Trip6 蛋白質在小鼠腦中之表現

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圖 1. Trip6 蛋白質在胚胎及成年小鼠大腦中的表現

A. NIH3T3 細胞經由轉染的方式將控制組的 scrambled shRNA 或削 弱組的 shTrip6 的質體轉入。隔夜，將之固定並進行免疫螢光染色。

紅色標定的為 Trip6 蛋白質或小鼠 IgG 蛋白質；細胞核則由藍色的 DAPI 標定；而成功轉入質體的細胞則會表現綠螢光蛋白。箭號指出 的為 Trip6 蛋白質的焦點連接分子；白色虛線包圍的細胞(C1)為成功 轉入 shTrip6 質體的細胞；藍色虛線包圍的細胞則為未成功轉入 shTrip6 質體的細胞，比例尺為 10 μm。 B. 將 NIH3T3 細胞的 Trip6 蛋白質表現量削弱後以西方墨點確認之，-actin 為 internal control。

C. 抽取 E16.5 和成年小鼠大腦的總量 RNA，以 RT-PCR 檢測 Trip6 蛋白質的 mRNA 表現量。 D. 抽取 E16.5 和成年小鼠大腦的總量蛋 白質，以西方墨點檢測 Trip6 蛋白質的表現量，GAPDH 蛋白質為 internal control。

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圖 2. Trip6 蛋白質在 E16.5 小鼠大腦中的神經幹細胞裡表現

將 E16.5 小鼠大腦切片以免疫螢光染色的方法標定 Trip6 蛋白質(綠 色)、Sox2(紅色)或 Ki67(紅色)；細胞核則以 DAPI 標定(藍色)；

*：為人為染色誤差。 A. 以低放大倍率的共軛焦顯微鏡鏡頭拍攝 Trip6 蛋白質和 Sox2 在 VZ 的表現情況。 B&C. 為圖 2A 以較高的 放大倍率所拍攝的影像，圖 2B 為 VZ 的背側(dorsal)，圖 2C 為 VZ 的腹側(ventral)。 D. Trip6 蛋白質與 Ki67 於 VZ 背側(dorsal)的染色 情況，箭號指出 Trip6 蛋白質與 Ki67 共表現的細胞。 E. 表現 Trip6 蛋白質的細胞同時也表現 Sox2 或 Ki67 的百分比定量圖 (N=3)。圖 2A 比例尺為 40 µm 且圖 2B、C 和 D 比例尺為 20 µm。

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圖 3. Trip6 蛋白質在成年小鼠腦室下區中的神經幹細胞裡表現 A. 成年小鼠腦室下區的切片以免疫螢光染色標定 Trip6 蛋白質(綠 色)和標定 Sox2(紅色)。 B. 成年小鼠顆粒下層區的切片以免疫螢光 染色標定 Trip6 蛋白質(綠色)。 C. 成年小鼠腦室下區的切片以免疫 螢光染色標定 Trip6 蛋白質(綠色)和標定幹細胞標誌 Sox2(紅色)以及 細胞核以 DAPI(藍色)標定。 D. 為圖 3C 以較大放大倍率所拍攝。

D’. 另一組以較大放大倍率所拍攝的 Trip6 蛋白質和 Sox2 在背側腦 室區的影像。 E. 成年小鼠腦室下區的切片以免疫螢光染色標定 Trip6 蛋白質(綠色)和標定細胞增殖標誌 Ki67(紅色)以及細胞核以 DAPI(藍色)標定。 F. 為圖 3E 以較大放大倍率所拍攝。G. 成年小 鼠腦室下區的切片以免疫螢光染色標定 Trip6 蛋白質(綠色)和標定 S100β(紅色)以及細胞核以 DAPI(藍色)標定。 H. 為圖 3G 以較大放 大倍率所拍攝。 I. 表現 Trip6 蛋白質的細胞同時也分別表現 Sox2、

Ki67 或 S100β 的百分比定量圖 (N=3)。箭號指出雙重標定的細胞；

LV：lateral ventricle；ST：striatum。圖 3A&B 的比例尺為 50 µm；

圖 C、E 和 G 的比例尺為 15 µm；圖 D、D’、F 和 H 的比例尺為 10 µm。

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圖 4.在成年小鼠大腦中的神經元、星狀細胞和小膠質細胞並不表 現 Trip6 蛋白質

成年小鼠大腦組織切片進行免疫螢光染色。 A. 成年小鼠 SVZ 的切 片以免疫螢光染色標定 Trip6 蛋白質(綠色)和標定 DCX(紅色)，細胞 核以 DAPI(藍色)標定。 B. 成年小鼠 SVZ 的切片以免疫螢光染色標 定 Trip6 蛋白質(綠色)和標定 MAP2(紅色)，細胞核以 DAPI(藍色)標 定。 C. 成年小鼠 SVZ 的切片以免疫螢光染色標定 Trip6 蛋白質(綠 色)和標定 GFAP(紅色)，細胞核以 DAPI(藍色)標定。 D. 成年小鼠 SVZ 的切片以免疫螢光染色標定 Trip6 蛋白質(綠色)和標定 Iba1(紅 色)，細胞核以 DAPI(藍色)標定。 箭號指出 Trip6 蛋白質標定的訊 號；箭頭分別指出 DCX、MAP2、GFAP 或 Iba1 的標定訊號；圖 4A、C 和 D 的比例尺為 10 µm，圖 4B 的比例尺為 20 µm。

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二、 建立人類惡性腫瘤之斑馬魚異體移植模式

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圖 5. 受精後兩天之斑馬魚胚胎注射 U251 細胞株

以斑馬魚之胚胎注射 U251 細胞株來觀察血管新生作用的現象以及 其存活率。 A. 注射 U251 細胞之魚隻 B. 注射 U251 細胞的魚隻 發生血管新生作用。 C. 為其生存率的統計圖。(*：p-value <

0.05)

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圖 6. 受精後兩天之斑馬魚胚胎注射 U373 細胞株

以斑馬魚之胚胎注射 U373 細胞株來觀察血管新生作用的現象。 A.

注射培養 U373 細胞株之培養液且含有 20% matrigel 的魚隻 B. 注射 U373-SC 細胞的魚隻 C. 注射 U373-siRac1 細胞的魚隻。 D. 注射 U373-siRac2 細胞的魚隻。 E. 注射 U373-siRac3 細胞的魚隻。

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圖 7. 受精後兩天之斑馬魚胚胎注射 U373 細胞株

以斑馬魚之胚胎注射 U373 細胞株統計其血管新生作用的現象以及 存活率。 A. 分別為圖 6C、6D 和 6E 注射 U373-SC 與 U373-siRac1 or 2 or 3 之發生血管新生作用的魚隻數量統計圖。 B. 分別為圖 6C、6D 和 6E 注射 U373-SC 與 U373-siRac1 or 2 or 3 之生存率統計 圖。(*：p-value < 0.05；**：p-value < 0.01)

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圖 8. 受精後兩天之斑馬魚胚胎注射 Hep3B 細胞株

以斑馬魚之胚胎注射 Hep3B 細胞株來觀察細胞遷移的現象。 A. 左 邊直行為注射培養 Hep3B 細胞之培養液的魚隻，右邊直行為注射 Hep3B 細胞的魚隻。 B. 為發生細胞遷移現象魚隻的統計圖。