示授粉後 14 天的乳熟期種子，「M」表示培養基。此
分析所使用的 1 級抗體為本研究生產的 RA-Osm10 抗血清和當作負對照組的 NIR 血清。圖右側箭頭標記 Osm10 的分子量位置。
A.
B.
圖十四、野生稻以及不同亞種之栽培稻細胞表現 Osm10。
A. 野生稻以及不同亞種之栽培稻細胞的培養基蛋白質樣品（10 μg）進行電泳分 離與 CBB 染色的結果。「1」表示 O. alta，「2」表示 O. glaberrima，「3」表示 O.
mtipogon，「4」表示 O. nivara，「5」表示 TWR-6，「6」表示 TZS10，「7」表示
TK1，「8」表示 TNG67，MW 為蛋白質分子量標準品。B. 野生稻以及不同亞種
之栽培稻細胞的培養基蛋白質樣品（0.1 μg）進行 Osm10 抗血清免疫轉漬分析，
「1」表示 O. alta，「2」表示 O. glaberrima，「3」表示 O. mtipogon，「4」表示 O.
nivara，「5」表示 TWR-6，「6」表示 TZS10，「7」表示 TK1，「8」表示 TNG67。
此分析所使用的 1 級抗體為本研究生產的 RA-Osm10 抗血清和當作負對照組的 NIR 血清。圖右側箭頭標記 Osm10 的分子量位置。
A.
圖十六、水稻細胞培養基蛋白質的 in vitro 抗真菌實驗。
以含有 0、50 和 100 μg 水稻細胞培養基蛋白質 80 μL 的 50 mM acetate buffer pH 5.0 處理於 26℃、黑暗培養條件下的真菌（A）Rhizoctonia solani、（B）Fusarium
moniliforme、
（C）Bipolaris oryzae 和（D）Sarocladium oryzae。附錄
附錄一、縮寫對照表
縮寫 全名
2,4-D 2,4-dichlorophenoxy acetic acid ABA Abscisic acid
AmS Ammonium sulfate APS Ammonium persulfate
BLAST Basic local alignment search tool
bp Base pair
bpb Bromophenol blue BSA Bovine serum albumin CBB Coomassie Brilliant Blue CFA Freund’s complete adjuvant
CHAPS 3-(3-cholamidopropyl) dimethylammonio-1-propanesulfonate DAP Day after pollination
IEF Isoelectric focusing
IFA Freund’s incomplete adjuvant IPG Immobilized pH gradient
LC-MS/MS Liquid chromatography-mass spectrometry LTP Lipid transfer protein
MeJA Methyl-jasmonic acid MS Murashige and Skoog
MudPIT Multi-dimensional protein identification technology MW Molecular weight
MWCO Molecular weight cut out
Osm10 Oryza sativa medium 10-kDa protein PBS Phosphate-buffered saline
pI Isoelectric point
PR protein Pathogen-related protein SA Salicylic acid
SAR Systemic acquired resistance SDS Sodium dodecyl sulfate
SDS-PAGE Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis TEMED N,N,N,‘N’-tetramethylethylene-diamine
Tris Tris (hydroxymethyl) aminomethane
附錄二、中英對照表
Lipid transfer protein 脂質傳送蛋白
Ligand 配體
Lysophosphatidylcholine 溶血磷脂醯膽鹼
Methyl jasmonate 甲基茉莉酸
Model system 模型系統
Multi-dimensional protein identification technology 多維蛋白質鑑定技術
Oomycetes 卵菌綱
Pythium
腐黴屬Pythium aphanidermatum
腐黴菌Receptor 受器
Rhizoctonia solani
立枯絲核菌Salicylic acid 水楊酸
Sarocladium oryzae
葉鞘腐敗菌Sclerotium rolfsii
白絹菌Secretome 分泌蛋白質體
Signal peptide 訊號序列
Systemic acquired resistance 系統獲得抗性
Titer 效價
Transposon 轉位子
Wax 蠟
附錄三、Murashige-Skoog 培養液配方
- Stock 1-6 are stored at 4℃ and stocks 7-8 at -20℃. Sucrose is added freshly.
- This recipe is originated from Dr. L.-F. Liu, Dep. of Agronomy, NTU.
附錄四、水稻細胞分泌之 LTP1：Osm10-I 的序列資料
LOCUS BAF27425 119 aa linear PLN 07-AUG-2009 DEFINITION Os11g0114900 [Oryza sativa Japonica Group].
ACCESSION BAF27425 Namiki,N., Mizuno,H., Yamamoto,K., Antonio,B.A., Baba,T., Sakata,K., Nagamura,Y., Aoki,H., Arikawa,K., Arita,K., Bito,T.,
Couloux,A., Segurens,B., Wincker,P., D'Hont,A., Scarpelli,C.,
CONSRTM International Rice Genome Sequencing Project TITLE The map-based sequence of the rice genome
proteins that facilitate the transfer of fatty acids, phospholipids, glycolipids, and steroids between
membranes. In addition to lipid transport and...; cd01960"
/db_xref="CDD:72939"
Site order(33,37,41,44,59,62..63,72,75,78..79,82,94,97..98, 105..107,109..110)
/site_type="other"
/note="hydrophobic cavity"
/db_xref="CDD:72939"
CDS 1..119
/gene="Os11g0114900"
/coded_by="join(AP008217.2:679124..679473, AP008217.2:679580..679589)"
/note="Similar to Nonspecific lipid-transfer protein (LTP) (Fragment);
contains InterPro domain(s): IPR000528, IPR003612;
has GO asignment(s): GO:0006869, GO:0008289;
supported by AK063683"
ORIGIN
1 marpannnya aavmvvallv aapaasavtc gqvvsmlapc imyatgrvsa ptggccdgvr 61 tlnsaaatta drqttcaclk qqtsamgglr pdlvagipsk cdvnipyais pstdcsrvh
附錄五、水稻細胞分泌之 LTP1：Osm10-II 的序列資料
LOCUS NP_001065984 119 aa linear PLN 08-JUN-2010 DEFINITION Os12g0114500 [Oryza sativa Japonica Group].
ACCESSION NP_001065984
VERSION NP_001065984.1 GI:115486994 DBSOURCE REFSEQ: accession NM_001072516.1 KEYWORDS .
AUTHORS Tanaka,T., Antonio,B.A., Kikuchi,S., Matsumoto,T., Nagamura,Y., Numa,H., Sakai,H., Wu,J., Itoh,T., Sasaki,T., Aono,R., Fujii,Y.,
/db_xref="taxon:39947"
附錄六、水稻細胞分泌之 LTP1：Osm10-III 的序列資料
LOCUS BAF06568 120 aa linear PLN 07-AUG-2009 DEFINITION Os01g0822900 [Oryza sativa Japonica Group].
ACCESSION BAF06568
Couloux,A., Segurens,B., Wincker,P., D'Hont,A., Scarpelli,C.,
proteins that facilitate the transfer of fatty acids, phospholipids, glycolipids, and steroids between
membranes. In addition to lipid transport and...; cd01960"
/db_xref="CDD:72939"
Site order(34,38,42,45,59,62..63,72,75,78..79,82,95,98..99, 106..108,110..111)
/site_type="other"
/note="hydrophobic cavity"
/db_xref="CDD:72939"
CDS 1..120
/coded_by="complement(join(AP008207.2:36886214..36886223, AP008207.2:36886310..36886662))"
/note="Similar to Lipid transfer protein;
contains InterPro domain(s): IPR000528, IPR003612;
has GO asignment(s): GO:0006869, GO:0008289;
supported by AK120044"
ORIGIN
1 maprcatlav vvvlvaavva pptavraais csavyntlmp clpyvqaggt vpraccggiq 61 sllaaanntp drrticgclk nvangasggp yitraaalps kcnvslpyki stsvncnain
附錄七、Osm10-I promoter 序列
附錄八、Osm10-II promoter 序列
附錄九、Osm10-III promoter 序列
附錄十、Osm10-I 與 Osm10-III promoter 序列的 blast 結果。