MDR-TB 的篩檢

收集台灣台中市芮弗士醫事檢驗所於2003年7月至2007年6月進

行抗酸菌培養、鑑定及藥物感受性試驗之所有臨床檢體進行分析，

以取得MDR-TB檢體做為後續相關分析檢體來源。樣本來源北起基

隆市，南至屏東縣，含括台灣西部各縣市，收集單位包含區域級醫 院、地區級醫院、診所及檢驗所等，於P2級負壓實驗室中進行抗酸 菌培養、鑑定及M. tuberculosis藥物感受性試驗。取得MDR-TB檢體 的過程主要分為抗酸菌培養、抗酸菌鑑定、M. tuberculosis藥物感受 性試驗三大類

(1) 抗酸菌培養

M. tuberculosis為Mycobacterium species中的其中一種菌，屬於抗

酸性菌，Mycobacterium species中又可分為快速生長菌及慢速生長 菌，為了避免遺漏故先培養出抗酸菌後，再將陽性樣本鑑定是否為 M. tuberculosis。

由於抗酸菌的生長特性與一般細菌不同，因此培養抗酸菌傳統 上是以L-J slant做為培養基的選擇⁽²⁸⁾，但由於以L-J slant進行抗酸菌

培養時，陰性報告需費時56天，陽性報告也約需要21天以上才可得

知結果，這對M. tuberculosis這種屬於法定傳染病臨床診斷上的協助 便受到時間的限制，因此，利用以Middlebrook 為基礎的液體培養基 (Mycobacteria Growth Indicator Tube；MGIT) ⁽²⁸⁾做為抗酸菌培養的培 養基選擇，配合自動化儀器(BACTEC MGIT 960 System)的偵測可以 大幅縮短抗酸菌培養的陰性結果確認時間為42天⁽³⁰⁾，且陽性報告的 時間也縮短至平均約為12天，本實驗便選擇MGIT做為培養基並利用 BACTEC MGIT 960儀器進行偵測^{(28). (29)}。

MGIT的偵測原理為：MGIT試管內含有豐富的養份Middlebrook 7H9 broth、及Ruthenium含氧分子的螢光劑，並外加生長增殖液 OADC（oleic acid、albumin、dextrose、catalase）與PANTA（polymyxin B、amphotericin B、nalidixic acid、trimethoprim、azlocillin）抗生素 避免其他細菌的污染。在MGIT瓶子底部有16 x 100 mm的矽酮樹 脂，裡頭含有螢光化合物。 最初，大量分解出來的氧抑制了螢光，

管置入BACTEC MGIT 960系統中之後，便持續培養在37℃且每60分 生長補充劑以及 MGIT PANTA混合抗生素以避免來自檢體的污染

(31)。

時，需要正確的培養與鑑定來區別。Mycobacterium可分為結核菌群 (Mycobacterium tuberculosis complex , TB complex)和NTM兩大類。

TB complex包含M. tuberculosis

、

、

、

及M. canetti。NTM叉可依生長速度分為快速生長菌群(七天以內可形 成菌落)和緩慢生長菌群(七天以上形成菌落) ⁽²⁸⁾。TB complex常見者

為M. tuberculosis和M. bovis。M. tuberculosis是人類肺結核之主要病原 菌，約佔85%的人體Mycobacterium感染，也是最急需要鑑定出來的 菌種⁽²⁹⁾。

抗酸菌的鑑定除一般細菌的特性觀察外，標準方法為利用生化 反應來進行鑑定。細菌一般特性觀察包含生長速率、產色性、染色 型態等，生化反應則以niacin test及nitrate reduction二項試驗做為鑑定 的依據。若無法確認時再以分子生物學方法或近來研發利用M.

行M. tuberculosis的鑑定確認，其原理是利用Strand Displacement

(4) M. tuberculosis藥物感受性試驗

利 用Canetti 等 人 所 建 立 的 標 準 方 法 比 例 法 (agar proportion method)針對M. tuberculosis進行藥物感受性試驗⁽³⁶⁾，此方法為目前被 使用最為廣泛的方法，其是以Middlebrook 7H10 Agar為基質，能定 量待測結核分枝桿菌所佔的比例，在美國被認定為標準測試方法。

利用目前常用的第一線抗結核藥物進行試驗，共有四種，包含 streptomycin、isoniazid、rifampin、ethambutol等四種藥物，所使用濃

度如表一內容所示，除rifampin為單一濃度1.0 ug/ml外，其餘三項藥 物皆包含有高、低二種濃度，streptomycin低濃度為0.2 ug/ml，高濃 度為1.0 ug/ml，isoniazid低濃度為2.0 ug/ml，高濃度為10 ug/ml，

ethambutol低濃度為5.0 ug/ml，高濃度為10 ug/ml。

除了以比例法針對streptomycin、isoniazid、rifampin、ethambutol

等四種藥物進行M. tuberculosis的藥物感受性試驗外，也以BACTEC MGIT^TM 960儀器利用pyrazinamide藥敏試劑組操作pyrazinamide的藥 物感受性試驗，所測試藥物濃度為100 ug/mL。以BACTEC MGIT^TM 960儀器操作本項藥物的原因為pyrazinamide必須在弱酸性的環境下 agar proportion method的方法同時操做了clofazimine此項藥物來針對 結核分枝桿菌進行藥物感受性試驗，選用此項藥物的原因是此藥物 應用於痲瘋桿菌的治療，由於痲瘋桿菌與結核分枝桿菌是目前會感

染人類後致病的主要抗酸菌，希望此項藥物也能有效用於治療M.

tuberculosis。