第四章、 結果
第二節、 DPPH 自由基清除率
1. 不同溫度之超臨界萃取物對 0.5 mM DPPH 自由基清除試驗結果
DPPH 自由基清除試驗中，取 100 μL 之 0.5 mM DPPH 溶液與 100 μL 濃 度 5 mg/mL 之不同溫度條件萃取物於 96 孔盤中混合，避光反應 60 分鐘後，
以波長 517 nm 測吸光值，其結果如圖十五所示。
不同溫度條件萃取物中，50 ℃ 有最佳 DPPH 自由基清除力 62.75 ± 0.72 %，
其次為 55 ℃ ( 59.75 ± 0.15 % ) 、 35 ℃ ( 55.86 ± 0.74 % ) 、 40 ℃ ( 55.48 ± 0.34
% )，而 45 ℃ DPPH 自由基清除力為 49.31 ± 0.82 % 是所有條件中最差的。
圖十四、不同溫度條件超臨界萃取物之 DPPH 自由基清除率。
Figure 14. DPPH scavenging of different temperatures.
49
2. 不同壓力之超臨界萃取物對 0.5 mM DPPH 自由基清除試驗結果
DPPH 自由基清除試驗中，取 100 μL 之 0.5 mM DPPH 溶液與 100 μL 濃 度 5 mg/mL 之不同壓力條件萃取物於 96 孔盤中混合，避光反應 60 分鐘後，
以波長 517 nm 測吸光值，其結果如圖十六所示。
不同壓力條件萃取物中，壓力 150 bar 有最佳 DPPH 自由基清除力 58.35
± 0.44 %，其次為 300 bar ( 55.86 ± 0.74 % ) 與 350 bar ( 55.63 ± 0.33 % )，200 bar 與 250 bar 之 DPPH 自由基清除力較差，分別為 51.06 ± 0.24 % 與 50.79 ± 0.45
%，所有組別 DPPH 自由基清除率皆高於 50 %。
圖十五、不同壓力條件超臨界萃取物之 DPPH 自由基清除率。
Figure 15. DPPH scavenging of different pressure.
50
3. 不同含量甲醇共溶劑之超臨界萃取物對 0.5 mM DPPH 自由基清除試驗結果 DPPH 自由基清除試驗中，取 100 μL 之 0.5 mM DPPH 溶液與 100 μL 濃 度 5 mg/mL 之不同含量甲醇共溶劑萃取物於 96 孔盤中混合，避光反應 60 分 鐘後，以波長 517 nm 測吸光值，其結果如圖十七所示。
不同含量甲醇共溶劑萃取物中，加入 15 % 甲醇共溶劑之條件有最佳 DPPH 自由基清除力 99.45 ± 0.23 %，其次為 9 % ( 88.91 ± 0.80 % ) 、 12 % ( 86.45 ± 0.59 % )，6 % 與 3 % 之 DPPH 自由基清除力較差，分別為 53.85 ± 0.58 % 與 39.91 ± 0.59 %，且低於未加入共溶劑之條件 ( 58.35 ± 0.44 % )。
圖十六、不同含量甲醇共溶劑超臨界萃取物之 DPPH 自由基清除率。
Figure 16. DPPH scavenging of different methanol cosolvent contents.
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4. 不同含量丙酮共溶劑之超臨界萃取物對 0.5 mM DPPH 自由基清除試驗結果 DPPH 自由基清除試驗中，取 100 μL 之 0.5 mM DPPH 溶液與 100 μL 濃 度 5 mg/mL 之不同含量丙酮共溶劑萃取物於 96 孔盤中混合，避光反應 60 分 鐘後，以波長 517 nm 測吸光值，其結果如圖十八所示。
不同含量丙酮共溶劑萃取物中，加入 3 % 丙酮共溶劑之條件有最佳 DPPH 自由基清除力 97.50 ± 1.10 %，其次為 15 % ( 75.88 ± 0.48 % )、12 % ( 73.22 ± 0.55 % )，9 % 與 6 % 之 DPPH 自由基清除力較差，分別為 68.53 ± 0.41 % 與 67.16 ± 1.10 %，所有條件之 DPPH 自由基清除率皆高於未加入共溶劑之條件 ( 58.35 ± 0.44 % )。
圖十七、不同含量丙酮共溶劑超臨界萃取物之 DPPH 自由基清除率。
Figure 17. DPPH scavenging of different acetone cosolvent contents.
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5. 不同含量乙酸乙酯共溶劑之超臨界萃取物對 0.5 mM DPPH 自由基清除試驗 結果
DPPH 自由基清除試驗中，取 100 μL 之 0.5 mM DPPH 溶液與 100 μL 濃 度 5 mg/mL 之不同含量乙酸乙酯共溶劑萃取物於 96 孔盤中混合，避光反應 60 分鐘後，以波長 517 nm 測吸光值，其結果如圖十九所示。
不同含量乙酸乙酯共溶劑萃取物中，加入 15 % 乙酸乙酯共溶劑之條件有最 佳 DPPH 自由基清除力 71.39 ± 0.62 %，其次為 12 % ( 66.95 ± 0.64 % ) 與 9 % ( 66.84 ± 0.82 % )，6 % 與 3 % 之 DPPH 自由基清除力較差，分別為 60.68 ± 0.30 % 與 54.56 ± 0.69 %，其中 3 % 乙酸乙酯共溶劑萃取物之 DPPH 清除率低 於未加入共溶劑之條件 ( 58.35 ± 0.44 % )。
圖十八、不同含量乙酸乙酯共溶劑超臨界萃取物之 DPPH 自由基清除率。
Figure 18. DPPH scavenging of different ethyl acetate cosolvent contents.
53
6. 不同含量正己烷共溶劑之超臨界萃取物對 0.5 mM DPPH 自由基清除試驗結 果
DPPH 自由基清除試驗中，取 100 μL 之 0.5 mM DPPH 溶液與 100 μL 濃 度 5 mg/mL 之不同含量正己烷共溶劑萃取物於 96 孔盤中混合，避光反應 60 分鐘後，以波長 517 nm 測吸光值，其結果如圖二十所示。
不同含量正己烷共溶劑萃取物中，加入 12 % 正己烷共溶劑之條件有最佳 DPPH 自由基清除力 59.81 ± 0.39 %，其次為 15 % 正己烷共溶劑之條件，其 DPPH 自由基清除力為 59.40 ± 0.38 % ， 9 % 、 6 % 與 3 % 之 DPPH 自由基 清除力低於未加入共溶劑之條件 ( 58.35 ± 0.44 % )，分別為 55.77 ± 0.16 %、
53.42 ± 0.27 % 與 46.67 ± 0.65 %。
圖十九、不同含量正己烷共溶劑超臨界萃取物之 DPPH 自由基清除率。
Figure 19. DPPH scavenging of different hexane cosolvent contents.
54
7. 濃度效應測試
選取 0.5 mM DPPH 自由基清除試驗中，清除率高於 80 % 之組別進行測試，
選取之組別為甲醇共溶劑 9 %、12 %、15 % 以及丙酮共溶劑 3%，將樣品回溶 使其濃度為 125 、 250 、 500 、 1000 與 5000 μg/mL，取 100 μL 各濃度樣 品與 100 μL 之 0.5 mM DPPH 進行混合，避光反應 60 分鐘後，以波長 517 nm 測其吸光值，各樣品 EC50 結果如圖二十一至圖二十五所示。
9 % 甲醇共溶劑萃取物，序列稀釋後濃度分別為 125 、 250 、 500 、 1000 與 5000 μg/mL，其 DPPH 自由基清除率分別為 12.41 ± 0.03 ％ 、 18.72 ± 1.57
％ 、 27.24 ± 0.49 % 、 42.05 ± 0.82 ％ 和 88.90 ± 0.80 ％。取濃度 1000 和 5000 μg/mL 之 DPPH 自由基清除率數值進行回歸曲線分析，所得公式為 y = 0.0117x + 30.339，經換算後 9 %甲醇共溶劑萃取物之 EC50 為 1680.43 μg/mL。
圖二十、不同濃度之 9 % 甲醇共溶劑萃取物對 DPPH 自由基清除率。
Figure 20. DPPH scavenging of 9 % methanol cosolvent extracts with different
concentrations.55
12 % 甲醇共溶劑萃取物，序列稀釋後濃度分別為 125 、 250 、 500 、 1000 與 5000 μg/mL，其 DPPH 自由基清除率分別為 10.44 ± 0.18 ％ 、 14.77 ± 0.87
％ 、 22.69 ± 0.15 % 、 33.82 ± 0.37 ％ 和 86.45 ± 0.59 ％。取濃度 1000 和 5000 μg/mL 之 DPPH 自由基清除率數值進行回歸曲線分析，所得公式為 y = 0.0132x + 20.667，經換算後 12 % 甲醇共溶劑萃取物之 EC50 為 2222.2 μg/mL。
圖二十一、不同濃度之 12 % 甲醇共溶劑萃取物對 DPPH 自由基清除率。
Figure 21. DPPH scavenging of 12 % methanol cosolvent extracts with different
concentrations.56
15 % 甲醇共溶劑萃取物，序列稀釋後濃度分別為 125 、 250 、 500 、 1000 與 5000 μg/mL，其 DPPH 自由基清除率分別為 23.92 ± 0.81 ％ 、 39.19 ± 0.54
％ 、 60.83 ± 0.76 % 、 91.07 ± 1.02 ％ 和 99.45 ± 0.23 ％。取濃度 250 和 500 μg/mL 之 DPPH 自由基清除率數值進行回歸曲線分析，所得公式為 y = 0.0854x + 18.14，經換算後 15 % 甲醇共溶劑萃取物之 EC50 為 373.07 μg/mL。
圖二十二、不同濃度之 15 % 甲醇共溶劑萃取物對 DPPH 自由基清除率。
Figure 22. DPPH scavenging of 15 % methanol cosolvent extracts with different
concentrations.57
3 % 丙酮共溶劑萃取物，序列稀釋後濃度分別為 125 、 250 、 500 、 1000 與 5000 μg/mL，其 DPPH 自由基清除率分別為 13.34 ± 0.27 ％ 、 17.39 ± 0.89
％ 、 25.46 ± 0.95 % 、 40.26 ± 0.08 ％ 和 97.50 ± 1.10 ％。取濃度 1000 和 5000 μg/mL 之 DPPH 自由基清除率數值進行回歸曲線分析，所得公式為 y = 0.0143x + 25.947，經換算後 3 % 丙酮共溶劑萃取物之 EC50 為 1682.03 μg/mL。
圖二十三、不同濃度之 3 % 丙酮共溶劑萃取物對 DPPH 自由基清除率。
Figure 23. DPPH scavenging of 3 % acetone cosolvent extracts with different
concentrations.58
濃度效應試驗中，以抗壞血酸 ( ascorbic acid ) 做為對照組，其 EC50 為 13.96 μg/mL，而本次實驗中 9 % 甲醇共溶劑 之 EC50 為1680.43 μg/mL，12 % 甲醇共溶劑之 EC50 為2222.2 μg/mL，15 % 甲醇共溶劑之 EC50 為373.07 μg/mL，
3 % 丙酮共溶劑之 EC50 為1682.03 μg/mL，由結果得知，超臨界二氧化碳流體 萃取中添加 15 % 甲醇共溶劑可以有效提高臺灣真柏針葉萃取物之抗氧化活 性。
圖二十四、9 %、12 %、15 % 甲醇與 3 % 丙酮之 EC50 比較。
Figure 24. EC
50 of 9 %、12 %、15 % methanol and 3 % acetone cosolvent extracts.59
第三節、抗菌能力探討