DPPH 自由基清除率探討

1. 不同條件下超臨界二氧化碳流體萃取之台灣真柏心材萃取物 DPPH 自由基 清除預測試結果

不同條件下超臨界二氧化碳流體萃取之台灣真柏心材萃取物 DPPH 自由基 清除預測試結果如圖十三、十四、十五、十六、十七、十八所示。圖十三為不同 溫度條件下以 300 bar 萃取之抗氧化結果，結果顯示於室溫反應 30 分鐘後，以 溫度 35 、 40 、 45 、 50 、 55 ℃ 萃取之萃取物於最終濃度 2.5 mg/mL 時，

其 DPPH 自由基清除率分別為 62 ％ 、 60 ％ 、 68 ％ 、 65 ％ 和 80 ％，

其中以 55 ℃ 萃取之萃取物 DPPH 自由基清除效應在 30 分鐘時結果最為顯著。

圖十三、以不同溫度條件下以 300 bar 萃取之反應 0-30 分鐘之 DPPH 自由基 清除率

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圖十四為不同壓力條件下溫度 55 ℃ 萃取之抗氧化結果，結果顯示於室溫 反應 30 分鐘後，以壓力 150 、 200 、 250 、 300 、 350 bar 萃取之萃取物 於最終濃度 2.5 mg/mL 時，其 DPPH 自由基清除率分別為 71 ％ 、 72 ％ 、 90 ％ 、 80 ％ 和 66 ％，其中以 55 ℃、250 bar 萃取之萃取物 DPPH 自由 基清除效應在 10 分鐘時結果最為顯著。

圖十四、以不同壓力條件下以 55 ℃ 萃取之反應 0-30 分鐘之 DPPH 自由基清 除率

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圖十五為最適萃取溫度 55 ℃ 及壓力 250 bar 以甲醇 0 、 5 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 之萃取物抗氧化結果，結果顯示於室溫反應 30 分鐘後，以 甲醇共溶劑 0 、 5 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 萃取之萃取物於最終濃 度 2.5 mg/mL 時，其 DPPH 自由基清除率分別為 90 ％ 、 79 ％ 、 85 ％ 、 87 ％ 、 84 ％ 、 84 ％ 和 85 ％，其 DPPH 自由基清除效應在 0 分鐘時自 由基清除率就有高達 50 % ，因此正式測試時甲醇共溶劑 0 、 5 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 之萃取物都將進行測試。

圖十五、以不同 % 甲醇共溶劑條件下以 55 ℃、250 bar 萃取反應 0-30 分鐘 之 DPPH 自由基清除率

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圖十六為最適萃取溫度 55 ℃ 及壓力 250 bar 以乙酸乙酯 0 、 5 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 之萃取物抗氧化結果，結果顯示於室溫反應 30 分鐘 後，以乙酸乙酯共溶劑 0 、 5 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 萃取之萃取 物於最終濃度 2.5 mg/mL 時，其 DPPH 自由基清除率分別為 90 ％ 、 87 ％ 、 91 ％ 、 93 ％ 、 92 ％ 、 92 ％ 和 86 ％，以反應 30 分鐘來看其 DPPH 自 由基清除效應無太大差異。在 0 分鐘時乙酸乙酯共溶劑 0 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 自由基清除率就有高達 50 % 的樣品，因此正式測試時只選擇乙酸 乙酯共溶劑 0 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 之萃取物進行測試。

圖十六、以不同 % 乙酸乙酯共溶劑條件下以 55 ℃、250 bar 萃取反應 0-30 分 鐘之 DPPH 自由基清除率

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圖十七為最適萃取溫度 55 ℃ 及壓力 250 bar 以丙酮 0 、 5 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 之萃取物抗氧化結果，結果顯示於室溫反應 30 分鐘後，以 丙酮共溶劑 0 、 5 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 萃取之萃取物於最終濃 度 2.5 mg/mL 時，其 DPPH 自由基清除率分別為 90 ％ 、 89 ％ 、 88 ％ 、 88 ％ 、 87 ％ 、80 ％ 和 77 ％，以反應 30 分鐘來看其 DPPH 自由基清除 效應無太大差異，在 0 分鐘時丙酮共溶劑 0 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 自由基清除率就有高達 50 %，因此正式測試時選擇丙酮共溶劑 0 、 10 、 15 、 20 、 25 、30 % 之萃取物進行測試。

圖十七、以不同 % 丙酮共溶劑條件下以 55 ℃、250 bar 萃取反應 0-30 分鐘 之 DPPH 自由基清除率

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圖十八為最適萃取溫度 55 ℃ 及壓力 250 bar 以正己烷 0 、 5 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 之萃取物抗氧化結果，結果顯示於室溫反應 30 分鐘 後，以正己烷共溶劑 0 、 5 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 萃取之萃取物 於最終濃度 2.5 mg/mL 時，其 DPPH 自由基清除率分別為 90 ％ 、 75 ％ 、 79 ％ 、 83 ％ 、 82 ％ 、77 ％ 和 77 ％，以反應 30 分鐘來看，正己烷共 溶劑萃取之萃取物其 DPPH 自由基清除效應比其他三種共溶劑差，因此正式測 試時只選擇正己烷共溶劑 15 % 之萃取物進行測試。

圖十八、以不同 % 正己烷共溶劑條件下以 55 ℃、250 bar 萃取反應 0-30 分鐘 之 DPPH 自由基清除率

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2. 不同條件下超臨界二氧化碳流體萃取之萃取物 DPPH 自由基清除試驗結果 不同條件下超臨界二氧化碳流體萃取之萃取物 DPPH 自由基清除試驗結果 如圖十九、二十、二十一、二十二所示。圖十九是以不同 % 甲醇共溶劑條件下 以 55℃ 、250bar 萃取之 DPPH 自由基清除預測試結果進行進一步測試。 DPPH 甲醇溶液濃度為 0.5 mM，甲醇共溶劑 0 、 5 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30

% 之萃取物最終濃度為 2.5 mg/mL，結果顯示於室溫反應 30 分鐘後，其 DPPH 自由基清除率分別為 62 ％ 、 90 ％ 、 91 ％ 、 86 ％ 、 92 ％ 、 92 ％ 和 92 ％，由此可知有使用甲醇共溶劑進行萃取的萃取物其 DPPH 自由基清除效應 結果都非常顯著，而 0 % 甲醇共溶劑其 DPPH 自由基清除效應則非常不佳。

在 10 分鐘時甲醇共溶劑 5 、 10 、 20 、 25 、 30 % 自由基清除率有 80 % 以上，因此萃取物濃度效應時選擇甲醇共溶劑 5 、 10 、 20 、 25 、 30 % 之 萃取物進行進一步測試。

圖十九、以不同 % 甲醇共溶劑條件下以 55 ℃、250 bar 萃取之 0.5 mM DPPH 自由基清除率

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圖二十是以不同%乙酸乙酯共溶劑條件下以 55 ℃、250 bar 萃取之 DPPH 自由基清除預測試結果進行進一步測試。 DPPH 甲醇溶液濃度為 0.5 mM，乙酸 乙酯共溶劑 0 、 10 、 15 、 20 、 25 、 30 % 之萃取物最終濃度為 2.5 mg/mL，

結果顯示於室溫反應 30 分鐘後，其 DPPH 自由基清除率分別為 62 ％ 、 72

％ 、 81 ％ 、 81 ％ 、 90 ％ 和 93 ％，由此可知乙酸乙酯共溶劑 25 、 30

% 進行萃取的萃取物其 DPPH 自由基清除效應結果都非常顯著，而 0 % 乙酸 乙酯共溶劑其 DPPH 自由基清除效應則非常不佳。在 10 分鐘時乙酸乙酯共溶 劑 25 、 30 % 自由基清除率有 80 % 以上，因此萃取物濃度效應時選擇乙酸 乙酯共溶劑 25 、 30 % 之萃取物進行進一步測試。

圖二十、以不同 % 乙酸乙酯共溶劑條件下以 55 ℃、250 bar 萃取之 0.5 mM DPPH 自由基清除率

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圖二十一是以不同 % 丙酮和 15 % 正己烷共溶劑條件下以 55 ℃、250 bar 萃取之 DPPH 自由基清除預測試結果進行進一步測試。 DPPH 甲醇溶液濃度 為 0.5 mM，丙酮共溶劑 0、10、15、20、25、30 % 和 15 % 正己烷之萃取物最 終濃度為 2.5 mg/mL，結果顯示於室溫反應 30 分鐘後，其 DPPH 自由基清除 率分別為 62 ％ 、 83 ％ 、 93 ％ 、 92 ％ 、 92 ％ 、 91 ％ 和 55 ％，

由此可知丙酮共溶劑進行萃取的萃取物其 DPPH 自由基清除效應以 15、20、

25、30 % 結果都非常顯著，而 15 % 正己烷共溶劑其 DPPH 自由基清除效應 則非常不佳。在 10 分鐘時丙酮共溶劑 15、20、25、30 % 自由基清除率有 80 % 以上，因此萃取物濃度效應時只選擇丙酮共溶劑 15、20、25、30 % 之萃取物進 行進一步測試。

圖二十一、以不同 % 丙酮共溶劑條件下以 55 ℃、 250 bar 萃取之 0.5 mM DPPH 自由基清除率

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圖二十二是 15 % 正己烷共溶劑條件下以 55 ℃、250 bar 萃取之 DPPH 自 由基清除預測試結果進行進一步測試。 DPPH 甲醇溶液濃度為 0.5 mM ， 15 % 正己烷之萃取物最終濃度為 2.5 mg/mL，結果顯示於室溫反應 30 分鐘後，其 DPPH 自由基清除率為 55 ％，由此可知 15 % 正己烷共溶劑其 DPPH 自由基 清除效應則非常不佳。因此 15 % 正己烷共溶劑之萃取物不會進行進一步測試。

圖二十二、以 15 % 正己烷共溶劑條件下以 55 ℃、 250 bar 萃取之 0.5 mM DPPH 自由基清除率

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數值，以 EXCEL 進行回歸曲線分析，所得公式為 y = 0.236x + 15.61，經換算 30

% 丙酮共溶劑萃取物之 EC50 為 145.7 μg/mL。

圖二十三、不同條件下超臨界二氧化碳流體萃取之萃取物 DPPH 自由基清除率 之 EC50

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albicans、K. pneumoniae 和 B. subtilis 之抑菌效果，試驗結果顯示台灣真柏心材 萃取物全部的樣品對 C. albicans 都是有非常明顯的抑菌效果，由此可知台灣真柏

subtilis 之抑菌效果，試驗結果顯示台灣真柏心材萃取物全部的樣品對 B. subtilis 都是有抑菌效果，由此可知台灣真柏心材超臨界二氧化碳流體萃取物對 B.

subtilis 是有抑菌效果效果，因此進一步以紙錠擴散法來測定樣品的抑菌效果。